Lp-PLA2(人血漿脂蛋白相關磷脂酶A2)定量檢測試劑盒

人血漿脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)

定量(dìngliàng)測定試劑盒

中美合資(hézī)·天津康爾克生物科技有限公司共四十八頁125,000+受試者在國際主流專業(yè)雜志和會議報告中，已有超過(chāoguò)100項臨床研究和綜述分析的結果支持Lp-PLA2

作為一個心血管疾病的標志物在傳統(tǒng)危險標志物的基礎上提供了新的信息國際研究一致(yīzhì)結果共四十八頁國際權威指南(zhǐnán)一致推薦2010ACCF/AHA無癥狀成人心血管風險評估指南可考慮(kǎolǜ)對中等風險的無癥狀成人進行Lp-PLA2

檢測以進一步評估風險。2011AHA/ASA卒中一級預防指南在未有心血管疾病的患者中檢測炎癥指標如hs-CRP或Lp-PLA2可以鑒別出有較高卒中風險的患者。2012AACE高脂血癥管理與動脈粥樣硬化預防指南一些研究證明，在有必要進一步對患者進行風險評級時，Lp-PLA2檢測比hs-CRP具有更高的特異性。2012ESC歐洲心血管疾病預防臨床實踐指南對有復發(fā)急性血栓事件的高風險患者可以檢測

Lp-PLA2

以進一步評估風險。共四十八頁國內專家一致(yīzhì)認可——“脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2)是血管內皮炎癥的獨立危險因子，也是目前檢測血管內皮炎癥的新指標。對心腦血管栓塞性疾病的預測(yùcè)、治療和預后的判斷具有重要意義?！敝腥A醫(yī)學會心血管病學分會主任委員，著名心血管專家胡大一教授中國工程院院士，美國心臟病學院院士，著名心血管專家張運教授——“脂蛋白相關磷脂酶A2（Lp-PLA2)已成為AS抗炎治療的新靶點，初步研究發(fā)現(xiàn)通過抑制磷脂酶A2，可以減少血管壁脂質的沉積和巨噬細胞的浸潤?！闭浴秳用}粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊的研究進展》摘自2012中國腦卒中大會主題論壇報告共四十八頁臨床(línchuánɡ)一線期待已久“心血管醫(yī)生最關心的一點就是高危患者心血管事件發(fā)生風險。如果能夠早期預防(yùfáng)，在發(fā)生重大事件之前把危險控制住，那就可以減少病死率。但目前臨床常用的檢測指標如肌苷激酶等出現(xiàn)時為時已晚，而脂蛋白相關磷脂酶A2定量檢測為臨床提供了一個預警及風險評估的有力工具。”——北京大學第三醫(yī)院心內科主任高煒“現(xiàn)有的檢驗指標如膽固醇、LDL、HDL確實在心血管疾病風險評估方面發(fā)揮一定作用，但并不全面。甚至有些方法如血小板活化檢測還不夠穩(wěn)定。因此實驗室迫切需要一個方法穩(wěn)定、特異性強又獨立于膽固醇之外的風險評估方法，而脂蛋白相關磷脂酶A2定量檢測就提供了這樣一個方法?！薄?/p>

中國醫(yī)師協(xié)會檢驗醫(yī)師分會會長叢玉隆

“我國一年心外科手術量已達到18.5萬例，但還遠不能滿足我國患者需要，原因就在于我國心血管疾病發(fā)病率太高，每年新增冠心病患者300萬。因此預防的作用比治療更重要，并且其社會效益要遠高于手術。而脂蛋白相關磷脂酶A2定量檢測為心血管疾病預防提供了一個有力武器?！薄袊t(yī)師協(xié)會心臟外科醫(yī)師分會副會長

孫立忠共四十八頁2011.7.16

北京(běijīnɡ)釣魚臺國賓館共四十八頁國家863高科技成果中國(zhōnɡɡuó)首家和唯一上市產品

中國首家和唯一上市產品

國家863科技攻關項目高科技成果快速監(jiān)控和預測心腦血管栓塞性疾病

填補中國心腦血管疾病快速預警檢測的空白

與會專家：

中國人民解放軍總后衛(wèi)生部原副部長(bùchánɡ)陳新年廣東省衛(wèi)生廳副廳長耿慶山中國醫(yī)藥生物技術協(xié)會副會長于修成

科技部火炬高技術產業(yè)開發(fā)中心處長雷慶西中國醫(yī)師協(xié)會心臟外科醫(yī)師分會副會長

孫立忠中國醫(yī)師協(xié)會檢驗醫(yī)師分會會長叢玉隆北京大學第三醫(yī)院心內科主任高煒北京大學首鋼醫(yī)院心血管醫(yī)學中心主任王宏宇衛(wèi)生部北京醫(yī)院心內科主任許峰共四十八頁心腦血管疾病是造成人類死亡的主要(zhǔyào)病因男性女性惡性腫瘤心臟病腦血管病呼吸系統(tǒng)疾病惡性腫瘤(èxìngzhǒngliú)心臟病腦血管病呼吸系統(tǒng)疾病來源：《2012中國衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒》來源:美國國家健康中心2012年統(tǒng)計數(shù)據(jù)共四十八頁心臟猝死：經(jīng)常(jīngcháng)是首次心臟病爆發(fā)

MyerburgRJetal.Circulation.2012;125:1043-1052共四十八頁研發(fā)(yánfā)背景

動脈粥樣硬化（AS)是造成心腦血管疾病的主要原因

AS是一種炎癥反應性疾病在粥樣斑塊形成、進展和最終破裂的過程中均有炎性介質的參與

尋找一個能夠反映這種動態(tài)變化過程的炎性介質就能

夠檢測并跟蹤動脈粥樣硬化的嚴重程度目前脂蛋白相關磷脂酶A2（Lipoprotein-AssociatedPhospholipaseA2，Lp-PLA2)已被國際(guójì)專家公認為一種新

的炎性反應標志物共四十八頁內容(nèiróng)心腦血管疾病現(xiàn)狀及研發(fā)背景(bèijǐng)Lp-PLA2與動脈粥樣硬化的關系臨床研究臨床意義康爾克Lp-PLA2定量檢測試劑盒簡介產品詳解與注意事項

共四十八頁

Lp-PLA2

脂蛋白相關磷脂酶A2，英文縮寫Lp-PLA2。又稱血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。分子量為45KDa

。由成熟的巨噬細胞和淋巴細胞合成和分泌，并受炎性介質的調節(jié)。水解(shuǐjiě)ox-LDL-C上的磷脂，生成促炎物質lyso-PC和ox-FA，因此具有促炎癥和促動脈粥樣硬化的作用。共四十八頁Lp-PLA2在粥樣斑塊形成(xíngchéng)中的作用粥樣斑塊形成血管(xuèguǎn)腔氧化型LDL內膜中膜Lp-PLA2溶血卵磷脂氧化脂肪酸泡沫細胞單核細胞粘附分子巨噬細胞細胞因子共四十八頁穩(wěn)定斑塊vs易損斑塊組織學特征(tèzhēng)對比薄纖維帽厚纖維帽小型(xiǎoxíng)壞死脂質池Lp-PLA2Lp-PLA2血管腔血管腔血栓大型壞死脂質池

穩(wěn)定斑塊Lp-PLA2

含量較低(深色染色)纖維帽厚，膠原含量高小型壞死脂質池炎癥程度較輕

易損斑塊Lp-PLA2

含量較高(深色染色)纖維帽薄，膠原含量低大型壞死脂質池炎癥程度較重CorsonMAetal,AmJCardSuppl2008:101(41F-50F)共四十八頁斑塊易損性與其(yǔqí)Lp-PLA2含量成正比疾病進展Lp-PLA2

染成棕紅色早期(zǎoqī)斑塊出現(xiàn)脂質池穩(wěn)定斑塊纖維帽變薄，出現(xiàn)小型壞死脂質核易損斑塊薄纖維帽破裂斑塊血管中出現(xiàn)血栓KolodgieF,etal.ArteriosclerThrombVascBiol2006血栓共四十八頁>25已發(fā)表研究結果顯示:Lp-PLA2升高導致(dǎozhì)心血管事件風險加倍Packard(WOSCOPS),NEnglJMed2000–CHDBlake(WHS),JAmCollCardiol2001–CHDBlankenberg(AtheroGENE),JLipidRes2003-CADBallantyne(ARIC),Circulation2004-CHDLDL<130Winkler,J

ClinEndocrinologyandMetabolism2004–CHDOei(Rotterdam),Circulation2005–CHD

Brilakis(MayoHeart),EurHeartJ2005–CHDBallantyne(ARIC),ArchInternMed2005–StrokeOei(Rotterdam),Circulation2005–StrokeWinkler(LURIC),Circulation2005–CHDKhuseyinova(HELICOR),Atherosclerosis2005–CHDKoenig(KAROLA),ArteriosclerThrombVascBiol2005–CVDMay(IntermountainHeart),AmHeartJ-CHDJenny(CHS),AHA-EPIAbstract2006–MIElkind(NOMAS),ArchInternMed2006–StrokeO’Donoghue(PROVEIT),Circulation2006–CVDCorsetti(THROMBO),ClinicalChemistry2006-CHDGerber(OlmstedCounty),ATVB2006-DeathS/PMIOldgren(GUSTO/FRISC),EurHeartJ2007-AcuteACSSabatine(PEACE),AHA-ScientificSessions2006-CVDPersson(Malmo),ArteriosclerThrombVascBiol2007-CVDMockel(NOBIS-II),ClinResCardiol2007–CVDHatoum(Nurse’sHealthStudy),CircSuppl2007–MIDaniels(RanchoBernardo),JACC2008–CHD0.51.52.52.01.03.03.54.04.5CorsonMAetal,AmJCardSuppl2008:101(41F-50F)共四十八頁Lp-PLA2前瞻性研究(yánjiū)匯總分析

Lancet（柳葉刀）2010

32項前瞻性研究

79,036

名受試者

每年新增474,976

名患者存在(cúnzài)心腦血管風險17,346次血管與非血管事件TheLp-PLA2StudiesCollaboration,Lancet2010;375:1536–44.共四十八頁Lp-PLA2前瞻性研究匯總(huìzǒng)分析

Lancet(柳葉刀）2010

Lp-PLA2

水平與心血管疾病呈顯著線性相關。相對基線，Lp-PLA2每提高一個標準差所導致冠心病風險比的增加值與傳統(tǒng)風險因子血壓和非HDL-C相當(xiāngdāng)。

Lp-PLA2是獨立的心血管疾病風險預測指標，不受其他生物指標的影響，也為炎癥、動脈粥樣硬化與心血管疾病之間的聯(lián)系提供了新的佐證。TheLp-PLA2StudiesCollaboration,Lancet2010;375:1536–44.共四十八頁Lp-PLA2vshs-CRPLp-PLA2hs-CRP

血管內皮炎癥的標記物由巨噬細胞產生在血管炎癥過程的早期階段啟動不受其他炎癥性疾病影響是一個可用于冠心病藥物干預治療的特異靶點全身性炎癥的標記物全身炎癥急性期由肝臟產生在心血管疾病中的具體作用不清楚

在所有炎癥性疾病患者中均升高在干預治療中不是一個特異靶點共四十八頁Lp-PLA2vsHCYLp-PLA2HCY

血管內皮炎癥的標記物當血管內皮受損時，由巨噬細胞產生在血管炎癥過程的早期階段啟動，具有促進炎癥和動脈粥樣硬化的作用血管內皮炎癥的特異性指標，不受年齡、性別、飲食影響是一個可用于冠心病藥物干預治療的特異靶點人體蛋氨酸代謝的中間產物與體內一碳單位代謝有著密切關系在心血管疾病中的具體作用不清楚，會影響體內許多物質的甲基化過程，從而影響機體正常代謝受遺傳、飲食、性別、年齡、腎功能等多種因素影響在干預治療中不是一個特異靶點共四十八頁Lp-PLA2生物(shēngwù)變異性低0%10%20%30%40%50%0%10%20%30%40%50%%

withElevatedBiomarker%

Intra-IndividualCVLp-PLA2

>250ng/mLhsCRP

>3mg/LLp-PLA2

CRP

LDLHDLTG4%46%10%7.4%4.7%42.6%22.8%90份未患心臟病健康(jiànkāng)人群的血樣43份健康成人4周7次抽血血樣LermanA,McConnellJP.AmJCardSupplement2008.共四十八頁冠心病患者(huànzhě)LDL-C水平：72%的患者低于130mg/dL<130LDL-C(mg/dL)>130LDL-C(mg/dL)GetWiththeGuidelinesdatabase,levelsatadmissionSachdevaetal.AmHeartJ2009;157:111-7.e2共四十八頁總膽固醇及LDL-C在冠心病預測(yùcè)中的局限性

Framingham心臟研究(yánjiū)——26年隨訪數(shù)據(jù)顯示：35%冠心病患者的總膽固醇水平<200mg/dL180%發(fā)生MI患者與未發(fā)生MI患者含有相似的膽固醇水平冠心病患者LDL-C水平的中值為150mg/dL1僅有25%的早發(fā)性冠心病患者的發(fā)病與LDL-C水平升高有關2

1CastelliW,Atherosclerosis19962GenestJJr,etal.JAmCollCardiol1992共四十八頁膽固醇并非卒中的可靠(kěkào)預測指標LDL膽固醇ARIC1PROCAM2BIPREGISTRY3P=0.20P=NSP>0.05

未患卒中

卒中患者(huànzhě)P=0.44P=NSP>0.05BallantyneCM,etal.AHA2004BergerK,etal.Stroke1998TanneD,etal.Circ.20014.BowmanTS,etal.Stroke1998OeiHH,etal.Circ.2005WannametheeSG,etal.Stroke2000共四十八頁傳統(tǒng)(chuántǒng)風險因子在冠心病患者中的流行程度0RiskFactors19.4%1RiskFactor43%2RiskFactors27.8%3RiskFactors8.9%%4RiskFactors0.9%N=87,869分析的四個傳統(tǒng)風險因子:高血壓，吸煙，高血脂癥，糖尿病KhotUM,etal.JAMA2003.62.4%

冠心病患者僅含有0-1個傳統(tǒng)(chuántǒng)風險因子共四十八頁Mayo研究:利用(lìyòng)Lp-PLA2預測心梗后生存期0.03.04.05.06.01.02.05.4*2.21.0≤166

ng/mL167-218

ng/mL≥219

ng/mL*p<0.001aftermultivariateadjustmentforage,

sex,hypertension,BMI,diabetes,smoking,LDL-CGerberY,etal.ArteriosclerThrombVascBiol2006

HazardRatio發(fā)生(fāshēng)MI后，高水平Lp-PLA2患者1年內死亡風險是低水平患者的5倍共四十八頁Mayo研究：利用Lp-PLA2

預測(yùcè)冠心病患者主要心血管事件發(fā)生率95%

的Lp-PLA2<200ng/ml患者(huànzhě)4年內未發(fā)生心血管事件BrilakisESetal.MayoHeartStudy.EuroHeartJ2005共四十八頁北曼哈頓卒中研究(NOMAS)：

利用Lp-PLA2

預測(yùcè)卒中復發(fā)風險0.00.51.01.52.02.5HighLp-PLA2Highhs-CRPRiskRatio(Highestvs.LowestQuartile)0.71.02.1(95%CI1.04-4.18)1.9(95%CI1.01-3.42)復發(fā)性卒中事件(shìjiàn)

N=80,其他心血管事件N=122Adjustedfordemographics,traditionalriskfactors,strokeseverity,andbothmarkers復發(fā)性卒中首發(fā)卒中后任何心血管事件ElkindMS,etal.ArchIntMed2006.Lp-PLA2

升高，卒中復發(fā)風險加倍共四十八頁一級預防——對急性(jíxìng)冠脈綜合征的預測評價

經(jīng)冠脈造影證實無冠脈狹窄者(對照)28例、急性冠脈綜合征(ACS)27例、穩(wěn)定型心絞痛(SAP)28例。檢測血漿Lp-PLA2

水平(shuǐpíng)。組別 例數(shù) Lp-PLA2(ng/ml)急性冠脈綜合征(ACS) 27 706.00±149.91*

穩(wěn)定型心絞痛(SAP) 2

427.75±44.58*

無冠脈狹窄者(對照組)

28

267.69±92.67

注:與對照組比較*P＜0.001陳錦峰,等.廣東醫(yī)學2011;32(10):1263共四十八頁二級預防——對進展(jìnzhǎn)性腦梗死的預測評價

168

例急性腦梗死(ACI)患者每天進行NIH卒中量表(NIHSS)評分，其中進展性腦梗死40例，穩(wěn)定性腦梗死128例。檢測血漿(xuèjiāng)Lp-PLA2

水平。

組別 例數(shù) Lp-PLA2(μg/L)ACI組 168 12.058±7.104*進展性腦梗死組 40 17.304±10.630*Δ穩(wěn)定性腦梗死組 128 10.419±4.576正常對照組 72 7.268±3.112

注:與正常對照組比較*P＜0.01;與穩(wěn)定性腦梗死組比較△P＜0.01王磊,等.臨床神經(jīng)病學雜志2011;24(4):309.共四十八頁病情評估——對神經(jīng)功能損傷(sǔnshāng)程度的評價

選擇動脈硬化性腦梗死(ACI)患者128例和未卒中對照者88例為研究對象，檢測血漿Lp-PLA2的水平。按NIH中風(zhòngfēng)量表(NIHSS

評分)進行神經(jīng)功能缺損程度評估。分析神經(jīng)功能缺損程度與血漿Lp-PLA2水平相關性。結果r=0.829，P=0.001。組別 例數(shù) Lp-PLA2(μg/L)輕型梗死組 32 53.45±5.47*中型梗死組

66 65.68±6.07*重型梗死組

30 77.11±5.12

注:與重型梗死組比較*P<0.05

梁江紅,等.實用醫(yī)學雜志2009;25(14):2264.共四十八頁

療效評價(píngjià)不同劑量阿托伐他汀治療急性腦梗死

選擇急性腦梗死患者86例，隨機分為2組：阿托伐他汀常規(guī)劑量組43例：20mg/天，大劑量組43例：40mg/天，分別于治療前及治療14天后測量(cèliáng)患者血漿Lp-PLA2

水平。另選擇43例健康體檢者為對照組，不予阿托伐他汀治療。阿托伐他汀治療前后血漿Lp-PLA2(μg/L)變化的比較常規(guī)治療組 大劑量組對照組急性腦梗死組治療前治療后治療前治療

30.52±2.9143.95±5.70#44.22±6.2537.63±4.53*43.69±5.1635.63±4.16*

注:治療前和治療后比較*P<0.05；與對照組比較#P<0.05陳軍,等.臨床醫(yī)學工程2011;18(7):982共四十八頁康爾克Lp-PLA2定量檢測(jiǎncè)試劑盒特點

準確、可靠、重復性好靈敏度高簡易、快捷，靜脈取血2-5ml送檢，1.5小時出結果

無需空腹，任何時間均可取血性能達到美國同類產品水平性價比高：美國同類產品臨床檢測收費(shōufèi)250美元左右，約合

人民幣1500元，本產品僅為

350元人民幣，醫(yī)保、新農合、公費醫(yī)療均能報銷。共四十八頁臨床檢測(jiǎncè)人群

傳統(tǒng)風險評級已經(jīng)確定為中危的人群患者——增強危險級別

接受他汀類抗炎治療(zhìliáo)的患者——評估—調整—效果

高血壓患者

——評估—調整—效果

發(fā)生過中風、ACS、AMI等急性不良事件的患者——預測二次事件-強化治療方案共四十八頁臨床實踐舉例(jǔlì)評估通過傳統(tǒng)危險(wēixiǎn)因素檢測的患者>175ng/ml≤175ng/ml≤175ng/ml>175ng/ml<4.0mmol/L<3.3mmol/L<2.5mmol/L<1.8mmol/L測試測量中高?；颊叩腖p-PLA2

水平治療達到合適LDL-C水平共四十八頁名

稱規(guī)格主要組成成份96人份48人份24人份1．Lp-PLA2酶聯(lián)反應板1塊（96孔）1塊（48孔）1塊（24孔）Lp-PLA2包被抗體2．標準品11瓶，70ul，濃度：1000ng/ml1瓶，50ul，濃度：1000ng/ml1瓶，50ul，濃度：1000ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸緩沖液3．標準品21瓶，70ul,濃度：500ng/ml1瓶，50ul,濃度：500ng/ml1瓶，50ul,濃度：500ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸緩沖液4．標準品31瓶，70ul,濃度：250ng/ml1瓶，50ul，濃度：250ng/ml1瓶，50ul，濃度：250ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸緩沖液5．標準品41瓶，70ul,濃度：100ng/ml1瓶，50ul,濃度：100ng/ml1瓶，50ul,濃度：100ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸緩沖液6．標準品51瓶，70ul,濃度：50ng/ml1瓶，50ul，濃度：50ng/ml1瓶，50ul，濃度：50ng/mlLp-PLA2抗原，牛血清白蛋白,磷酸緩沖液7．標準品（空白）1瓶，70ul,濃度：0ng/ml1瓶，50ul,濃度：0ng/ml1瓶，50ul,濃度：0ng/ml牛血清白蛋白,磷酸緩沖液8．稀釋液（10倍）1瓶,1.5ml

1瓶,1.0ml

1瓶,0.5ml牛血清白蛋白,磷酸緩沖液9．酶標記物1瓶，15ml

1瓶，7.5ml

1瓶，4ml辣根過氧化酶標記抗體，牛血清白蛋白,磷酸緩沖液10．洗滌液（20倍）1瓶，30ml

1瓶，15ml1瓶，8ml

磷酸緩沖液，吐溫11．顯色液1瓶，10ml

1瓶，5ml

1瓶，2.5ml四甲基聯(lián)苯胺12．終止液1瓶,6ml

1瓶，3ml

1瓶，2ml硫酸13．說明書一份一份一份

產品(chǎnpǐn)組成及安全性

本試劑盒中采用的試劑都不具有(jùyǒu)毒性、致畸致突變性，也不含有人血液制品，因此不具有(jùyǒu)生物學危害，但仍需作為一般生物試劑加以防護。共四十八頁檢驗(jiǎnyàn)原理——ELISA共四十八頁樣品(yàngpǐn)處理樣品收集、處理和保存：血漿：用EDTA抗凝管取血2ml，1500r/min離心10分鐘，收集上清液。血清：用普通(pǔtōng)管或促凝管取血2ml，4℃下放置30分鐘后，1500r/min離心10分鐘，收集上清液。保存:血漿（清）如不即時檢測，則須于-20℃保存，并避免反復凍融。共四十八頁操作方法1）

從冰箱中取出試劑盒，室溫(shìwēn)平衡20min，將標準品離心，1000r/min，1min2）分別加入80ul稀釋液（1倍)和20ul待測樣品或標準品于反應孔內,混勻,37℃溫育20min3）棄去孔內液體，每孔加300ul洗液(1倍），振蕩20-30sec后棄去洗液，重復4次，拍干殘液4）加入100ul酶標記物，混勻，37℃溫育30min

5）重復步驟3）

6）每孔加入顯色液100ul，混勻，37℃溫育20min，避光7）加入50ul終止液8）立即用酶標儀在450nm條件下測定各孔OD值9）以OD值為縱坐標（Y），相應Lp-PLA2標準品濃度為橫坐標（X），制作標準曲線10）根據(jù)樣品的OD值計算得出樣品的Lp-PLA2含量共四十八頁檢驗結果(jiēguǒ)的解釋對臨床的檢測結果進行統(tǒng)計分析之后，175ng/ml以下正常,

175ng/ml以上為危險。如樣本的Lp-PLA2的含量低于臨界值，則視為正常；如高于臨界值則提示(tíshì)為其動脈可能有粥樣硬化炎癥，且炎癥與Lp-PLA2的含量成正比。共四十八頁產品(chǎnpǐn)性能指標

劑量-反應曲線(qūxiàn)的線性

用logistic數(shù)學模型或其他數(shù)學模型擬合，劑量-反應曲線相關系數(shù)（r）應不低于0.9900。r2=0.99998r2=0.97917共四十八頁