輸血相關(guān)傳染病病原學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)（臨床輸血檢驗(yàn)課件）

臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)報(bào)告的簽發(fā)學(xué)習(xí)目標(biāo)熟悉檢測(cè)結(jié)果的復(fù)核、報(bào)告發(fā)布、報(bào)告復(fù)核、報(bào)告審核簽發(fā)的流程檢測(cè)報(bào)告的簽發(fā)檢測(cè)結(jié)果復(fù)核酶免檢測(cè)原始記錄與微孔板逐一核對(duì)取消接收試驗(yàn)結(jié)果和發(fā)布報(bào)告結(jié)果與擴(kuò)增曲線核對(duì)核對(duì)完整實(shí)驗(yàn)過(guò)程和關(guān)鍵控制點(diǎn)不一致，不在控核酸檢測(cè)采取糾正措施分析和查找原因填寫復(fù)核記錄單檢測(cè)報(bào)告的簽發(fā)酶免試驗(yàn)《血液篩查檢測(cè)報(bào)告》報(bào)告發(fā)布《酶免試驗(yàn)血液檢測(cè)過(guò)程報(bào)告》核酸檢測(cè)試驗(yàn)其它《核酸檢測(cè)試驗(yàn)血液檢測(cè)過(guò)程報(bào)告》核酸免檢放行標(biāo)本核酸試驗(yàn)組單項(xiàng)試驗(yàn)已發(fā)布的標(biāo)本機(jī)采預(yù)標(biāo)本常規(guī)試驗(yàn)不合格標(biāo)本發(fā)布總評(píng)結(jié)果檢測(cè)報(bào)告的簽發(fā)報(bào)告復(fù)核核實(shí)報(bào)告與原始數(shù)據(jù)是否一致報(bào)告的標(biāo)本數(shù)與實(shí)際檢測(cè)標(biāo)本的數(shù)量是否一致留取的待查樣本管、不合格樣本管是否正確填寫報(bào)告復(fù)核記錄檢測(cè)報(bào)告的簽發(fā)報(bào)告審核簽發(fā)《試驗(yàn)結(jié)果原始記錄》《血液檢測(cè)過(guò)程報(bào)告》《血液篩查檢測(cè)報(bào)告》填寫報(bào)告最終簽發(fā)記錄《報(bào)告復(fù)核記錄》檢測(cè)標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、交接與處理學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握檢測(cè)標(biāo)本的采集、運(yùn)輸、交接與處理的基本原則酶免檢測(cè)血液樣本1EDTA-K2真空抗凝管留取5ml血液樣本核酸檢測(cè)的血液樣本2必須采用無(wú)菌、無(wú)DNA酶、無(wú)RNA酶、帶分離膠的一次性真空EDTA-K2抗凝試管標(biāo)本采集采集后4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行離心，離心力要求為1200～1600g，時(shí)間不少于15分鐘；標(biāo)本離心后上下層界面清楚明顯，上清液應(yīng)透明清亮，呈淡黃色，無(wú)嚴(yán)重溶血，中層分離膠緊實(shí)均勻；離心后的標(biāo)本上下分層界線清楚明顯，標(biāo)本量不得少于5ml。采集的血液標(biāo)本應(yīng)盡快放入現(xiàn)場(chǎng)2～8℃冰箱內(nèi)標(biāo)本運(yùn)輸標(biāo)本運(yùn)輸采用試管架等固定裝置固定標(biāo)本防止標(biāo)本散落；標(biāo)本應(yīng)隔離密封包裝，包裝材料應(yīng)滿足防水、防破損、防外泄、易于消毒處理，裝箱時(shí)應(yīng)保持標(biāo)本管口向上，具有一定保溫效果。應(yīng)避免運(yùn)輸途中發(fā)生劇烈震蕩而導(dǎo)致樣本破損、滲漏或溶血。有溫控措施，保證整個(gè)冷鏈系統(tǒng)能有效控制溫度在2～10℃范圍。標(biāo)本交接檢查運(yùn)輸過(guò)程溫度是否在2～10℃范圍核查標(biāo)本來(lái)源、數(shù)量；核查標(biāo)本管是否選用錯(cuò)誤、有無(wú)破損，、滲漏、管內(nèi)有無(wú)異物；標(biāo)本是否滿足既定的質(zhì)量要求，有無(wú)嚴(yán)重溶血、抗凝不充分、標(biāo)本量不足或被稀釋核酸標(biāo)本的預(yù)離心情況標(biāo)本與送檢單信息對(duì)應(yīng)性和完整性無(wú)誤后簽字確認(rèn)標(biāo)本離心核酸管應(yīng)使用低溫離心機(jī)酶免管低溫、常溫離心均可標(biāo)本處理離心后應(yīng)檢查標(biāo)本有無(wú)溶血、樣本管是否破損、血漿層有無(wú)異物。異常標(biāo)本應(yīng)交相關(guān)部門處理。標(biāo)本處理編號(hào)拔塞擺架將未檢標(biāo)本直接放入2～8℃待檢標(biāo)本冰箱保存A當(dāng)日檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的標(biāo)本挑出，在每個(gè)試管條碼上注明日期和陽(yáng)性項(xiàng)目，放在試管架上（HIV初篩陽(yáng)性的標(biāo)本放在專用試管架上），保存于2～8℃已檢不合格標(biāo)本專用冰箱中，填寫血液檢測(cè)陽(yáng)性樣本登記表B將當(dāng)日已檢測(cè)合格的標(biāo)本放入空試劑盒中，標(biāo)注日期和架次，保存于2～8℃已檢合格樣本冰箱。C將待檢標(biāo)本標(biāo)識(shí)后（如：HBsAg一檢B1、二檢B2，ABO？及Rh（-）等）放入試管架上，直接保存于2～8℃待檢樣本冰箱中。D檢測(cè)后標(biāo)本的保存標(biāo)本處理臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)策略

臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)

檢測(cè)策略學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握輸血相關(guān)傳染病病原學(xué)標(biāo)志物的檢測(cè)策略檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)方法（1）核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)；（2）血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)（3）速率法（濕化學(xué)法）。人類免疫缺陷病毒（HIV）感染標(biāo)志物、乙型肝炎病毒（HBV）感染標(biāo)志物、丙型肝炎病毒(HCV)感染標(biāo)志物、梅毒螺旋體感染標(biāo)志物等檢測(cè)策略HIV、HBV、HCV感染標(biāo)志物檢測(cè)實(shí)施核酸檢測(cè)試劑批簽發(fā)之前2遍血清學(xué)檢測(cè)和1遍核酸檢測(cè)，應(yīng)采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的試劑實(shí)施核酸檢測(cè)試劑批簽發(fā)之后核酸和血清學(xué)檢測(cè)2種方法各進(jìn)行1次檢測(cè)檢測(cè)策略梅毒螺旋體感染標(biāo)志物采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的血清學(xué)檢測(cè)試劑進(jìn)行檢測(cè)檢測(cè)流程

檢測(cè)流程

臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)

檢測(cè)報(bào)告的簽發(fā)學(xué)習(xí)目標(biāo)1、掌握HIV、HBV、HCV核酸檢測(cè)的原理、實(shí)驗(yàn)有效性的判定、結(jié)論的判斷。2、知道反應(yīng)性和非反應(yīng)性標(biāo)本保存的方法病原學(xué)標(biāo)志物的核酸檢測(cè)原理PCR擴(kuò)增檢測(cè)采用TaqMan熒光探針標(biāo)定技術(shù)。人類免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸擴(kuò)增分別采用不同熒光染料標(biāo)記的探針，故可對(duì)提取的標(biāo)本和內(nèi)對(duì)照模板同時(shí)進(jìn)行HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV1（RNA）檢測(cè)。在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下HCVRNA/HIV1RNA/內(nèi)對(duì)照RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再與HBVDNA/內(nèi)對(duì)照DNA一同作為模板在TaqDNA聚合酶的作用下擴(kuò)增病毒核酸的保守區(qū)域和內(nèi)對(duì)照特定區(qū)域。TaqDNA聚合酶5’—3’外切酶活性切割反應(yīng)系統(tǒng)中帶熒光標(biāo)記的TaqMan探針產(chǎn)生熒光信號(hào)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，熒光信號(hào)不斷積累。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀通過(guò)檢測(cè)達(dá)到和超過(guò)熒光閾值的信號(hào)給出樣品的陰陽(yáng)性結(jié)果。病原學(xué)標(biāo)志物的核酸檢測(cè)樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本器材與試劑熒光定量PCR擴(kuò)增儀、HIV、HBsAg、HCV病毒（DNA）核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒等。病原學(xué)標(biāo)志物的核酸檢測(cè)分析項(xiàng)目?jī)?nèi)對(duì)照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA備注檢測(cè)熒光HEXTAMRAFAMROXCY5/陰性對(duì)照++---否則重測(cè)陽(yáng)性對(duì)照//+++否則重測(cè)

陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、內(nèi)對(duì)照結(jié)果判定規(guī)則病原學(xué)標(biāo)志物的核酸檢測(cè)分析項(xiàng)目?jī)?nèi)對(duì)照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA結(jié)果判定檢測(cè)熒光HEXTAMRAFAMROXCY5檢測(cè)樣本++---HBVDNA/HCVRNA/HIV-1RNA陰性//+//HBVDNA陽(yáng)性///+/HCVRNA陽(yáng)性////+HIV-1RNA陽(yáng)性-----所有結(jié)果重新測(cè)定-/-//HBVDNA結(jié)果重新測(cè)定/-/--HCVRNA或HIV-1結(jié)果重新測(cè)定（1.”/”表示不考慮；2.FAM/ROX/CY5熒光層“-”表示Ct>45orNoCt;“+”表示Ct≤45；3.HEX/TAMRA熒光層“-”表示Ct>40orNoCt;“+”表示Ct≤40）檢測(cè)樣本結(jié)果判定規(guī)則

病原學(xué)標(biāo)志物的核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)有效性判定當(dāng)陰陽(yáng)性對(duì)照與外部質(zhì)控品（質(zhì)控品達(dá)到預(yù)期結(jié)果）同時(shí)有效時(shí)，整批實(shí)驗(yàn)有效；否則整批實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需重做。結(jié)論的判定a.采用混檢（八混一）模式進(jìn)行核酸檢測(cè)，當(dāng)混檢結(jié)果呈非反應(yīng)性（-）時(shí)，該混檢孔內(nèi)的標(biāo)本均判為合格標(biāo)本。b.當(dāng)混檢結(jié)果某一項(xiàng)或多項(xiàng)呈反應(yīng)性（+）時(shí)，混檢孔內(nèi)的所有標(biāo)本均為待查標(biāo)本，須進(jìn)行拆分單樣本檢測(cè)。當(dāng)拆分檢測(cè)呈非反應(yīng)性（-）時(shí)，則該標(biāo)本為合格標(biāo)本；拆分單樣本檢測(cè)某一項(xiàng)或多項(xiàng)呈反應(yīng)性（+）時(shí)，該樣本判為不合格。對(duì)照檢測(cè)報(bào)告，將檢測(cè)呈反應(yīng)性的POOl所對(duì)應(yīng)的標(biāo)本挑出，放于2～8℃冰箱，留待次日進(jìn)行樣本拆分檢測(cè)。對(duì)照檢測(cè)記錄，將檢測(cè)呈非反應(yīng)性的標(biāo)本按日期，每100個(gè)標(biāo)本作為一個(gè)單位放在樣本盤上，貼上留樣標(biāo)簽，放-20℃冰箱保存?！緲?biāo)本保存】病原學(xué)標(biāo)志物的核酸檢測(cè)病原學(xué)標(biāo)志物的核酸檢測(cè)【質(zhì)量控制】1．PCR擴(kuò)增板須嚴(yán)格按照編寫的擴(kuò)增板圖從左至右順序擺放。2．PCR擴(kuò)增板放入PCR儀的擴(kuò)增槽后，如擴(kuò)增板少于6條，應(yīng)取相同數(shù)量八連管從右至左擺放與其配平，如擴(kuò)增板大于6條少于12條，應(yīng)將剩下的空擴(kuò)增槽用八連管補(bǔ)齊。3．按《實(shí)驗(yàn)室清潔消毒標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》進(jìn)行PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室清潔消毒。臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)四項(xiàng)病原學(xué)標(biāo)志物的酶免檢測(cè)學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握輸血相關(guān)傳染病病原學(xué)標(biāo)志物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的原理、方法、結(jié)果判斷、待查標(biāo)本的處理原則。人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)原理

采用雙抗原夾心法和雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，在微孔條上預(yù)包被重組HIV抗原和抗P24單抗，配以生物素抗體、酶標(biāo)記抗原、酶標(biāo)記親和素及TMB顯色劑等其它試劑，檢測(cè)人血清或血漿中的HIV-1型和（或）HIV-2型抗體和HIVP24抗原。人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本器材與試劑手工加樣儀、全自動(dòng)加樣及酶免處理系統(tǒng)、人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）等人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)操作試劑的平衡檢查試劑盒配制洗液檢查微孔反應(yīng)板加樣檢查加樣效果檢測(cè)人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)結(jié)果判斷兩種試劑結(jié)果無(wú)反應(yīng)性陰性一種或兩種可疑或反應(yīng)性單試劑待查單試劑雙孔復(fù)試雙試劑待查雙試劑單孔復(fù)試一孔或兩孔為可疑或反應(yīng)性兩孔均為無(wú)反應(yīng)性任一種試劑為可疑或反應(yīng)性兩種試劑均為無(wú)反應(yīng)性HIV陽(yáng)性HIV陽(yáng)性HIV陰性HIV陰性

人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)HIV初篩陽(yáng)性樣本的送檢疫情上報(bào)人員填寫HIV初篩陽(yáng)性送檢單取陽(yáng)性血清于專用試管、標(biāo)識(shí)填寫HIV初篩陽(yáng)性樣本送檢記錄樣品放入專用套桶并放入專用保溫箱送確診實(shí)驗(yàn)室人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)1．從冰箱中取出的試劑盒應(yīng)至少在室溫平衡30min以上。2．每次實(shí)驗(yàn)前試劑最多可添加試劑槽的3／4的量，添加時(shí)應(yīng)小心，防止試劑砰濺導(dǎo)致試劑污染。3．整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵守儀器和項(xiàng)目操作規(guī)程進(jìn)行操作，不得擅自離崗?！举|(zhì)量控制】乙肝表面抗原檢測(cè)原理應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理。在微孔板預(yù)包被純化乙肝表面抗體（抗-HBs），加入待檢樣本，同時(shí)加入酶標(biāo)記乙肝表面抗體（HBsAb-HRP）進(jìn)行溫育，樣本中存在的乙肝表面抗原（HBsAg）與包被抗體形成“包被抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物。洗板后加入顯色劑，復(fù)合物上連接的HRP催化顯色劑反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物，終止反應(yīng)后，變?yōu)辄S色。乙肝表面抗原檢測(cè)樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本手工加樣儀、全自動(dòng)加樣及酶免處理系統(tǒng)、人類乙肝表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）等器材與試劑乙肝表面抗原檢測(cè)

同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)操作同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)結(jié)果判斷同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)質(zhì)量控制very丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)原理應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理，在微孔板預(yù)包被HCV抗原，加入稀釋液及待檢樣品進(jìn)行溫育，樣品中存在的HCV抗體與包被抗原形成“包被抗原-抗體”復(fù)合物，洗板去除不與包被抗原結(jié)合的物質(zhì)；加入酶標(biāo)試劑，進(jìn)行第二次溫育，酶標(biāo)二抗與“包被抗原-抗體”復(fù)合物結(jié)合，形成“包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗”復(fù)合物；再次洗板后加入顯色劑，復(fù)合物上連接的HRP催化顯色劑反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物，終止反應(yīng)后，變?yōu)辄S色。丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本手工加樣儀、全自動(dòng)加樣及酶免處理系統(tǒng)、丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）等器材與試劑

同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)操作同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)結(jié)果判斷同人類免疫缺陷病毒抗原/抗體檢測(cè)質(zhì)量控制very丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)梅毒螺旋體抗體檢測(cè)原理采用雙抗原夾心ELISA方法定性檢測(cè)血