T-XJZJXH 0004-2024 牛奶中糠氨酸的快速測定方法拉曼光譜法

ICS67.050CCSX16XJZJXH新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量檢驗檢測協(xié)會團體標準Thequalitativedeterminationoffurosineinmilkbysurface-enhancedlaserIT/XJZJXH0004—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試劑和材料 6儀器和設(shè)備 7測定步驟 28結(jié)果計算 39檢測方法靈敏度、準確度、精密度 3附錄A（資料性）標準物質(zhì)色譜圖及出峰時間 4T/XJZJXH0004—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所提出。本文件由新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量檢驗檢測協(xié)會歸口并組織實施。本文件起草單位：新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所。本文件協(xié)作單位：新疆畜牧科學(xué)院畜牧業(yè)質(zhì)量標準研究所。本文件主要起草人：劉圣紅、馬玉娥、何茜、郭萬慧、周曉龍、馬磊、孫小惠、古麗斯坦·阿布都拉、鄭偉華、姜娜。本文件實施應(yīng)用中的疑問，請咨詢新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所。對本文件的修改意見建議，請反饋至新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所（新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市沙依巴克區(qū)南昌路403號）。新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所聯(lián)系電話傳真郵編：8300911T/XJZJXH0004—2024牛奶中糠氨酸的快速測定方法拉曼光譜法本文件規(guī)定了利用拉曼光譜法快速檢測牛奶中糠氨酸的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、測定步驟、結(jié)果計算及檢測方法。本文件適用于生鮮牛乳、巴氏殺菌乳、UHT高溫滅菌乳中糠氨酸的快速檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理牛乳試樣經(jīng)鹽酸水解后測定蛋白質(zhì)含量，水解液經(jīng)稀釋后直接用于測定。樣品中的糠氨酸分子與表面增強試劑混合后，分子吸附在表面增強納米顆粒上，其拉曼散射信號可增強106倍以上，使用便攜式激光拉曼檢測儀可自動判別其特征峰并定性檢測出糠氨酸。通過對測定的拉曼譜圖進行基線調(diào)整和歸一化處理，應(yīng)用外標法可完成牛乳樣本中糠氨酸的定量分析。5試劑和材料以下所有試劑，除特別注明者外，均為分析純試劑，實驗用水應(yīng)符合GB/T6682中規(guī)定的一級水要5.1糠氨酸標準品CAS19746-33-9，純度大于99.5%。5.2表面增強試劑金納米溶膠。5.3無機鹽離子團聚劑1.0M鹽酸溶液。5.4糠氨酸標準儲備溶液將糠氨酸標準品按標準品證書提供的肽純度系數(shù)（NetPeptideContent）換算，用3mol/L鹽酸溶液配置成標準儲備液。-20℃條件下可儲存24個月。示例：糠氨酸標準品證書上標注肽純度系數(shù)為69.1%，則稱取7.24mg糠氨酸標準品，用3.0mol/L鹽酸溶液溶解并定容至10.0mL，標準儲備液的濃度為500.0mg/L。5.5檸檬酸鈉溶液準確稱取1g檸檬酸鈉，溶于水中，定容至100mL，檸檬酸鈉溶液的濃度為1%。6儀器和設(shè)備2T/XJZJXH0004—20246.1激光拉曼光譜儀儀器參考條件：激光波長785nm，激光功率200mW，積分時間5秒，平均次數(shù)2次。6.2微波消解儀微波消解儀配有聚四氟乙烯消解內(nèi)罐。6.3微波消解管微波消解管的量程為30mL。6.4分析天平分析天平的感量為0.001g，0.0001g。6.5移液槍移液槍的量程為5mL。6.6冷藏冰箱儲藏溫度范圍為4℃~10℃。7測定步驟測定步驟包括采樣、樣品制備、定性檢測、定量檢測。7.1采樣用于檢測的巴氏殺菌乳和運輸溫度為2℃~6℃,UHT滅菌乳儲存和運輸溫度不高于25℃。按GB/T10111的規(guī)定取不少于250.0mL樣品，樣品不應(yīng)受到破壞或者再轉(zhuǎn)運和儲藏期間發(fā)生變化。監(jiān)督抽查或仲裁檢驗等采樣應(yīng)到加工廠抽取成品庫的代銷產(chǎn)品，1周內(nèi)測定。7.2樣品制備7.2.1金納米粒子的合成準確量取2.424mL濃度為1%的HAuCl4溶液加入50.0mL水中，加熱煮沸。再加入1.5mL濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)加熱30min，冷卻至室溫，即可使用。金納米粒子的掃描電鏡圖和紫外吸收圖參見附錄A中圖A1。7.2.2試樣水解液的制備稱量1.000g（準確至0.001g）牛奶樣品，倒入聚四氟乙烯消解管中，加入10.0mL濃度為8N的鹽酸溶液，酸水解牛奶樣品，同時做試劑空白實驗，蓋消解管專用蓋后將消解管安裝至支架上，放入微波消解儀，按表1中的升溫程序進行微波消解，消解完成后冷卻至室溫，定容至25.0mL，過0.22μm水相濾膜，取濾液供上機測定。表1微波消解程序755557.3定性檢測在玻璃測試管中依次加入0.20mL待測液、0.05mL無機鹽團聚劑和0.20mL表面增強試劑，混勻后開始上機檢測。根據(jù)譜圖中904cm-1、1074cm-1、1150cm-1和1453cm-1處特征拉曼光譜，對牛奶中的糠氨酸進行評估：如同時存在上述特征峰，則可判定樣品中含有糠氨酸；否則，不能證明樣品中含有糠氨酸，需要進一步實驗驗證。牛奶中糠氨酸定性測定表面增強拉曼光譜圖參見附錄A中A2。3T/XJZJXH0004—20247.4定量檢測對測定的拉曼譜圖進行基線調(diào)整和歸一化處理，操作如下：a)首先將測定的拉曼光譜數(shù)據(jù)進行基線調(diào)整。b)以糠氨酸特征峰1150cm-1作為定量特征峰，對糠氨酸特征拉曼峰進行歸一化處理。c)歸一化后得到的特征拉曼峰的峰面積可根據(jù)當次實驗中糠氨酸標品特征峰測得的標準曲線進行定量。牛奶中糠氨酸定量測定表面增強拉曼光譜圖參見附錄A中A3-4。8結(jié)果計算按式（1）計算樣品中糠氨酸含量。式中：X—試樣中糠氨酸含量，單位為微克每千克(μg/kg）；c—從標準曲線得到的糠氨酸的濃度，單位為微克每升(μg/LV—樣品定容體積，單位為毫升（mL）；V1—加液體積，單位為毫升（mL）；V2—取液體積，單位為毫升（mL）；m—稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。9檢測方法靈敏度、準確度、精密度本檢測方法的靈敏度、準確度、精密度要求如下：9.1靈敏度本方法檢出限為0.05mg/kg，定量限為0.1mg/kg。9.2準確度本方法在0.5mg/L～50.0mg/L添加濃度水平上的回收率為70%～120%；9.3精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。4T/XJZJXH0004—2024標準物質(zhì)色譜圖及出峰時間A.1金納米粒子的紫外吸收見圖A.1。圖A.1金納米粒子紫外吸收圖A.2糠氨酸表面增強拉曼光譜見圖A.2。圖A.2糠氨酸表面增強拉曼光譜圖A.3