醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)報(bào)告

醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一：動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)原理兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞在自發(fā)或誘導(dǎo)條件下合并成為一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過程成為。在通常情況下，兩個(gè)細(xì)胞接觸并不會(huì)發(fā)生融合現(xiàn)象。因?yàn)楦髯源嬖谕暾募?xì)胞膜，在特殊融合誘導(dǎo)物的作用下，兩個(gè)細(xì)胞膜發(fā)生一定變化，就可以促進(jìn)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞聚集，相接觸的細(xì)胞膜之間融合，繼而細(xì)胞質(zhì)融合，形成一個(gè)大的融合細(xì)胞，在自然界的就是細(xì)胞融合的過程。010302目前，細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多，常用的主要有滅活的仙臺病毒，聚乙二醇（PEG）和電脈沖。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎茫唵?，且融合效果穩(wěn)定。材料：雞血。試劑：Hanks液,PEG溶液(MV=400)，1640液（含10%滅活小牛血清和不含血清的兩種），0.85%生理鹽水，0.2%次甲基藍(lán)染儀器設(shè)備：顯微鏡(800r/min)，離心機(jī)，水浴箱，酒精燈，吸管，載玻片、蓋玻片，濾紙。實(shí)驗(yàn)用品實(shí)驗(yàn)步驟混合液離心(800r/min離心)8min靜置1min后37℃水浴懸浮離心洗滌流盡剩余液體PEG溶液雞血融化冷卻至50℃生理鹽水熱的1640液混勻37℃水浴保溫10%懸液90S內(nèi)8mlhanks液混勻含小牛血清的1640液2%次甲基藍(lán)染染液染色37℃水浴孵育30min加入Hanks液鏡檢37℃水浴5min10min離心棄上清吸紙吸干010203制備50%PEG一定要保溫在37℃水浴中，不然冷卻后會(huì)有結(jié)晶析出。在離心管中加PEG之前，一定要將離心管倒置在濾紙上，流盡液體，否則殘留液會(huì)改變PEG的濃度。融合過程觀察：分別于溫育5min、10min、20min、30min取細(xì)胞懸液一滴制成臨時(shí)裝片。兩個(gè)細(xì)胞核發(fā)生，形成一個(gè)含有兩個(gè)或多個(gè)核的圓形細(xì)胞。010302注意事項(xiàng)細(xì)胞融合過程實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目二：細(xì)胞核的分離與鑒定

細(xì)胞核。細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不同，用不同的轉(zhuǎn)速和不同的介質(zhì)離心，就可以將細(xì)胞內(nèi)各組分分級分離出來。細(xì)胞核的分離就是利用了細(xì)胞核的比重大小與細(xì)胞內(nèi)其他組分不同，先將組織制成勻漿，再在懸浮的均勻介質(zhì)中進(jìn)行離心，分離，甲苯胺藍(lán)又可以將細(xì)胞核染成藍(lán)紫色，這樣，就可以鑒別分離出來的細(xì)胞核。材料：小白鼠A試劑：生理鹽水,0.25mol/L蔗糖，0.003mol/L氯化鈣溶液，1%甲苯胺藍(lán)染液B儀器設(shè)備：顯微鏡，普通離心機(jī)，天平，離心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml燒杯，解剖剪，鑷子，沖洗瓶，紗布，伯樂均漿器，載玻片，蓋玻片，染色盤架C實(shí)驗(yàn)用品：斷頭處死小白鼠1迅速開腹取肝2加8ml預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L綠化高永液于燒杯中，3將剪碎的肝組織倒入玻璃勻漿器，是勻漿器下端侵入盛有冰塊的器皿。4盡量剪碎肝組織，取1克放入燒杯中5反復(fù)洗滌6手提尾部使其血液盡量流出7實(shí)驗(yàn)步驟：左手握持勻漿器右手將勻漿搗桿垂直插入管中勻漿，直至看不到明顯的組織塊過濾勻漿液于離心管中

2500r/min離心15min離心

5到7分鐘后取上清液制一張涂片1將原離心管中剩余上清液吹打成沉淀成懸液另制涂片2滴染甲苯胺藍(lán)染液用8層紗布滴染甲苯胺藍(lán)染液

5到7分鐘洗滌，晾干洗滌，晾干鏡檢操作規(guī)范，防止試劑污染。細(xì)胞懸液的涂片制作要輕柔。使用離心機(jī)要注意平衡，轉(zhuǎn)速從低到高。低倍鏡下找到標(biāo)本，再換高倍鏡，可見肝細(xì)胞核已游離出來，被染成藍(lán)紫色，圓形，中央有2到4個(gè)甚至更多個(gè)深藍(lán)色的核仁。010302注意事項(xiàng)：預(yù)期結(jié)果：設(shè)計(jì)組名單姓名學(xué)號王正旭1120150135羅秀1120150136徐鷺1120150137汪俊成112015