檢驗科血清葡萄糖測定標準操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-023版本/修訂號：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導書生效日期：20110701第4頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01葡萄糖測定標準操作規(guī)程1檢驗申請單獨檢驗項目申請：空腹血清葡萄糖測定(縮寫GLU)，餐后2h葡萄糖測定，各種體液葡萄糖測定；組合項目申請：葡萄糖耐量試驗(縮寫OGTT)。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2標本采集與處理2.1標本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5下列標本為不合格標本2.1.5.1標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4抽血后室溫放置超過4h以上的標本。2.1.5.5靜脈滴注大劑量維生素C后立即抽血的標本。2.1.5.6其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2標本保存2.2.1接收標本后在30min內(nèi)將標本離心分離出血清，并及時將血清與血球分離。2.2.2標本保存時間：不抗凝血標本如血清未與血塊分開，共存同一試管中，室溫（15～25℃）下血清葡萄糖很不穩(wěn)定，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定1天。加氟化鈉的血液標本室溫（15～25℃）下穩(wěn)定4h。2.2.3已完成測試的標本保持完整的識別號，單獨分離出血清后，密閉置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標本采集的注意事項2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹狀態(tài)。檢查空腹血清葡萄糖的須在禁食12h以上早晨抽血。2.3.2餐后2h葡萄糖檢查，受檢者于餐后2h準時抽血。2.3.3葡萄糖耐量試驗檢查的血液標本，在服用75克葡萄糖后，分別于0.5h、1h、2h及3h準時抽血。2.3.4為了避免葡萄糖被酵解，單獨測定葡萄糖時，血標本可氟化鈉-草酸鉀抗凝，氟化鈉用量為1.5mg/ml血。3方法原理在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和三磷酸腺苷（ATP）發(fā)生磷酸化反應，生成葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和二磷酸腺苷（ADP）。G-6-P在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）催化下脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)脂（6-PGA），同時使NADP+還原成NADPH+H+。反應式如下：GLU+ATPG-6-P+ADPG-6-P+NADP+6-PGA+NADPH+H+反應中NADPH的生成速率和生成量與葡萄糖濃度成正比，在波長340nm監(jiān)測吸光度的升高值(ΔA)，可計算血清中葡萄糖濃度。4試劑及其他用品4.1試劑：葡萄糖測定（HK法）試劑盒（貨號GL6211），由北京利德曼生化股份有限公司出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定14天。開蓋后避免污染。當試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀，或空白吸光率＞0.5時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準備。4.4試劑盒主要成分：ATP4mmol/L，NAD+3mmol/L，己糖激酶＞100U/ｍL，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶＞300U/ｍL，同時含有穩(wěn)定劑與保護劑。5校準品與校準模式5.1校準液：Beckman-CoulterSYNCHRONLXMULTI校準液(P/N442600）,其濃度可溯源至美國國家標準技術研究所（NIST）標準參考材料。5.2校準類型和校準點數(shù)目：線性模式，1個校準點。5.3校準周期：校準間隔時間不限。但在：①更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時；②儀器進行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后，進行一次校準。5.4校準液重建方法：Beckman-CoulterSYNCHRONLXMULTI校準液即開即用，無需特殊準備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無需特殊準備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標本中測定兩個水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質(zhì)控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結果復核→報告。主要分析參數(shù)參見說明書。10結果計算葡萄糖濃度（mmol/L）＝×校準液葡萄糖濃度（mmol/L）儀器根據(jù)此公式自動給出每個標本測定結果。11檢驗結果的報告及范圍11.1結果的報告11.1.1結果經(jīng)審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3如收到標本的質(zhì)量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：0～38.9mmol/L，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本稀釋后重復測定的結果。A12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV＜5.0%,總CV＜6.0%。12.2準確度：回收率99.4%～101.6%。12.3線性范圍:0～38.9mmol/L。12.4方法的有限性及干擾因素：特異性相當高，干擾少。是葡萄糖測定的參考方法。嚴重溶血（Hb2～5.12g/L）使紅細胞內(nèi)有機磷酸酯及一些酶類釋放，消耗NADP+，可致葡萄糖測定值下降6.6～32%。13參考范圍及醫(yī)學決定水平13.1參考范圍空腹血糖：3.9～6.1mmol/L腦脊液：兒童2.8～4.5mmol/L；成人2.5～4.5mmol/L尿液葡萄糖：24h尿糖為0.56～1.67mmol。13.2醫(yī)學決定水平血糖濃度6.12～7.00mmol/L（110～126mg/dl）為空腹血糖受損；≥7.0mmol/L（126mg/dl）為糖尿病診斷標準；隨機血糖濃度>33.3mmol/L（600mg/dl）為糖尿病非酮癥高滲綜合癥，<2.8mmol/L（50mg/dl）考慮低血糖癥。14臨床意義14.11997年ADA（WHO）的糖尿病診斷標準中，空腹血漿GLU（FPG）≥7.0mmol/L，或OGTT2h血漿GLU≥11.1mmol/L，是糖尿病的實驗室診斷指標。FPG濃度如超過參考范圍的上限6.1mmol/L，但低于7.0mmol/L，稱為空腹血糖異常。14.2除糖尿病外，血糖濃度升高還可發(fā)生在垂體前葉功能亢進、生長激素或促腎上腺皮質(zhì)激素分泌過多、或腎上腺髓質(zhì)腫瘤等情況中。14.3血液葡萄糖濃度測定是糖尿病的診斷指標，但并不是糖尿病人的較好的或必做的監(jiān)測指標。診斷明確的糖尿病人如需評價降糖藥物的療效或調(diào)整劑量，對病情作監(jiān)測，可選用其他檢查項目例如定期監(jiān)測糖化血紅蛋白等。14.4病理性低血糖可因胰島β細胞增生或瘤等，使胰島素分泌過多所致；也可見于對抗胰島素的激素分泌不足的情況，如垂體前葉功能減退、腎上腺皮質(zhì)功能減退而使生長激素、腎上腺皮質(zhì)激素分泌不足等。嚴重肝病患者可因肝臟儲存糖原及糖異生功能下降，肝臟不能有效地調(diào)節(jié)血糖而出現(xiàn)低血糖。15結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2認真審核每一個測定結果，審核者對發(fā)出報告結果的準確性和可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關項目：審核與糖化血白蛋白、糖化血清蛋白等的關系，其他一些應用Trinder反應的檢測項目如膽固醇、甘油三酯、尿酸等是否有共同降低的情況(如有此現(xiàn)象應排除維生素C干擾的可能)。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定：按危急值報告制度執(zhí)行。16.1血糖濃度＞33.3mmol/L。有可能是因胰島素缺乏引起的糖尿病性昏迷，發(fā)展為滲透性多尿伴嚴重的脫水和酮中毒。16.2血糖濃度＜2.78m