T-XJZJXH 0004-2024 牛奶中糠氨酸的快速測定方法拉曼光譜法

ICS67.050CCSX16XJZJXH新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量檢驗(yàn)檢測協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)Thequalitativedeterminationoffurosineinmilkbysurface-enhancedlaserIT/XJZJXH0004—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試劑和材料 6儀器和設(shè)備 7測定步驟 28結(jié)果計(jì)算 39檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 3附錄A（資料性）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖及出峰時(shí)間 4T/XJZJXH0004—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所提出。本文件由新疆維吾爾自治區(qū)質(zhì)量檢驗(yàn)檢測協(xié)會(huì)歸口并組織實(shí)施。本文件起草單位：新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所。本文件協(xié)作單位：新疆畜牧科學(xué)院畜牧業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所。本文件主要起草人：劉圣紅、馬玉娥、何茜、郭萬慧、周曉龍、馬磊、孫小惠、古麗斯坦·阿布都拉、鄭偉華、姜娜。本文件實(shí)施應(yīng)用中的疑問，請(qǐng)咨詢新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所。對(duì)本文件的修改意見建議，請(qǐng)反饋至新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所（新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市沙依巴克區(qū)南昌路403號(hào)）。新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所聯(lián)系電話傳真郵編：8300911T/XJZJXH0004—2024牛奶中糠氨酸的快速測定方法拉曼光譜法本文件規(guī)定了利用拉曼光譜法快速檢測牛奶中糠氨酸的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、測定步驟、結(jié)果計(jì)算及檢測方法。本文件適用于生鮮牛乳、巴氏殺菌乳、UHT高溫滅菌乳中糠氨酸的快速檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理牛乳試樣經(jīng)鹽酸水解后測定蛋白質(zhì)含量，水解液經(jīng)稀釋后直接用于測定。樣品中的糠氨酸分子與表面增強(qiáng)試劑混合后，分子吸附在表面增強(qiáng)納米顆粒上，其拉曼散射信號(hào)可增強(qiáng)106倍以上，使用便攜式激光拉曼檢測儀可自動(dòng)判別其特征峰并定性檢測出糠氨酸。通過對(duì)測定的拉曼譜圖進(jìn)行基線調(diào)整和歸一化處理，應(yīng)用外標(biāo)法可完成牛乳樣本中糠氨酸的定量分析。5試劑和材料以下所有試劑，除特別注明者外，均為分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水要5.1糠氨酸標(biāo)準(zhǔn)品CAS19746-33-9，純度大于99.5%。5.2表面增強(qiáng)試劑金納米溶膠。5.3無機(jī)鹽離子團(tuán)聚劑1.0M鹽酸溶液。5.4糠氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液將糠氨酸標(biāo)準(zhǔn)品按標(biāo)準(zhǔn)品證書提供的肽純度系數(shù)（NetPeptideContent）換算，用3mol/L鹽酸溶液配置成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-20℃條件下可儲(chǔ)存24個(gè)月。示例：糠氨酸標(biāo)準(zhǔn)品證書上標(biāo)注肽純度系數(shù)為69.1%，則稱取7.24mg糠氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，用3.0mol/L鹽酸溶液溶解并定容至10.0mL，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度為500.0mg/L。5.5檸檬酸鈉溶液準(zhǔn)確稱取1g檸檬酸鈉，溶于水中，定容至100mL，檸檬酸鈉溶液的濃度為1%。6儀器和設(shè)備2T/XJZJXH0004—20246.1激光拉曼光譜儀儀器參考條件：激光波長785nm，激光功率200mW，積分時(shí)間5秒，平均次數(shù)2次。6.2微波消解儀微波消解儀配有聚四氟乙烯消解內(nèi)罐。6.3微波消解管微波消解管的量程為30mL。6.4分析天平分析天平的感量為0.001g，0.0001g。6.5移液槍移液槍的量程為5mL。6.6冷藏冰箱儲(chǔ)藏溫度范圍為4℃~10℃。7測定步驟測定步驟包括采樣、樣品制備、定性檢測、定量檢測。7.1采樣用于檢測的巴氏殺菌乳和運(yùn)輸溫度為2℃~6℃,UHT滅菌乳儲(chǔ)存和運(yùn)輸溫度不高于25℃。按GB/T10111的規(guī)定取不少于250.0mL樣品，樣品不應(yīng)受到破壞或者再轉(zhuǎn)運(yùn)和儲(chǔ)藏期間發(fā)生變化。監(jiān)督抽查或仲裁檢驗(yàn)等采樣應(yīng)到加工廠抽取成品庫的代銷產(chǎn)品，1周內(nèi)測定。7.2樣品制備7.2.1金納米粒子的合成準(zhǔn)確量取2.424mL濃度為1%的HAuCl4溶液加入50.0mL水中，加熱煮沸。再加入1.5mL濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)加熱30min，冷卻至室溫，即可使用。金納米粒子的掃描電鏡圖和紫外吸收?qǐng)D參見附錄A中圖A1。7.2.2試樣水解液的制備稱量1.000g（準(zhǔn)確至0.001g）牛奶樣品，倒入聚四氟乙烯消解管中，加入10.0mL濃度為8N的鹽酸溶液，酸水解牛奶樣品，同時(shí)做試劑空白實(shí)驗(yàn)，蓋消解管專用蓋后將消解管安裝至支架上，放入微波消解儀，按表1中的升溫程序進(jìn)行微波消解，消解完成后冷卻至室溫，定容至25.0mL，過0.22μm水相濾膜，取濾液供上機(jī)測定。表1微波消解程序755557.3定性檢測在玻璃測試管中依次加入0.20mL待測液、0.05mL無機(jī)鹽團(tuán)聚劑和0.20mL表面增強(qiáng)試劑，混勻后開始上機(jī)檢測。根據(jù)譜圖中904cm-1、1074cm-1、1150cm-1和1453cm-1處特征拉曼光譜，對(duì)牛奶中的糠氨酸進(jìn)行評(píng)估：如同時(shí)存在上述特征峰，則可判定樣品中含有糠氨酸；否則，不能證明樣品中含有糠氨酸，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。牛奶中糠氨酸定性測定表面增強(qiáng)拉曼光譜圖參見附錄A中A2。3T/XJZJXH0004—20247.4定量檢測對(duì)測定的拉曼譜圖進(jìn)行基線調(diào)整和歸一化處理，操作如下：a)首先將測定的拉曼光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行基線調(diào)整。b)以糠氨酸特征峰1150cm-1作為定量特征峰，對(duì)糠氨酸特征拉曼峰進(jìn)行歸一化處理。c)歸一化后得到的特征拉曼峰的峰面積可根據(jù)當(dāng)次實(shí)驗(yàn)中糠氨酸標(biāo)品特征峰測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。牛奶中糠氨酸定量測定表面增強(qiáng)拉曼光譜圖參見附錄A中A3-4。8結(jié)果計(jì)算按式（1）計(jì)算樣品中糠氨酸含量。式中：X—試樣中糠氨酸含量，單位為微克每千克(μg/kg）；c—從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的糠氨酸的濃度，單位為微克每升(μg/LV—樣品定容體積，單位為毫升（mL）；V1—加液體積，單位為毫升（mL）；V2—取液體積，單位為毫升（mL）；m—稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。9檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度本檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度要求如下：9.1靈敏度本方法檢出限為0.05mg/kg，定量限為0.1mg/kg。9.2準(zhǔn)確度本方法在0.5mg/L～50.0mg/L添加濃度水平上的回收率為70%～120%；9.3精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的15%。4T/XJZJXH0004—2024標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖及出峰時(shí)間A.1金納米粒子的紫外吸收見圖A.1。圖A.1金納米粒子紫外吸收?qǐng)DA.2糠氨酸表面增強(qiáng)拉曼光譜見圖A.2。圖A.2糠氨酸表面增強(qiáng)拉曼光譜圖A.3