紫外可見分光光度計(jì)維生素B12含量測定教學(xué)講義

實(shí)驗(yàn)一工作曲線繪制

及維生素B12含量的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解紫外吸收光譜在有機(jī)結(jié)構(gòu)分析的應(yīng)用。2、學(xué)習(xí)有機(jī)物的定量分析方法。比耳定律當(dāng)入射光的波長、液層厚度和溶液的溫度固定時,溶液的吸光度與溶液的濃度成正比。朗伯特定律當(dāng)入射光的波長、溶液的濃度及溫度一定時,溶液的吸光度與液層的厚度成正比。二、實(shí)驗(yàn)原理

許多有機(jī)化合物在紫外具有特征的吸收光譜，從而可以用來進(jìn)行有機(jī)物的鑒定及結(jié)構(gòu)分析（鑒定有機(jī)化合物的官能團(tuán)）；此外，還可對同分異構(gòu)體進(jìn)行鑒別。對具有π健電子及共軛雙鍵的化合物特別靈敏，且在紫外光區(qū)具有強(qiáng)烈吸收。該法在有機(jī)物分析中可進(jìn)行：

（1）純度檢查；（2）未知樣品的鑒定；（3）分子結(jié)構(gòu)的推測；（4）互變異構(gòu)的判別；（5）定量測定。三、儀器組成

紫外-可見光度計(jì)儀器由光源、單色器、吸收池和檢測器四部分組成。

1、光源

對光源基本要求：足夠光強(qiáng)、穩(wěn)定、連續(xù)輻射且強(qiáng)度隨波長變化小。

（1）鎢及碘鎢燈：340～2500nm，多用在可見光區(qū)；

（2）氫燈和氘燈：160～375nm，多用在紫外區(qū)。2、單色器(Mnochromator)

與原子吸收光度儀不同，在紫外可見分光光度計(jì)中，單色器通常置于吸收池的前面！(可防止強(qiáng)光照射引起吸收池中一些物質(zhì)的分解)單色器：是分光光度計(jì)的關(guān)鍵部件，主要任務(wù)是將光源發(fā)來的混合光分解為單色光，并提供所需波長的光。3、吸收池(Cell，Container)：

用于盛放樣品。可用石英或玻璃兩種材料制作，前者適于紫外區(qū)和可見光區(qū)；后者只適于可見光區(qū)。有些透明有機(jī)玻璃亦可用作吸收池。4、檢測器：

硒光電池

光電二極管

光電倍增管四、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑1、儀器：UV-2501型紫外-可見分光光度計(jì)（Simazu公司）；1cm石英比色皿2、試劑：維生素B12注射液：100mg/ml五、試劑配制與測定1、配制標(biāo)準(zhǔn)系列：取維生素B12標(biāo)準(zhǔn)溶液100mg/mL

0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL分別置于50.00mL容量瓶中，用水稀釋至刻度；2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：用1cm石英比色皿，以空白為參比，在波長200～600nm內(nèi)測定標(biāo)準(zhǔn)溶液316nm處的吸光度A，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3、測定未知液：取未知液5.00mL置于50.00mL容量瓶中，用水稀釋至刻度；用1cm石英比色皿，測定316nm處吸光度A，以空白為參比。4、計(jì)算未知液的含量（mg·mL-1）。六、儀器安裝環(huán)境七、儀器使用注意事項(xiàng)：儀器操作過程出現(xiàn)異常情況，不得私自關(guān)閉電源，需由教師指導(dǎo)完成。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不準(zhǔn)來回跑動。不準(zhǔn)隨意搬動儀器。在測量狀態(tài)下，不得將手伸入測量室內(nèi)，以防紫外線灼傷！不準(zhǔn)私自調(diào)整實(shí)驗(yàn)室空調(diào)的設(shè)定溫度及風(fēng)速。同學(xué)操作時請注