可復(fù)制型慢病毒檢測共性問題與技術(shù)要求

可復(fù)制型慢病毒檢測共性問題與技術(shù)要求1 2 3 3 4 6 2接作為載體產(chǎn)品用于人體，也可以介導(dǎo)目的基因在靶細(xì)胞過改造和優(yōu)化，比如刪除非必需基因、刪除長與轉(zhuǎn)錄起始相關(guān)的區(qū)域、減少轉(zhuǎn)移質(zhì)粒與包同源性、降低質(zhì)粒載體/輔助基因序列與包裝細(xì)胞DNA之間的同源性、將輔助基因序列分離于不同的質(zhì)粒/非同源重組形成可復(fù)制型慢病毒（ReplicationcomRCL可能產(chǎn)生的產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險、對患者的使用多個質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染細(xì)胞用于慢病毒載體的生產(chǎn)。目前以HIV-1病毒骨架結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)并采用水皰型口炎病毒糖蛋白行包膜替換的慢病毒載體在臨床上得到廣泛應(yīng)用，下述內(nèi)容旨在針對這類慢病毒載體系統(tǒng)的RCL檢測問題提出一般性技術(shù)要求，但不包含體外轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞RCL檢測相關(guān)技術(shù)要求。3終末細(xì)胞同時檢測或選擇其一？每個生產(chǎn)批次的病毒載體慢病毒載體通常采用多個質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行生產(chǎn)。質(zhì)粒可能在細(xì)胞中發(fā)生同源序列重組形成具有復(fù)制能力的組也可能發(fā)生同源或者非同源重組形成具有復(fù)制能力的病4建議每個臨床試驗(yàn)用批次和商業(yè)化生產(chǎn)批次的病毒載體上按照慢病毒實(shí)際的商業(yè)化生產(chǎn)工藝情況以及取樣量計算的要求，可能存在未處理的病毒載體上清液取樣量較大，5體外轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞數(shù)量等代入公式進(jìn)行計算。如果未處理的病毒載體上清液或經(jīng)濃縮處理的病毒載體上清液，由于以上樣品滴度與病毒成品滴度存在差異，因大體積的未處理病毒載體上清液或經(jīng)濃縮處理的病毒載體實(shí)際檢測體積建議以未處理的病毒載體上清液或經(jīng)濃縮處作為體內(nèi)基因治療的產(chǎn)品定義為臨床一次給藥的最大劑量；6生產(chǎn)終末細(xì)胞指收獲病毒載體上清液階段分離的細(xì)胞缺少輔助基因的病毒可能相比野生型病毒生長速度有7檢測可以盡可能確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。如果在擴(kuò)增階段有充分?jǐn)?shù)據(jù)證明連續(xù)傳代培養(yǎng)可以去除殘留的蛋白方法不受質(zhì)粒及蛋白殘留的影響，或者在擴(kuò)增以觀察到細(xì)胞病變，則可不進(jìn)行指示期。如不潛在的RCL，在擴(kuò)增培養(yǎng)結(jié)束后對共培養(yǎng)物進(jìn)行8用替換為VSV-G包膜蛋白的HIV作為陽性病毒比使用野生型表明RCL與VSV-G包膜蛋白的HIV具有相似的生長特性和理9測定用樣品可能在病毒滴度、基質(zhì)成分等方面均存在不同，且研究發(fā)現(xiàn)高滴度慢病毒上清液可能對共培養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增系作為共培養(yǎng)細(xì)胞。目前C8166細(xì)胞是比較公認(rèn)的替換為VSV-G包膜蛋白的HIV病毒易感的細(xì)胞系，建議優(yōu)先選擇性、檢測限、耐用性等，專屬性應(yīng)考慮陽