DB32T-茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程編制說明

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)《茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程》編制說明一、標(biāo)準(zhǔn)編制背景及任務(wù)來源（一）標(biāo)準(zhǔn)編制背景（目的、必要性和意義）蒼術(shù)是我國著名的傳統(tǒng)藥用植物，其藥用部位主要是根莖，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目等功效?；钚猿煞志椭懈缓喾N倍半萜化合物，藥用價(jià)值主要體現(xiàn)在抗病毒、抗菌、抗腫瘤、提高免疫力、抗炎等方面。在抗擊新冠病毒疫情中涌現(xiàn)出了以“三方”為代表的有效中藥方劑，而其中兩方（化濕敗毒方、宣肺敗毒方）的主要成分即為蒼術(shù)。除了藥用價(jià)值，蒼術(shù)及蒼術(shù)精油還在日化用品、食品防腐、飼料添加、功能食品、香薰等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。最近幾年，我國每年對蒼術(shù)藥材需求大約10000噸以上，目前市場年供應(yīng)量不到5000噸，存在5000多噸缺口，每年僅藥材原材料的市場缺額就在7.5億元以上。此外，蒼術(shù)提取獲得的精油及其倍半萜產(chǎn)品具有抑菌、消炎、抗病毒、收縮毛孔、除皺祛紋、放松活絡(luò)、促進(jìn)代謝、抗皺抗衰老；調(diào)理脾胃、緩解風(fēng)濕引起的關(guān)節(jié)疼痛、排毒養(yǎng)顏、抗?jié)?、保肝等作用。此外，最近不斷涌現(xiàn)出來的研究報(bào)道了蒼術(shù)倍半萜還在減肥、抗癌等方面有著良好的效果。預(yù)計(jì)這些蒼術(shù)加工產(chǎn)品的年市場份額在200億元以上。野生資源已遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足市場需求，組培和種植獲得蒼術(shù)原料將極大改變市場供應(yīng)。蒼術(shù)作為藥用植物中一個(gè)非常重要的屬，其在種的分類上又可分為茅蒼術(shù)、北蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)、白術(shù)、鄂西蒼術(shù)等，其中前五種可作藥用，市場上的蒼術(shù)藥材一般指的是茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)，其中尤以生長在江蘇茅山及其周邊地區(qū)的茅蒼術(shù)品質(zhì)最佳，是著名的道地藥材。目前湖北、內(nèi)蒙、陜西、河北等地都有或多或少的蒼術(shù)種植和藥材銷售，市場所需的蒼術(shù)藥材主要由內(nèi)蒙、湖北等地供應(yīng)。但作為道地產(chǎn)區(qū)的江蘇已有近30年沒有形成蒼術(shù)藥材商品了。究其原因，最主要的原因在于野生道地茅蒼術(shù)資源幾近滅絕，目前已被列為江蘇省4種瀕危藥用植物之一。傳統(tǒng)蒼術(shù)生產(chǎn)主要采用種子繁殖和根莖繁殖，但由于茅蒼術(shù)基因多樣性的原因，其結(jié)籽率很低，且種子萌發(fā)受到光照、溫度、土壤含水量、土壤質(zhì)量等因素影響較大，繁殖系數(shù)較低；根莖繁殖的弊端則在于根莖需求量較大、品質(zhì)易退化，易發(fā)生病害等。近些年對茅蒼術(shù)組培快繁技術(shù)的研究多有報(bào)道。植物組織快速繁殖因其具有培養(yǎng)周期短，取材少等優(yōu)點(diǎn)可以用來繁育茅蒼術(shù)。通過工廠組培快繁技術(shù)不僅能在短期內(nèi)獲得大量優(yōu)質(zhì)無菌苗，滿足生產(chǎn)種苗需求，還能與生物技術(shù)育種結(jié)合選育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的新品種，對緩解珍稀藥用植物資源供需矛盾具有重要的意義。雖然目前藥用植物組培育苗技術(shù)已較為成熟，但由于每種藥用植物都有其獨(dú)特的活性成分，自身的營養(yǎng)需求不盡一致，在實(shí)現(xiàn)工廠化育苗之前對其進(jìn)行技術(shù)規(guī)范必不可少。鑒于蒼術(shù)藥材的市場需求較大且茅蒼術(shù)的藥用價(jià)值最高，針對茅蒼術(shù)的大規(guī)模工廠化育苗技術(shù)亟需進(jìn)行完善和規(guī)范。目前北蒼術(shù)和湖北非道地產(chǎn)區(qū)所種植的茅蒼術(shù)均已有相關(guān)地方標(biāo)準(zhǔn)出臺，而作為道地產(chǎn)區(qū)的江蘇尚無茅蒼術(shù)種植或育苗的標(biāo)準(zhǔn)制定。為了解決蒼術(shù)及其產(chǎn)品應(yīng)用價(jià)值高和優(yōu)質(zhì)原料資源短缺之間的矛盾，保障江蘇地區(qū)優(yōu)質(zhì)茅蒼術(shù)藥材的市場地位，制定茅蒼術(shù)優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)迫在眉睫。本標(biāo)準(zhǔn)擬采用工廠化組培技術(shù)繁育獲得大批量優(yōu)質(zhì)茅蒼術(shù)種苗資源，標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施可望在短期內(nèi)解決優(yōu)質(zhì)市場茅蒼術(shù)資源短缺的問題。（二）項(xiàng)目來源2023年8月江蘇省市場監(jiān)督管理局下發(fā)《省市場監(jiān)管局關(guān)于下達(dá)2023年度江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（蘇市監(jiān)標(biāo)〔2023〕173號）。南京師范大學(xué)為標(biāo)準(zhǔn)編制承擔(dān)單位，參編單位有南京倍萜源生物科技有限公司、江蘇靖博生物技術(shù)有限公司等組成標(biāo)準(zhǔn)編制組。二、編制工作過程（一）資料收集階段時(shí)間：2023年3月—2023年5月。工作安排：收集茅蒼術(shù)工廠化育苗生產(chǎn)的組織培養(yǎng)、煉苗、穴盤苗生產(chǎn)、種苗標(biāo)準(zhǔn)、包裝運(yùn)輸、生產(chǎn)檔案等相關(guān)法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范、要求等技術(shù)資料。（二）調(diào)查研究與分析階段時(shí)間：2023年5月—2023年7月工作安排：1、編制標(biāo)準(zhǔn)大綱與有關(guān)要求，明確標(biāo)準(zhǔn)編制組人員分工。2、編制標(biāo)準(zhǔn)編制工作方案。3、研究茅蒼術(shù)工廠化育苗生產(chǎn)的組織培養(yǎng)、煉苗、穴盤苗生產(chǎn)、種苗標(biāo)準(zhǔn)、包裝運(yùn)輸、生產(chǎn)檔案等相關(guān)法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范、要求等技術(shù)資料，全面了解相關(guān)要求。4、調(diào)查研究江蘇省內(nèi)目前茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)的工程案例。5、取證茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)在江蘇省內(nèi)的實(shí)施成效，總結(jié)成功案例的技術(shù)要求。分析其推廣應(yīng)用可行性、成熟性、先進(jìn)性，佐證其創(chuàng)造的生態(tài)、社會與經(jīng)濟(jì)效益。（三）標(biāo)準(zhǔn)編制時(shí)間：2023年8月—2023年9月自2023年8月，南京師范大學(xué)接到江蘇省市場監(jiān)督管理局下發(fā)《省市場監(jiān)管局關(guān)于下達(dá)2023年度江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（蘇市監(jiān)標(biāo)〔2023〕173號）后，2023年9月，南京師范大學(xué)會同南京倍萜源生物科技有限公司、江蘇靖博生物技術(shù)有限公司聯(lián)合成立標(biāo)準(zhǔn)編制組，確定了主要標(biāo)準(zhǔn)制定原則、制定大綱、人員分工、進(jìn)度計(jì)劃以及實(shí)施方案，確定《茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)框架。編制組依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)編制實(shí)施方案及職責(zé)分工，通過資料收集、調(diào)查研究與分析等工作，結(jié)合茅蒼術(shù)工廠化育苗過程及產(chǎn)品應(yīng)用中面臨的技術(shù)問題，認(rèn)真開展了標(biāo)準(zhǔn)初稿的編制工作，于2023年9月完成了標(biāo)準(zhǔn)初稿的編制。（四）標(biāo)準(zhǔn)研討時(shí)間：2023年9月—2023年10月通過多次研討和專家咨詢，發(fā)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)初稿中存在的問題，提出了相關(guān)建議，編制組通過進(jìn)一步的資料收集和專家咨詢，對標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容、框架、格式等進(jìn)行了修改、補(bǔ)充和完善，并對標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容進(jìn)行了修改。形成標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿。研討修改情況如下：1補(bǔ)充更新了規(guī)范性引用文件。2對術(shù)語和定義進(jìn)行了部分更正和補(bǔ)充、調(diào)整。（五）征求意見時(shí)間：2023年10月—2023年11月為廣泛征求各方意見，擬于2023年10月31日起至2023年11月30日，標(biāo)準(zhǔn)編制組通過南京師范大學(xué)科學(xué)技術(shù)研究院面向社會公開征求意見。（六）專家研討標(biāo)準(zhǔn)編制組于2023年12月組織召開《茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程》地方標(biāo)準(zhǔn)研討會。根據(jù)收集的征求意見，在對標(biāo)準(zhǔn)修改、補(bǔ)充、完善的基礎(chǔ)上，標(biāo)準(zhǔn)編制組對標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及編制情況進(jìn)行詳細(xì)介紹，與會代表和專家提出標(biāo)準(zhǔn)存在問題，對標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容展開討論，從標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容、格式規(guī)范、語言表述等方面提出修改意見。會后，標(biāo)準(zhǔn)編制小組根據(jù)專家意見對標(biāo)準(zhǔn)文本進(jìn)一步修改完善，形成標(biāo)準(zhǔn)送審稿，并提交江蘇省市場監(jiān)督管理局和江蘇省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳，等待審查。三、標(biāo)準(zhǔn)編制原則及主要技術(shù)內(nèi)容確定（一）標(biāo)準(zhǔn)編制原則本標(biāo)準(zhǔn)與國家和行業(yè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)不沖突，標(biāo)準(zhǔn)編制過程中，嚴(yán)格遵守相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)特別是強(qiáng)制性條文的有關(guān)規(guī)定，本標(biāo)準(zhǔn)是對國家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的綜合應(yīng)用和補(bǔ)充。本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求進(jìn)行編寫。（二）主要內(nèi)容1適用范圍標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了茅蒼術(shù)工廠化育苗生產(chǎn)的組織培養(yǎng)、煉苗和穴盤苗生產(chǎn)、種苗標(biāo)準(zhǔn)、包裝運(yùn)輸、生產(chǎn)檔案等內(nèi)容。標(biāo)準(zhǔn)適用于茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)與管理的全過程。2主要技術(shù)指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)明確和規(guī)定了茅蒼術(shù)無菌組培苗和煉苗的培養(yǎng)方法，穴盤苗生產(chǎn)方法，病蟲害防治，以及種苗檢測和包裝運(yùn)輸過程。關(guān)于規(guī)范性引用文件，包含以下規(guī)范文件：GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《中國藥典》2020年版，第一部藥材和飲片，168蒼術(shù)3術(shù)語和定義規(guī)定了茅蒼術(shù)、組培苗、煉苗、工廠化育苗的術(shù)語定義，詳見文本內(nèi)容。（三）主要技術(shù)內(nèi)容的說明本標(biāo)準(zhǔn)制定參考了目前已有湖北、河北、甘肅等省關(guān)于北蒼術(shù)栽培技術(shù)的地方標(biāo)準(zhǔn)，以及湖北十堰市制定的湖北茅蒼術(shù)的種子育苗和分株繁殖栽培地方標(biāo)準(zhǔn)，GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、《中國藥典》2020年版，第一部藥材和飲片，168蒼術(shù)等現(xiàn)有規(guī)范文件。根據(jù)產(chǎn)地調(diào)研及文獻(xiàn)查閱結(jié)果，結(jié)合本課題組研究數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析，綜合相關(guān)信息對標(biāo)準(zhǔn)中的核心指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行確定，旨在為高品質(zhì)中藥材茅蒼術(shù)的工廠化育苗提供科學(xué)數(shù)據(jù)與理論依據(jù)。1茅蒼術(shù)無菌組培苗體系的建立茅蒼術(shù)無菌組培苗由本課題組參考各類藥用植物無菌組培苗處理方法的基礎(chǔ)之上建立。選擇健壯、無病蟲害的野生或栽培茅蒼術(shù)植株，外植體進(jìn)行表面滅菌處理：取其葉芽，流水沖洗，在超凈臺中將葉芽依次浸泡于75%乙醇、9%次氯酸鈉溶液、75%乙醇，隨后無菌水沖洗3遍。按照該方法處理可獲得經(jīng)多次傳代仍能保持穩(wěn)定生長的無菌組培苗，本課題組將2007年從江蘇茅山和湯山取樣的100株茅蒼術(shù)野生苗制備得來的無菌組培苗傳代至今，仍保持穩(wěn)定性狀。圖1茅蒼術(shù)無菌組培苗培養(yǎng)基中大量元素的含量影響茅蒼術(shù)的生長和活性成分，改善培養(yǎng)基配方中的大量元素含量配比，可以有效調(diào)整組培苗中揮發(fā)油的含量。MgSO4的含量變化對茅蒼術(shù)的組培苗干重積累無明顯影響，但影響根總長。CaCl2含量為原含量兩倍時(shí)，干重、根數(shù)及根總長均最大。而KNO3的含量在原含量1.5到2倍時(shí)，組培苗的干重顯著提高，2倍條件下的植株比1倍含量條件下植株干重高95.7%。NH4NO3含量為原含量的1到1.5倍間，干重與其他含量下的干重有顯著性差異，KH2PO4則在2倍處有一個(gè)最大干重積累量（表1）。我們還發(fā)現(xiàn)不同元素含量處理?xiàng)l件下會影響茅蒼術(shù)總揮發(fā)油及其主成分變化（表2），其中CaCl2含量為原含量1.5倍時(shí)揮發(fā)油含量最高，而MgSO4含量為原含量1到1.5倍時(shí)，揮發(fā)油含量最高。KNO3高含量促進(jìn)植株生長，因此含量為原含量2倍時(shí)，每株茅蒼術(shù)所含揮發(fā)油含量最大。而NH4NO3不存在時(shí)不利于植株生長，高含量不利于揮發(fā)油的產(chǎn)生。KH2PO4也表現(xiàn)為高濃度促進(jìn)茅蒼術(shù)生長，不利于幾種主成分的積累，雖然最終每株茅蒼術(shù)所含的總揮發(fā)油含量在高濃度時(shí)最高。經(jīng)過響應(yīng)面法設(shè)計(jì)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)幾種影響較為顯著的大量元素含量之間進(jìn)行含量配比優(yōu)化，可以顯著提高茅蒼術(shù)揮發(fā)油的總含量，通過以上優(yōu)化，茅蒼術(shù)活性成分可提高50%以上。表1培養(yǎng)基不同大量元素及不同含量對茅蒼術(shù)干重及根部生長的影響MS培養(yǎng)基大量元素含量根總長(cm)根數(shù)干重(g)折干率(%)（×倍數(shù)）CaCl2014.53±1.36a4.33±0.58a0.042±0.002a12.089%±0.43ab0.517.67±1.04abc5.33±0.58a0.055±0.003abc11.63%±0.28a123.63±2.06d6.00±0.82a0.054±0.005d12.62%±0.52b1.521.81±1.35cd5.00±1.15a0.058±0.005cd11.41%±0.23a245.79±1.30l8.00±1.73b0.062±0.005l11.63%±0.31aNH4NO3017.63±0.87abc7.33±1.53ab0.028±0.003abc16.61%±0.01c0.537.34±4.15gh7.00±1.00ab0.039±0.004gh7.69%±0.01a139.57±4.27hi11.00±1.00b0.060±0.007hi29.98%±0.03d1.531.45±1.55f8.00±4.76ab0.067±0.003il12.86%±0.01b224.88±2.21de3.00±1.00c0.025±0.003de13.38%±0.01bKNO3029±2.11ef9.00±1.00ab0.054±0.002ef13.57%±0.01a0.533.01±5.81fg10.67±2.52b0.047±0.001fg14.62%±0.66a129.61±2.20f9.67±1.53ab0.046±0.003f15.03%±0.32a1.544.75±3.40l7.67±0.58a0.082±0.006m13.75%±0.74a241.96±3.72il10.50±0.58b0.09±0.004n13.23%±0.95aMgSO4015.76±1.53ab6.50±1.91a0.054±0.004ab24.79%±0.03a0.521.02±0.91cd7.33±1.53a0.062±0.004l24.50%±0.03a121.61±1.24cd7.75±1.71a0.050±0.002cd23.57%±0.03a1.521.04±2.11cd5.75±1.71a0.051±0.004cd24.20%±0.03a220.33±1.78bcd5.33±0.58a0.041±0.006bcd21.80%±0.01aKH2PO4017.99±1.75abc3.67±0.58a0.026±0.005abc16.24%±0.21a0.546.6±4.01d9.50±1.29b0.061±0.006ll14.00%±0.72bc123.22±1.35l5.67±1.15c0.051±0.005cd13.39%±1.40c1.533.41±2.40fg8.67±1.15b0.055±0.003fg14.87%±0.54b228.91±1.99ef7.75±0.96b0.079±0.005m12.87%±0.66c表2不同大量元素不同含量對茅蒼術(shù)組培苗揮發(fā)油主成分含量的影響大量元素濃度（×倍數(shù)）姜畢烯(μg/g)茅術(shù)醇(μg/g)β-桉葉油醇(μg/g)蒼術(shù)酮(μg/g)蒼術(shù)素(μg/g)CaCl20.055.22±5.31a2.17±0.29a7.24±2.11a3.79±0.65a10.34±1.61a0.5191.60±60.65b1.81±0.55a18.94±4.76bc5.04±2.18a70.62±20.93b1.065.19±11.77b2.16±0.60a17.05±3.63ab5.46±2.02a47.67±1.98c1.5115.95±25.70b2.76±0.16a21.38±5.57cd5.08±1.51a90.20±6.12b2.0106.19±29.87b2.09±0.33a28.25±3.48d5.22±0.16a47.50±13.07cNH4NO30.0122.59±4.24a2.27±0.45a64.54±26.17a4.69±0.08ab86.66±18.30a0.5149.45±14.95a3.06±1.08a55.61±15.75a8.66±0.60c91.67±2.08a1.080.21±33.26b1.93±0.51a43.43±11.61ab4.24±0.93a35.43±10.73b1.562.05±7.67b2.27±0.65a42.16±8.80ab5.56±0.78b51.99±10.09b2.047.18±4.41b2.21±0.55a22.69±9.00b4.28±0.13a31.00±7.86bKNO30.0111.48±25.67ab2.87±0.06c34.39±4.07c5.23±0.74a48.85±14.62ab0.5153.49±10.82c2.67±0.41bc18.38±8.67ab7.43±1.82bc68.86±5.68a1.0148.65±49.71bc2.00±0.44ab10.57±0.62a8.52±1.08c59.75±16.80a1.594.06±6.50a1.91±0.47a23.27±6.57b7.37±0.76bc34.92±8.60b2.0125.52±17.30c2.60±0.40abc35.57±0.99c6.65±0.33ab59.24±10.46aMgSO40.080.5±46.77a2.28±0.67a17.73±7.56a7.08±2.75a20.48±6.47a0.582.29±19.93a2.79±1.15a33.79±11.68b6.64±0.95a40.98±15.00bc1.0114.83±11.26a3.02±0.85a25.43±10.25ab5.85±0.93a54.89±10.60c1.591.02±25.22a2.74±0.94a14.17±1.98a5.41±0.83a33.73±1.67ab2.0135.50±29.00a3.19±1.67a10.96±1.05a4.79±0.19a28.43±4.08abKH2PO40.065.96±4.45a5.09±1.97a23.35±13.54a6.99±0.49a194.23±89.69a0.596.53±22.26ab2.88±0.23b34.58±8.42a7.54±1.57a44.50±4.27b1.0105.49±6.66abc2.33±0.49b25.30±5.49a6.51±2.56a37.98±9.39b1.5147.34±45.47c1.96±0.16b27.73±6.78a5.71±1.28a45.98±18.53b2.0140.18±16.62bc2.41±0.47b32.52±12.63a6.91±1.54a47.17±14.25b2茅蒼術(shù)煉苗、穴盤苗培養(yǎng)及病蟲害防治本課題組對茅蒼術(shù)組培苗的煉苗方法進(jìn)行了長期的優(yōu)化和實(shí)踐，經(jīng)過光照培養(yǎng)箱無菌組培→人工氣候箱蛭石擴(kuò)大培養(yǎng)→穴盤苗培養(yǎng)→田間種植的逐級適應(yīng)和放大，煉苗存活率可達(dá)90%以上。組培室煉苗與穴盤苗培養(yǎng)時(shí)，病蟲害防治對象主要是蚜蟲，根據(jù)課題組經(jīng)驗(yàn)及參考其他藥用植物組培情況，應(yīng)以物理防治為主，可采用粘蟲板、殺蟲燈誘殺害蟲。圖2茅蒼術(shù)煉苗與穴盤苗培養(yǎng)3茅蒼術(shù)的種苗檢測本課題組的大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，煉苗和穴盤苗培養(yǎng)2個(gè)月左右，90%以上的茅蒼術(shù)種苗外觀可達(dá)到：葉片≥15片，株高≥10cm，根長≥5cm，無損傷、無爛根、無病害。為了確定茅蒼術(shù)種苗中所含揮發(fā)油的主成分，本課題組使用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)并結(jié)合氣相色譜方法對該組培苗系的揮發(fā)油主成分進(jìn)行定性及定量分析，并進(jìn)行定量測定的線性及范圍考察，以及精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性考察。建立了各類文獻(xiàn)中公認(rèn)的茅蒼術(shù)中的4種主要活性成分：β-桉葉油醇、茅術(shù)醇、蒼術(shù)酮、蒼術(shù)素的定量分析方法。茅蒼術(shù)種苗揮發(fā)油中有85個(gè)組分，其中含量大于1%的有21個(gè)（圖3）。從總離子流圖中可以看到，茅術(shù)醇（峰11）、β-桉葉油醇（峰12）、蒼術(shù)酮（峰13）、蒼術(shù)素（峰15）占總揮發(fā)油含量的10%左右。除此之外，還對其他多種活性成分（以倍半萜為主）進(jìn)行了定性定量分析。圖3茅蒼術(shù)組培苗揮發(fā)油總離子流圖表3茅蒼術(shù)組培苗揮發(fā)油主成分編號保留時(shí)間（min）化合物名稱分子式分子量相對含量（%）19.2501-乙基-3-(1-丙烯基)金剛烷（1-etyhl-3-(1-propenyl)adamantane）C15H24204.350.187229.424β-廣藿香烯（β-patchoulene）C15H24204.350.069939.618十氫-4α-甲基-1-亞甲基-7(1-甲基亞乙基)萘（4α-methyl-1-methylene-7-(propan-2-ylidene)decahydronaphthalene）C15H24204.350.8973410.932δ-愈創(chuàng)木烯（δ-guaiene）C15H24204.352.2845511.215反-丁香烯（β-caryophyllene）C15H24204.351.9807612.019(1Z,4Z,7Z)-1,5,9,9四-甲基-1,4,7-環(huán)十(三)烯（(1Z,4Z,7Z)-1,5,9,9-tetramethylcycloundeca-1,4,7-triene）C15H24204.350.7407712.6711-(1,5-二甲基-4-乙烯基)-4-甲基-苯（1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-4-methyl-benzene）C15H22202.342.8328813.215姜畢烯（zingiberene）C15H24204.356.3303914.031β-倍半水芹烯（β-sesquiphellandrene）C15H24204.351.75051015.806氧化石竹烯（caryophylleneoxide）C15H24O220.351.19831118.272茅術(shù)醇（hinesol）C15H26O222.370.05911218.597β-桉葉油醇（β-eudesmol）C15H26O222.370.01031318.835蒼術(shù)酮（atractylone）C15H20O216.321.22551419.870β-雪松烯（β-himachalene）C15H24204.350.54611522.053蒼術(shù)素（atractylodin）C13H10O182.226.10121630.156亞麻酸（(Z,Z,Z)-9,12,15-octadecatrienoicacid）C18H30O2278.4318.47511734.416δ-生育酚（2H-1-benzopyran-6-ol,3,4,-dihydro-2,8-dimethyl-2-(4,8,12-trimethyltridecyl-,[2R-[2R*(4R*,8R*)]]）C27H46O2402.650.67131836.364γ-生育酚（2,7,8-trimethyl-2-(4,8,12-trimethyltridecyl)chroman-6-ol）C28H48O2416.683.0325表4茅蒼術(shù)種苗內(nèi)8種化合物氣相色譜檢測的線性、檢測范圍和最低檢測限化合物線性范圍回歸方程R2檢測限（mg/mL）反-丁香烯（β-caryophyllene）0.0003-0.03y=24251x-0.81140.99980.0001姜畢烯（zingiberene）0.0003-0.03y=28942x-1.77810.99950.0003β-倍半水芹烯（β-sesquiphellandrene）0.0005-0.03y=19826x-0.99790.99970.0001氧化石竹烯（caryophylleneoxide）0.0005-0.03y=26177x-13.2250.99940.0003茅術(shù)醇（hinesol）0.0005-0.03y=14737x-3.67740.99970.0003β-桉葉油醇（β-eudesmol）0.0005-0.03y=19327x-5.79350.99930.0003蒼術(shù)酮（atractylone）0.003-0.03y=20625x-5.96650.99910.0001蒼術(shù)素（atractylodin）0.0005-0.03y=15730x-3.47190.99980.0003表5茅蒼術(shù)種苗內(nèi)8種化合物氣相色譜檢測的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性化合物精密度a重復(fù)性a穩(wěn)定性a準(zhǔn)確性b反-丁香烯（β-caryophyllene）2.153.054.2195.57±2.56姜畢烯（zingiberene）2.453.474.55105.87±1.59β-倍半水芹烯（β-sesquiphellandrene）1.983.353.7897.77±3.08氧化石竹烯（caryophylleneoxide）1.662.673.9899.32±1.72茅術(shù)醇（hinesol）2.043.654.54103.65±3.34β-桉葉油醇（β-eudesmol）1.673.093.67100.32±2.51蒼術(shù)酮（atractylone）1.852.725.6995.61±2.88蒼術(shù)素（atractylodin）2.152.913.81103.35±2.18a相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，%，n=6；b準(zhǔn)確性=(總含量–原始含量)/添加量±SD，%，n=6。（四）標(biāo)準(zhǔn)主要指標(biāo)數(shù)據(jù)確定根據(jù)本項(xiàng)目組以上研究結(jié)果，結(jié)合已有標(biāo)準(zhǔn)、研究文獻(xiàn)，進(jìn)行對比分析，形成茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程。標(biāo)準(zhǔn)中主要指標(biāo)數(shù)據(jù)確定如下：無菌組培苗培養(yǎng)外植體處理選擇健壯、無病蟲害的野生或栽培茅蒼術(shù)植株，外植體進(jìn)行表面滅菌處理：取其葉芽，流水沖洗，在超凈臺中將葉芽依次浸泡于75%乙醇、9%次氯酸鈉溶液、75%乙醇，隨后無菌水沖洗3遍。分化培養(yǎng)將沖洗干凈的葉芽轉(zhuǎn)移至含MS無菌分化培養(yǎng)基的組培瓶中。分化培養(yǎng)基組成為：MS培養(yǎng)基+6-芐氨基嘌呤(2mg/L)+1-萘乙酸(0.3mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(10g/L)的固體培養(yǎng)基，每45天轉(zhuǎn)接1次。組培室培條件為：光照強(qiáng)度3400lm/m2；光照時(shí)間12h/天，培養(yǎng)溫度28/18℃。生根培養(yǎng)剪取分化培養(yǎng)基上茅蒼術(shù)組培苗的叢生芽，移入生根培養(yǎng)基中。生根培養(yǎng)基的組成為：1/2MS培養(yǎng)基+1-萘乙酸(0.3mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(10g/L)，培養(yǎng)時(shí)間為60天。培養(yǎng)的環(huán)境條件同分化培養(yǎng)條件。煉苗與穴盤苗生產(chǎn)煉苗與穴盤培養(yǎng)將組培瓶在溫室中封口放置2~3天，再瓶口半打開放置2~3天，最后瓶口完全打開放置1~2天。取出組培苗，放入水溫為20℃左右的清水中，漂洗去除根部培養(yǎng)基，移栽至穴盤基質(zhì)中并稍壓緊。宜采用72孔育苗穴盤，穴盤的尺寸為54cm×28cm，穴盤基質(zhì)為滅菌后的蛭石和營養(yǎng)土混合基質(zhì)（體積比1:1）。穴盤中施入適量生根培養(yǎng)液，其組成為：1/2MS+1-萘乙酸(0.3mg/L)，每周灑水2~3次，濕潤即可，培養(yǎng)60天。溫室培養(yǎng)條件為：溫度20℃左右，光照強(qiáng)度為18000lm/m2~20000lm/m2，相對濕度50%~70%。病蟲害防治防治對象主要是蚜蟲，以物理防治為主，采用粘蟲板、殺蟲燈誘殺害蟲。種苗檢測外觀葉片≥15片，株高≥10cm，根長≥5cm，無損傷、無爛根、無病害?；钚猿煞謿庀嗌V檢測種苗化學(xué)成分特征，應(yīng)能檢測出蒼術(shù)酮、茅術(shù)醇、β-桉葉油醇和蒼術(shù)素4種