TCFIAS 6006-2024 釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖和β-葡聚糖含量的測定 高效液相色譜法

Determinationofmannanandβ-glucaninsaccharomycescerevisiaecultu—Highperformanceliquidchromatogra本文件起草單位：北京英惠爾生物技術(shù)有限公司、北京市獸藥飼料監(jiān)測中心、河南海瑞術(shù)有限公司、北京三元種業(yè)科技股份有限公司飼本文件主要起草人：張亞軍、李賢、黃吉波、梁廷銀、任澤林、王宏、姚婷、曹林、候1釀酒酵母培養(yǎng)物中甘露聚糖和β-葡聚糖含量的測定高效液相色譜法5.31-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)。5.7PMP甲醇溶液(0.5mol/L):稱取0.871gP5.9鹽酸溶液(0.3mol/L):移取2.5mL鹽酸(5.2),加水溶解并稀釋至100mL,混勻。5.10鹽酸溶液(1+3):移取25mL鹽酸(5.2),加75mL水，混勻。5.11乙酸銨溶液(0.1mol/L,pH=5.5):稱取7.708g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1000mL,用鹽酸溶液(5.10)調(diào)節(jié)pH=5.5,混勻。25.12混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1mg/mL):稱取甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品(CAS號(hào)：3458-28-4,純度≥99%)和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(CAS號(hào)：50-99-7,純度≥98%)各0.1g(精確至0.0001g),置于同一個(gè)100mL容量瓶中，用水溶解并定容，混勻。2℃~8℃保存，有效期6個(gè)月。5.13混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.12)于容量瓶中，用水稀釋定容，混μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。臨用現(xiàn)配。6儀器設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測6.2分析天平：感量0.0001g。6.3立式電熱壓力蒸汽滅菌鍋。6.4pH計(jì)：精度±0.01。7試樣制備平行做兩份試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取0.5g～1.0g試樣(精確至0.0001mg),于250mL錐形瓶中，加入6.0mL鹽酸(5.2),混勻，再加入50mL水混勻，將錐形瓶放入蒸汽滅菌鍋，121℃下水解60min。取出后冷卻，用氫氧化鈉溶液(5.6)將溶液調(diào)為中性(pH≈7),然后用水定容至100mL。取適量用取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測溶液各400μL,依次加入PMP甲醇溶液(5.7)、氫氧化鈉溶液 8.3測定b)流動(dòng)相：0.1mol/L3d)柱溫：35℃;e)檢測器：紫外(或二極管陣列檢測器),檢測波長250nm;在儀器的最佳條件下，分別取衍生后的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(5.13)和試樣溶液(8.2)上機(jī)測定。在儀器的最佳條件下，試樣溶液中待測物的保留時(shí)間應(yīng)與混和標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(質(zhì)量濃度相當(dāng))中8.3.4定量在相同試驗(yàn)條件下，以甘露糖和葡萄糖混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中待測物的質(zhì)量濃面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液中待測線的線性范圍內(nèi)。如超出范圍，應(yīng)將試樣溶液用水稀釋后衍生，重新測定9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中甘露聚糖和β-葡聚糖的含量(X;)以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，數(shù)值以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)(%)表示。多點(diǎn)校準(zhǔn)按式(1)計(jì)算，單點(diǎn)校準(zhǔn)按式(2)計(jì)算：V試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL);m?試樣質(zhì)量，單位為克(g);V——試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL);m?——稱取試樣的質(zhì)量，單位為克(g);C——標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算術(shù)平均值的104(資料性)