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玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號:JYK-3-SH-041版本/修訂號:C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期:20110701第1頁共4頁編寫制定日期審核審核日期:核準執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-0141、體液總蛋白測定標準操作規(guī)程1檢驗申請單獨檢驗項目申請:腦脊液與尿總量蛋白(CSF),臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2標本采集與處理采集與處理2.1受檢者的準備:尿樣:采用尿樣品隨機收集或收集24小時。腦脊液:采用腰椎穿刺。要嚴格掌握禁忌證、凡疑有顱內(nèi)壓升高者必須做眼底檢查,如有明顯視乳頭水腫或有腦疝先兆者,禁忌穿刺。凡病人處于休克、衷竭或瀕危狀態(tài)以及局部皮膚有炎癥、顱后窩有占位性病變或伴有腦干癥狀者均禁忌穿刺。2.2樣本準備:腦脊液由臨床醫(yī)師進行腰椎穿刺采集,必要時可從小腦延腦池或側(cè)腦室穿刺獲得。穿刺后應(yīng)由醫(yī)師用壓力測定,正常人腦脊液壓力臥位為0.78-1.76kpa(80-180mmH2O),兒童為0.4-1.0kpa(40-100mmH2O)。任何病變使腦組織體積或腦脊液量增加時,腦脊液壓力均可升高。待壓力測定后將腦脊液分別收集于3個無菌試管中,第一管作細菌培養(yǎng),第二管作化學(xué)分析和免疫學(xué)檢查,第三管作一般性狀及顯微鏡檢查。每管收集1-2毫升。腦脊液標本必須立即送驗及時檢查,放置過外將影響檢驗結(jié)果,是細胞破壞、變性、或細胞包裹于纖維蛋白凝塊中,導(dǎo)致細胞數(shù)降低、分類不準確等。存放中的腦脊液葡萄糖會分解,使之含量降低;細菌自溶或殘廢可影響細菌檢出率等。2.3抗凝劑:不使用抗凝劑。2.4標本處理:2.4.1尿樣品隨機收集或收集24小時。儲存在2-8℃或冰凍穩(wěn)定至測定前。2.4.2腦脊液樣品中不能有溶血。儲存在2-8℃可穩(wěn)定數(shù)天。3方法原理連苯三酚紅與鉬酸結(jié)合形成紅色復(fù)合物,在467nm有最大吸收。當(dāng)這個復(fù)合物在酸性條件下與蛋白結(jié)合形成藍紫色復(fù)合物,在598nm有最大吸收。通過在600nm檢測生成物的吸光度,可以測量出樣本中總蛋白的含量。4試劑及其他用品組成溶液濃度連苯三酚紅緩沖液2.4mg/dlPH=2.5鉬酸鈉0.96mg/dl表面活性劑5校準品與校準模式5.1校準品:利德曼專用配套定標液。5.2校準類型和校準點數(shù)目:線性模式,1個校準點。5.3校準周期:校準間隔時間不限,試劑換批號使用時或質(zhì)控結(jié)果超過規(guī)定的2SD范圍,需要定標。5.4校準液重建方法:校準液即開即用,無需特殊準備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用自配未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法:分裝冰凍質(zhì)控血清,復(fù)溶即用,無需特殊準備。6.3質(zhì)控品測定:在每星期一或更換試劑時測質(zhì)控血清一次。6.4質(zhì)控規(guī)則:采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則,由計算機程序進行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況,按室內(nèi)質(zhì)控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正,并在確認重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質(zhì)控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結(jié)果復(fù)核→報告。9主要分析參數(shù)參見說明書。10結(jié)果計算A標準c=ΧCOA標準AA測定A標準尿總蛋白(mg):c=ΧCOΧVdlA標準式中:c——測定蛋白濃度,mg/dL;A測定——標本管吸光度;A標準——標準管吸光度;CO——校準液中蛋白濃度,mg/dL;Vdl:二十四小時尿液體積11檢驗結(jié)果的報告及范圍11.1結(jié)果的報告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標明結(jié)果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名,并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍:0~2mg/L,超過此范圍的結(jié)果報告時必須附有證明該結(jié)果準確可靠的文字說明,例如:系根據(jù)標本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度:批內(nèi)CV<3.13%,批間CV<4.80%。(使用濃度為80mg/dl以上的標本)12.2線性范圍:0~2mg/L。12.3靈敏度:當(dāng)CSF濃度為100mg/dL時,顯色吸光度A600約為0.384~0.427。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平腦脊液蛋白:0.15-0.45mg/l;尿蛋白:0-150mg/24小時。隨機尿液正常值范圍為:0.01~0.14mg/l。14臨床意義14.1尿總蛋白的測定是鑒別腎病的重要指標。尿總蛋白含量升高常見于腎小球滲透性過高、腎小管重吸收不全和蛋白分泌素異常等。14.2腦脊液蛋白和特異蛋白的測定常用于鑒別血液/腦屏蔽到血漿蛋白中滲透量的增加或鞘內(nèi)的免疫球蛋白分泌素的增加。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負責(zé)檢驗結(jié)果的審核。15.2認真審核每一個測定結(jié)果,審核者對發(fā)出報告結(jié)果的準確性和可靠性負責(zé),并在報告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項目:審核如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況,應(yīng)分析與查找原因。無威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott生化分析儀儀器標準操作規(guī)程。17.2生化檢驗室內(nèi)質(zhì)控標準操
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