血液學檢驗技術(shù) 課件 10.項目十：溶血性貧血

單元二：紅細胞相關(guān)疾病及其檢驗項目十：溶血性貧血項目十：溶血性貧血任務(wù)一溶血性貧血概述目錄任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗任務(wù)四血紅蛋白病檢驗任務(wù)五免疫性溶血性貧血檢驗一）

掌握：溶血性貧血的定義、分類；溶血性貧血的實驗診斷步驟；臨床常用血管內(nèi)溶血過篩試驗的臨床意義；紅細胞滲透脆性試驗、自身溶血試驗及其糾正試驗、酸化甘油溶血試驗、蔗糖溶血試驗、酸化血清溶血試驗的原理、參考范圍及臨床意義；紅細胞膜缺陷檢驗的臨床應(yīng)用；紅細胞酶缺陷檢驗的臨床應(yīng)用免疫性溶血性貧血、自身溶血性貧血、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血的實驗室檢查。二）

熟悉：臨床常用血管內(nèi)溶血過篩試驗的操作方法及注意事項；珠蛋白生成障礙性貧血的實驗室檢查。三）

了解：臨床常用血管內(nèi)溶血過篩試驗的原理、參考范圍；血紅蛋白S病、血紅蛋白E病的實驗室檢查，免疫性溶血性貧血、自身溶血性貧血、藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血的實驗室檢查的臨床應(yīng)用。學習目標項目十：溶血性貧血四）

具備臨床常用血管內(nèi)溶血過篩試驗的檢測能力；具備紅細胞膜缺陷的臨床檢驗?zāi)芰Γ痪邆浼t細胞酶缺陷的臨床檢驗?zāi)芰?；具備?guī)范標本采集和處理的能力，具有觀察和識別血象、骨髓象中血細胞形態(tài)變化的能力。五）

學會依據(jù)溶血性貧血的實驗室結(jié)果對溶血性貧血進行臨床診斷；學會依據(jù)細胞學異常和臨床要求，有選擇性進行coombs試驗、遺傳學檢查、冷凝集試驗檢查并能依據(jù)實驗結(jié)果輔助分析溶血性貧血的類型。學習目標項目十：溶血性貧血任務(wù)一溶血性貧血概述項目十：溶血性貧血概念：由于紅細胞某種內(nèi)在原因（如紅細胞膜缺陷、紅細胞能量代謝異常和血紅蛋白分子異常等）或外在原因使紅細胞存活時間縮短、破壞過多，骨髓代償能力失去補償作用所引起的一類貧血稱為溶血性貧血。特征：紅細胞的破壞增多和紅細胞活躍生成同時并存代償性溶血性疾?。汗撬璧拇鷥斈芰ρa償了紅細胞的破壞，沒有出現(xiàn)貧血。任務(wù)一溶血性貧血概述一溶血性貧血的概念及特征二溶血性貧血的分類紅細胞內(nèi)在缺陷紅細胞外在缺陷血液循環(huán)中破壞單核-巨噬細胞中破壞任務(wù)一溶血性貧血概述病因主要疾病發(fā)生溶血部位遺傳性溶血性貧血

紅細胞膜缺陷遺傳性球形紅細胞增多癥遺傳性橢圓形紅細胞增多癥遺傳性口形紅細胞增多癥棘細胞增多癥血管外血管外血管外血管外磷酸戊糖途徑和谷胱甘肽合成酶缺陷葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥谷氨酰半胱氨酸合成酶缺陷癥血管外血管外紅細胞糖酵解酶類缺陷丙酮酸激酶缺陷癥葡萄糖磷酸異構(gòu)酶缺陷癥血管外血管外血紅蛋白病珠蛋白生成障礙性貧血鐮狀細胞貧血不穩(wěn)定血紅蛋白病血管外血管外血管外二溶血性貧血的分類任務(wù)一溶血性貧血概述病因主要疾病發(fā)生溶血部位獲得性溶血性貧血

免疫因素自身免疫性溶血性貧血冷凝集素綜合征陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血新生兒同種免疫性溶血性貧血溶血性輸血反應(yīng)血管外／內(nèi)血管外血管內(nèi)血管外／內(nèi)血管外血管外／內(nèi)物理因素彌散性血管內(nèi)凝血心源性溶血性貧血行軍性血紅蛋白尿癥血管內(nèi)血管內(nèi)血管內(nèi)化學因素砷化物、硝基苯、苯肼、藥物等中毒血管內(nèi)／外生物因素溶血性鏈球菌、瘧原蟲、產(chǎn)氣莢膜桿菌等感染，蛇毒、蜘蛛毒和蝎子毒等中毒血管內(nèi)紅細胞膜缺陷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥血管內(nèi)其他脾功能亢進血管外任務(wù)一溶血性貧血概述二溶血性貧血的分類實驗診斷確定溶血性貧血的存在確定主要的溶血部位確定溶血病因紅細胞破壞過多骨髓紅系代償性增生血管內(nèi)溶血血管外溶血病史和臨床資料篩選和確診試驗結(jié)果注意鑒別任務(wù)一溶血性貧血概述三溶血性貧血的實驗室診斷血管內(nèi)溶血和血管外溶血的鑒別特征血管內(nèi)溶血血管外溶血病因獲得性多見遺傳性多見紅細胞主要破壞場所血管內(nèi)單核-巨噬細胞系統(tǒng)病程多為急性常為慢性，急性加重貧血、黃疸常見常見肝、脾大少見常見紅細胞形態(tài)學改變少見常見紅細胞脆性改變變化小多有改變血紅蛋白血癥常>100mg/L輕度增高血紅蛋白尿常見無或輕度尿含鐵血黃素慢性可見一般陰性骨髓再障危象少見急性溶血加重時可見任務(wù)一溶血性貧血概述三溶血性貧血的實驗室診斷不同類型溶血性貧血試驗選擇任務(wù)一溶血性貧血概述三溶血性貧血的實驗室診斷部位溶血性貧血疾病名稱篩選/排除試驗確診試驗血管外溶血遺傳性球形紅細胞增多癥紅細胞形態(tài)檢查高滲冷溶血試驗遺傳性橢圓形紅細胞增多癥滲透脆性試驗、酸化甘油溶血試驗?zāi)さ鞍纂娪痉治?、膜脂質(zhì)分析遺傳性口形紅細胞增多癥自身溶血試驗、紅細胞腺苷三磷酸活性、Coombs試驗?zāi)さ鞍谆蚍治?、家系調(diào)查G-6-PD-CNSHA高鐵血紅蛋白還原試驗、G-6-PD熒光斑點試驗、硝基四氮唑藍試驗、Heinz小體生成試驗紅細胞G-6-PD活性測定基因分析丙酮酸激酶缺乏癥

紅細胞形態(tài)檢查、PK熒光斑點試驗PK活性定量測定嘧啶-5'-核苷酶缺乏癥紅細胞形態(tài)檢查、Ret、嘧啶核苷酸比率中間代謝產(chǎn)物、嘧啶-5'-核苷酶活性測定珠蛋白生成障礙性貧血、血紅蛋白病紅細胞形態(tài)檢查、紅細胞包涵體試驗、異丙醇沉淀試驗、熱變性試驗、Heinz小體生成試驗紅細胞鐮變試驗、血紅蛋白電泳、珠蛋白肽鏈分析、基因分析、吸收光譜測定部位疾病名稱篩選/排除試驗確診試驗血管內(nèi)溶血PNHRous試驗、尿隱血試驗、蔗糖溶血試驗Ham試驗、蛇毒溶血因子試驗、補體敏感性試驗蠶豆病高鐵血紅蛋白還原試驗、G-6-PD熒光斑點試驗、硝基四氮唑藍試驗、Heinz小體生成試驗紅細胞G-6-PD活性、基因分析陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥Rous試驗、Coombs試驗冷熱溶血試驗藥物致免疫性溶血性貧血Coombs試驗IAGT及加藥后的IAGT急發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)Coombs試驗血型鑒定及不同方法的交叉配血試驗微血管病性溶血性貧血紅細胞形態(tài)檢查、Ret、血小板計數(shù)、血漿游離血紅蛋白測定等止血與血栓實驗室檢查及其他相關(guān)檢查任務(wù)一溶血性貧血概述不同類型溶血性貧血試驗選擇三溶血性貧血的實驗室診斷根據(jù)紅細胞破壞的場所，可將溶血性貧血分為血管外溶血和血管內(nèi)溶血血管外溶血：紅細胞主要在血管以外的部位，如脾、肝的單核-巨噬細胞系統(tǒng)中被吞噬后破壞血管內(nèi)溶血：紅細胞主要在血液循環(huán)中被直接破壞紅細胞在單核-巨噬細胞中破環(huán)在血管內(nèi)破環(huán)血管外溶血血管內(nèi)溶血四溶血性貧血的發(fā)病機制任務(wù)一溶血性貧血概述溶血時血紅蛋白代謝示意圖任務(wù)一溶血性貧血概述四溶血性貧血的發(fā)病機制血漿游離血紅蛋白測定血清結(jié)合珠蛋白測定尿含鐵血黃素試驗高鐵血紅素白蛋白試驗鑒別溶血部位五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述一）

血漿游離血紅蛋白測定【實驗原理】常用鄰-甲苯胺法檢測【參考區(qū)間】<40mg/LH2O2血紅蛋白新生態(tài)氧血紅蛋白中亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的作用酸性環(huán)境無色鄰-聯(lián)甲苯胺藍色氧化五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述一）

血漿游離血紅蛋白測定【臨床意義】判斷紅細胞的破壞程度增高：急性的、較嚴重的血管內(nèi)溶血，是判斷血管內(nèi)溶血的指征蠶豆病、PNH、冷凝集素綜合征、溶血性輸血反應(yīng)等可明顯增高輕到中度增高可見于自身免疫性溶血性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血等五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述二）

血清結(jié)合珠蛋白測定【實驗原理】常用醋酸纖維素薄膜電泳法結(jié)合珠蛋白（Hp）能與血漿中游離的血紅蛋白結(jié)合，生成Hb-Hp復(fù)合物待測血清中加入一定量的Hb，待與Hp結(jié)合形成Hp-Hb復(fù)合物后，通過電泳使Hp-Hb復(fù)合物與未結(jié)合的Hb分開，測定Hp-Hb復(fù)合物的量，可測得血清Hp含量五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述二）

血清結(jié)合珠蛋白測定【參考區(qū)間】0.5～1.5gHb/L【臨床意義】反映溶血的情況減低：常見于各種溶血，尤其是血管內(nèi)溶血。嚴重肝病、先天性無珠蛋白血癥、傳染性單核細胞增多癥等Hp也可減低增高：Hp為急性時相反應(yīng)蛋白，各種感染、組織損傷、惡性腫瘤、類固醇治療、膽道堵塞時可增高，故Hp正?；蛟龈?，不能排除溶血的存在不能以此判斷有無溶血五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述三）

尿含鐵血黃素試驗【實驗原理】也稱Rous試驗，常采用普魯士藍反應(yīng)檢測紅細胞→血管內(nèi)大量破壞→游離Hb↑→通過腎臟濾過→血紅蛋白尿尿中Hb→腎小管上皮細胞吸收分解→鐵離子以含鐵血黃素的形式沉積于上皮細胞→上皮細胞脫落進入尿液→排出體外五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述三）

尿含鐵血黃素試驗【實驗原理】含鐵血黃素亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵藍色沉淀酸性環(huán)境五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述三）

尿含鐵血黃素試驗【參考區(qū)間】陰性【臨床意義】陽性：主要見于慢性血管內(nèi)溶血，如陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥。無論有無血紅蛋白尿，只要存在有慢性血管內(nèi)溶血，本試驗即呈陽性血管內(nèi)溶血初期，上皮細胞內(nèi)尚未形成可檢出的含鐵血黃素，此時本試驗可呈陰性五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述四）

高鐵血紅素白蛋白試驗【實驗原理】血紅蛋白與Hp結(jié)合成Hb-Hp肝臟降解清除高鐵血紅蛋白血紅蛋白尿珠蛋白高鐵血紅素與血漿白蛋白結(jié)合與血紅素結(jié)合蛋白結(jié)合高鐵血紅素白蛋白與硫化銨形成銨血色原比色測定五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述四）

高鐵血紅素白蛋白試驗

【參考區(qū)間】陰性【臨床意義】判斷溶血嚴重程度的指標血管內(nèi)溶血嚴重時，紅細胞破壞釋放出大量游離血紅蛋白，Hp與Hx均被耗盡，高鐵血紅素方與白蛋白結(jié)合形成高鐵血紅素白蛋白五溶血性貧血的過篩試驗任務(wù)一溶血性貧血概述任務(wù)二紅細胞膜缺陷的檢驗項目十溶血性貧血任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗一紅細胞膜結(jié)構(gòu)紅細胞膜液態(tài)鑲嵌模型紅細胞膜結(jié)構(gòu)的兩個最基本特征：膜的不對稱性和膜的流動性膜的不對稱性：指膜的內(nèi)外兩層的組分和功能有明顯的差異膜的流動性：指膜內(nèi)部分子（主要為脂質(zhì)和蛋白質(zhì)）的運動性任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗一紅細胞膜結(jié)構(gòu)紅細胞膜由蛋白質(zhì)（49.3％）、脂類（42％）、糖類（8％）及無機離子等組成維持紅細胞的形態(tài)及功能與紅細胞膜的抗原性，細胞表面的黏附、細胞與細胞間的相互作用等特性密切相關(guān)膽固醇/磷脂（C/P）約為0.8～一）0任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗二紅細胞膜的組成三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查紅細胞滲透脆性試驗血細胞表型分析蔗糖溶血試驗自身溶血及糾正試驗紅細胞孵育滲透脆性試驗紅細胞膜蛋白電泳分析酸化血清溶血試驗酸化甘油溶血試驗任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗一）

紅細胞滲透脆性試驗【實驗原理】紅細胞在低滲溶液中出現(xiàn)溶血的特性即紅細胞滲透脆性紅細胞水分進入細胞內(nèi)低滲溶液膨脹破裂溶血任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查一）

紅細胞滲透脆性試驗【實驗原理】反映紅細胞對低滲鹽溶液的抵抗能力主要取決于紅細胞的表面積與體積之比表面大而體積小者，紅細胞對低滲鹽水溶液的抵抗力較大(脆性較小)，反之則抵抗力較小(脆性增加)任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查一）

紅細胞滲透脆性試驗【結(jié)果判定】開始溶血管：上清液開始出現(xiàn)淺紅色，管底尚有多量未溶解紅細胞完全溶血管：全管溶液全部呈現(xiàn)深紅色，管底無紅細胞或余紅細胞碎片【參考區(qū)間】簡易半定量法開始溶血：3.8～4.6g/L完全溶血：2.8～3.2g/L任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查一紅細胞滲透脆性試驗【臨床意義】脆性增加：見于遺傳性球形紅細胞增多癥和橢圓形紅細胞增多癥，也可見于部分自身免疫性溶血性貧血。脆性降低：主要見于珠蛋白生成障礙性貧血、HbC、HbD、HbE病，缺鐵性貧血、脾切除術(shù)后及其他一些紅細胞膜有異常的疾病如肝臟疾病等任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查二）

紅細胞孵育滲透脆性試驗【實驗原理】紅細胞葡萄糖消耗ATP減少37℃孵育24h膜對陽離子主動傳遞受阻，Na+在紅細胞內(nèi)聚集細胞膨脹孵育滲透脆性增加正常紅細胞→孵育后滲透脆性無明顯變化；膜缺陷或某些酶缺陷紅細胞→能源（葡萄糖和ATP）很快消耗→孵育后脆性明顯增加任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查二）

紅細胞孵育滲透脆性試驗【參考區(qū)間】未孵育50%溶血：4.00～4.45g/L37℃孵育24h50%溶血：4.65～5.90g/L【臨床意義】同紅細胞滲透脆性試驗本試驗靈敏度相對較高，多用于輕型遺傳性球形紅細胞增多癥的診斷和鑒別診斷任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查三）

自身溶血試驗及其糾正試驗【實驗原理】膜缺陷或某些酶缺陷紅細胞葡萄糖消耗ATP減少37℃孵育48h細胞膨脹孵育時，加入糾正物（葡萄糖或ATP），觀察溶血是否被糾正自發(fā)溶血任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查三）

自身溶血試驗及其糾正試驗【參考區(qū)間】正常人紅細胞孵育48h后，不加糾正物的溶血率＜4.0%加葡萄糖或ATP后，溶血率＜0.6%任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查三）

自身溶血試驗及其糾正試驗【臨床意義】遺傳性球形紅細胞增多癥：自身溶血率增加，能被葡萄糖或ATP糾正G-6-PD缺乏癥等戊糖旁路代謝缺陷：自身溶血率增加，能被葡萄糖糾正丙酮酸激酶缺乏癥：自身溶血率明顯增加，不能被葡萄糖糾正，能被ATP可糾正任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查四）

酸化甘油溶血試驗【實驗原理】紅細胞氯化鈉磷酸緩沖液甘油微酸性(pH6.85)緩慢溶血比色AGLT50：紅細胞懸液的吸光度下降為起始吸光度50%時所需的時間任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查四）

酸化甘油溶血試驗【參考區(qū)間】正常人AGLT50＞290秒【臨床意義】明顯縮短：主要見于遺傳性球形紅細胞增多癥，可達15～25秒自身免疫性溶血性貧血、腎功能衰竭、妊娠等AGLT50也可縮短任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查五）

蔗糖溶血試驗【實驗原理】補體敏感紅細胞低離子強度蔗糖溶液溫育補體與紅細胞膜結(jié)合溶血任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查五）蔗糖溶血試驗【參考區(qū)間】陰性【臨床意義】陽性：見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH），是PNH的簡易過篩試驗部分自身免疫溶血性貧血、巨幼細胞性貧血和遺傳性球形紅細胞增多癥患者也可出現(xiàn)陽性，其鑒別可采用酸化血清溶血試驗任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查六）

酸化血清溶血試驗【實驗原理】又稱Ham試驗補體敏感紅細胞酸化血清（pH6.4～pH6.6）37℃孵育補體激活溶血56℃加熱30min→補體滅活→紅細胞不溶解任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查六）

酸化血清溶血試驗【參考區(qū)間】陰性【臨床意義】陽性：主要見于PNH，是PNH的確證實驗?zāi)承┳陨砻庖咝匀苎载氀颊甙l(fā)作嚴重時也偶呈陽性，可通過血清加熱破壞補體后重復(fù)試驗進行鑒別任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查七）

血細胞表型分析【實驗原理】PNH→基因突變→血細胞膜糖化肌醇磷脂-錨連接蛋白（GPI-A）如CD59、CD55低表達→細胞膜對自身補體敏感性增強→溶血性貧血。流式細胞術(shù)→分析血細胞膜GPI錨連接蛋白分子（CD59等）的表達量→計數(shù)陰性（缺乏表達CD59分子）細胞的數(shù)量→診斷與鑒別診斷PNH。任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查七）

血細胞表型分析【參考區(qū)間】正常人和非PNH的患者：CD59陰性的紅細胞和CD59陰性的中性粒細胞均＜5%。PNH診斷的臨界值：CD59陰性的紅細胞＞5%和CD59陰性的中性粒細胞＞10%。PNH患者：CD59陰性的紅細胞均＞9%，多數(shù)患者＞20%；CD59陰性的中性粒細胞均＞16%任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查七）

血細胞表型分析【臨床意義】診斷與鑒別診斷PNH靈敏度和特異性均較Ham實驗高，可達100％價格較昂貴任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查八）

紅細胞膜蛋白電泳分析【實驗原理】紅細胞膜各種蛋白質(zhì)SDS電泳紅細胞膜蛋白電泳圖譜各種膜蛋白百分率任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查八）

紅細胞膜蛋白電泳分析【參考區(qū)間】與正常人紅細胞膜蛋白電泳圖譜進行比較，或以帶3蛋白為基準，以與帶3蛋白的比例表示各膜蛋白含量【臨床意義】紅細胞膜蛋白異常可見于多種遺傳性和獲得性溶血性貧血任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗三紅細胞膜缺陷的實驗室檢查四常見紅細胞膜缺陷癥最多見任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗一遺傳性球形紅細胞增多癥（HS）【概述】一種遺傳性紅細胞膜缺陷性溶血病主要特點：慢性病程中伴有急性發(fā)作的溶血性貧血和黃疸，血液中球形細胞增多，紅細胞滲透脆性增加最常見的臨床表現(xiàn)：貧血、黃疸和肝脾腫大任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥一）

遺傳性球形紅細胞增多癥（HS）【概述】鈉泵功能亢進ATP相對缺乏紅細胞膜收縮蛋白異常膜結(jié)構(gòu)與功能的改變膜對離子的通透性異常鈉、水進入細胞增多紅細胞呈球形變細胞變形性減低鈣泵受到抑制鈣易沉積于膜上膜的柔韌性降低通過脾臟時被巨噬細胞吞噬和破壞紅細胞膜蛋白基因突變?nèi)蝿?wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥一）

遺傳性球形紅細胞增多癥（HS）【檢驗】血象：血涂片中出現(xiàn)較多小球形紅細胞。網(wǎng)織紅細胞增加，嗜多色性紅細胞增多，外周血中可出現(xiàn)少數(shù)幼稚紅細胞骨髓象：紅系增生旺盛，粒紅比值降低，為增生性貧血骨髓象細胞直徑變小，厚度增加，胞體小、厚且深染，無中央淡染區(qū)任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥一）

遺傳性球形紅細胞增多癥（HS）【檢驗】滲透脆性試驗：脆性增高。約25%的患者脆性不增高，可采用孵育滲透脆性試驗，輕型HS紅細胞孵育后脆性增高，可被葡萄糖或ATP糾正紅細胞膜蛋白電泳分析紅細胞膜蛋白定量測定分子生物學技術(shù)應(yīng)用任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥一）

遺傳性球形紅細胞增多癥（HS）【診斷】HS缺乏特異性臨床表現(xiàn)和實驗室檢查，應(yīng)結(jié)合病史、臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結(jié)果綜合分析依據(jù)臨床表現(xiàn)、外周血小球形細胞＞10%，紅細胞滲透脆性增加和陽性家族史，可作出診斷鑒別：與繼發(fā)性球形紅細胞增多癥相鑒別，如自身免疫性溶血性貧血，可作Coombs試驗（后者為陽性）任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥二）

遺傳性橢圓形紅細胞增多癥（HE）【概述】一組異質(zhì)性家族遺傳性溶血性疾病特征：外周血中存在大量橢圓形或卵圓形成熟紅細胞臨床表現(xiàn)差異大，貧血程度輕重不一，常見肝、脾腫大任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥二）遺傳性橢圓形紅細胞增多癥（HE）【概述】紅細胞膜骨架蛋白異常膜收縮蛋白結(jié)構(gòu)缺陷膜骨架穩(wěn)定性降低微循環(huán)切變力作用紅細胞變成橢圓形外力去除后不能恢復(fù)外力作用下易破碎多數(shù)被脾臟破壞少數(shù)在肝和骨髓破壞任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥二）遺傳性橢圓形紅細胞增多癥（HE）【檢驗】血象：外周血成熟紅細胞呈橢圓形、卵圓形、棒狀或臘腸形，中心淡染區(qū)消失，細胞橫徑與縱徑之比＜0.78，且數(shù)量＞25%骨髓象：增生性貧血骨髓象任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥二）遺傳性橢圓形紅細胞增多癥（HE）【檢驗】脆性試驗：紅細胞滲透脆性試驗和自身溶血試驗多增高紅細胞膜蛋白電泳分析及低離子強度非變性凝膠電泳膜收縮蛋白分析分子生物學方法任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥二）遺傳性橢圓形紅細胞增多癥（HE）【診斷】依據(jù)臨床表現(xiàn)、陽性家族史和紅細胞形態(tài)等相關(guān)實驗室檢查，絕大多數(shù)HE可得到明確診斷初發(fā)患者無陽性家族史，也可通過橢圓形紅細胞＞50%進行診斷鑒別：與鐵缺乏、骨髓纖維化、骨髓病性貧血、骨髓增生異常綜合征、巨幼細胞貧血、地中海貧血等疾病鑒別任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥三）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）【概述】一種病因尚不明確的、后天獲得性的造血干細胞異常的疾病特征：紅細胞對自身補體敏感性增高依據(jù)紅細胞對補體的敏感性不同，可分為三種類型：Ⅰ型對補體的敏感性正常；Ⅱ型對補體中度敏感；Ⅲ型對補體高度敏感任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥三）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）【概述】臨床表現(xiàn)：與睡眠有關(guān)的間歇性溶血發(fā)作，多為慢性血管內(nèi)溶血，可伴發(fā)作性血紅蛋白尿和全血細胞減少任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥三）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）【概述】造血干細胞基因突變細胞膜GPI-A連接蛋白低表達細胞對補體敏感性增高具有PNH缺陷的細胞群補體激活時易被破壞累及紅細胞、粒細胞、淋巴細胞和血小板等任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥三）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）【檢驗】血象：正色素性或低色素性貧血，網(wǎng)織紅細胞增高，可見有核紅細胞及紅細胞碎片?？沙霈F(xiàn)白細胞和血小板減少，表現(xiàn)為全血細胞減少骨髓象：多增生活躍，紅系增生旺盛。不同穿刺部位增生程度可有明顯差異任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥三）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）【檢驗】特殊溶血試驗：確定溶血的存在：尿隱血試驗或尿含鐵血黃素試驗陽性確定補體敏感紅細胞的存在：蔗糖溶血試驗是PNH的篩選試驗。酸化血清溶血試驗是PNH診斷的重要依據(jù)流式細胞術(shù)檢測：發(fā)現(xiàn)GPI錨連接蛋白（CD55或CD59）低表達的異常細胞群任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥三）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）【診斷】診斷標準：①臨床表現(xiàn)符合PNH；②有血紅蛋白尿發(fā)作或血管內(nèi)溶血的直接、間接證據(jù)；③實驗室檢查證明有補體敏感的紅細胞存在：篩選試驗包括蔗糖溶血試驗、熱溶血試驗、Rous試驗等，酸化血清溶血試驗和流式細胞術(shù)檢測血細胞表面錨蛋白（CD55或CD59）相關(guān)抗原的表達情況是PNH的確診試驗任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥三）

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）【診斷】鑒別：與遺傳性球形紅細胞增多癥、自身免疫性溶血性貧血、G6PD缺乏癥及陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥等其他溶血病鑒別任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥四）遺傳性口形紅細胞增多癥（HST）【概述】一組發(fā)病機制、紅細胞形態(tài)和臨床表現(xiàn)不同的綜合癥主要特征:外周血片中出現(xiàn)較多的口形紅細胞，并伴有陽性家族史根據(jù)口形紅細胞內(nèi)鈉、鉀離子和陽離子總量的多少可分為三種類型：水腫細胞型、干細胞型和其他細胞型任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥四）

遺傳性口形紅細胞增多癥（HST）【檢驗】血象：外周血片中口形紅細胞增多，可達10%～50%（正常人一般＜4%）?？谛渭t細胞中心蒼白區(qū)呈狹窄的裂縫，裂縫的中央較兩端狹窄，類似微張的魚口；在濕血片中，紅細胞雙凹面消失而呈似碗狀的單面凹形。網(wǎng)織紅細胞多增高。任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥四）遺傳性口形紅細胞增多癥（HST）【檢驗】骨髓象：增生性貧血骨髓象脆性試驗：紅細胞滲透脆性試驗增高，自身溶血試驗多增高，葡萄糖和ATP可部分糾正任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥四）遺傳性口形紅細胞增多癥（HST）【診斷】依據(jù)臨床表現(xiàn)、外周血口形紅細胞增多和陽性家族史進行診斷鑒別：與繼發(fā)性口形紅細胞增多癥相鑒別，如肝病、腫瘤、急性酒精中毒和一些藥物治療后任務(wù)二紅細胞膜缺陷檢驗四常見紅細胞膜缺陷癥

任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗項目十:溶血性貧血1.概念紅細胞酶缺陷是指參與紅細胞代謝（主要是糖代謝）的酶由于基因突變導(dǎo)致的酶活性或性質(zhì)改變所引起的溶血及（或）其他表現(xiàn)的疾病。(一)紅細胞酶缺陷概述任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗最常見的為葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥、丙酮酸激酶缺陷癥。2、紅細胞酶缺陷的分類按細胞內(nèi)代謝作用不同糖酵解途徑的酶缺乏戊糖磷酸旁路代謝的酶缺乏核苷酸代謝的酶缺乏己糖激酶（HK）葡萄糖磷酸異構(gòu)酶（GPI）丙酮酸激酶（PK）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-PD）6-磷酸葡萄糖脫氫酶（6PGD）嘧啶5＇核苷酸酶（P5＇N）腺苷酸激酶（AK）磷酸果糖激酶（PFK）任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗(二)紅細胞酶缺陷的實驗室檢查

1.高鐵血紅蛋白還原試驗【實驗原理】高鐵血紅蛋白還原試驗（methemoglobinreductiontest,MHb-RT）的原理是：在血液中加入亞硝酸鹽使紅細胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白（MHb），正常紅細胞的G6PD催化磷酸戊糖旁路使NADP+(氧化型輔酶||）變成NADPH(還原型輔酶||），脫下的氫通過亞甲藍的遞氧作用和高鐵血紅蛋白(MHb）還原酶的作用，使高鐵血紅蛋白（Fe3+）還原成亞鐵血紅蛋白（Fe2+），溶液從暗褐色變?yōu)榧t色。當紅細胞G6PD缺乏時，由于NADPH生成減少或缺乏，MHb不被還原或還原速度顯著減慢，通過比色可計算MHb還原率的多少，以間接反映紅細胞內(nèi)G6PD的活性。

G6PG-6-PDNADP還原型美藍高鐵血紅蛋白（Fe3+）高鐵血紅蛋白還原酶6-磷酸葡萄糖酸NADPH氧化型美藍血紅蛋白（Fe2+）任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗【參考范圍】外周血高鐵血紅蛋白還原率≥75%(臍帶血≥77%）【臨床意義】G6PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降，見于蠶豆病、服用某些藥物（如伯氨喹、磺胺藥、抗瘧藥、砜類藥）后藥物性溶血性貧血、感染等。G6PD中間缺乏（雜合子型）外周血高鐵血紅蛋白還原率為31%—74%，臍血為41%—76%；G6PD嚴重缺乏（半合子或純合子型）外周血高鐵血紅蛋白還原率常＜30%，臍血＜40%。【應(yīng)用評價】本試驗簡便易行，國內(nèi)應(yīng)用較多，可作為G6PD缺乏癥的過篩試驗。任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗2.變性珠蛋白小體生成試驗【實驗原理】變性珠蛋白小體生成試驗(heinzbodytest)的原理是:在G6PD缺乏的患者血樣中加入乙酰苯肼于37°C孵育2~4小時，乙酰苯肼可使血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白，高鐵血紅蛋白解離成高鐵血紅素和變性珠蛋白，后者聚合成變性珠蛋白小體，附于紅細胞膜上。用煌焦油藍染色，油鏡下觀察并計算紅細胞中含5個及以上珠蛋白小體的紅細胞百分率。

變性珠蛋白小體任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗【參考范圍】含5

個及以上珠蛋白小體的紅細胞<30%?！九R床意義】1.

G6PD缺乏癥陽性細胞常>

45%，隨溶血病情好轉(zhuǎn)，陽性細胞減少，甚至消失。

2.含有不穩(wěn)定血紅蛋白的患者陽性細胞也可>30%，還原型谷胱甘肽缺乏癥也增高。3.接觸苯肼、硝基苯、苯胺等化學物質(zhì)陽性細胞也可增高。

【應(yīng)用評價】本試驗特異性較差，含有不穩(wěn)定血紅蛋白的患者陽性細胞也增多，因此本法主要作為G6PD缺乏的篩檢試驗，對G6PD缺乏癥的診斷還應(yīng)進一步作確診試驗。

任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗

3.G-6-PD熒光斑點試驗和活性

【實驗原理】在G-6-PD和NADP存在下,G-6-PD能使NADP還原成NADPH,后者在紫外線照射下會發(fā)出熒光。NADPH的吸收峰在波長340nm處，可通過單位時間生成的NADPH的量測定G-6-PD活性。

【參考區(qū)間】

正常人有強熒光。正常人酶活性為:(8.34土1.59)U/gHb(37C

)

(ICSH推薦的Glock與McLean法);(12.1土2.09)U/gHb(37°C

)

(WHO推薦的Zinkham法)。

G-6-PD缺陷者的熒光弱或無熒光;雜合子或某些G-6-PD變異者可有輕至中度熒光。

【臨床意義】

C-6-PD

缺陷見于蠶豆病、伯氨喹啉型藥物性溶血性貧血。利用此試驗可對高發(fā)區(qū)域人群或疑診的新生兒進行篩查。

任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗4.G6PD活性測定

【實驗原理】紅細胞中的葡簡糖.6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphatedehydrogenase,G6PD)可催化葡萄糖-6-磷酸轉(zhuǎn)化成6-磷酸葡萄糖酸，同時使反應(yīng)體系中的NADP+還原成NADPH,

NADPH在340nm波長處有吸收峰，直接測定340mm波長處吸光度的變化，通過計算單位時間生成的NADPH的量來測定G6PD活性。

【參考范圍】

(12.1

±2.09)

U/g

Hb

(Zinkham法)。

【臨床意義】G6PD缺陷見于蠶豆病、服用某些藥物(如伯氨喹、磺胺藥、抗瘧藥、砜類藥)后藥物性溶血性貧血、感染等。利用此試驗可對高發(fā)區(qū)域人群或疑診的新生兒進行篩查。

【應(yīng)用評價】本法為WHO推薦法，可直接測定NADPH的量，對G6PD缺乏癥診斷的特異性和敏感度較高，但在溶血高峰期及恢復(fù)期，酶活性可以接近正常，故應(yīng)離心去除衰老紅細胞，再進行測定，并于2~4個月后復(fù)查。新生兒的紅細胞和網(wǎng)織紅細胞內(nèi)G6PD活性較高，應(yīng)注意鑒別。任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗

【實驗原理】丙酮酸

激酶(pyruvate

kinase,

PK)在二磷酸腺苷(ADP)存在的條件下催化磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸，在輔酶I還原型(NADH)存在的情況下,丙酮酸被LDH轉(zhuǎn)化為乳酸，若標記熒光于NADH上，此時有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD,在長波紫外線的照射下，檢測以上過程熒光消失的時間可反映PK的活性?！緟⒖紖^(qū)間】正常人PK熒光斑點在25分鐘內(nèi)消失。酶活性(15.0士1.99)U/gHb。

【臨床意義】熒光斑點不消失或時間延長說明PK活性缺乏，中間缺乏(雜合子)時熒光25~

60分鐘消失，嚴重缺乏(純合子)時，熒光60分鐘不消失。任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗5.丙酮酸激酶熒光斑點試驗【實驗原理】在二磷酸腺苷(ADP)存在的條件下，丙酮酸激酶(pyruvatekinase,PK)可催化磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸，后者在乳酸脫氫酶(LD)催化下轉(zhuǎn)化為乳酸，同時使反應(yīng)體系中還原型輔酶I(NADH)氧化成NAD+,因NADH在340nm波長處有吸收峰，而NAD+沒有，可通過測定340nm波長下吸光度的下降，計算單位時間NADH減少量來求得PK活性。

【參考范圍】(15.0士1.99)U/g

Hb。

【臨床意義】活性下降或缺乏，見于先天性PK缺乏癥，嚴重缺乏(純合子)時，PK活性為正常的25%以下;中間缺乏(雜合子)時，為正常的25%~50%。此外，PK活性下降可見于繼發(fā)性PK缺乏癥，如再生障礙性貧血、白血病、MDS等。

【應(yīng)用評價】本試驗為紅細胞PK活性測定的定量試驗，特異性高，是診斷PK缺乏癥直接和可靠的指標。

任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗6.丙酮酸激酶活性測定紅細胞G-6-PD基因突變致活性降低和/或酶性質(zhì)改變，是一種X性連鎖隱性或不完全顯性遺傳性疾病。G-6-PD缺乏時，紅細胞膜脂質(zhì)和膜蛋白巰基的氧化，引起紅細胞僵硬，易被脾臟和肝臟中的巨噬細胞破壞導(dǎo)致溶血。分類蠶豆病急性溶血性貧血新生兒高膽紅素血癥先天性非球形紅細胞性溶血性貧血（CNSHA）1.紅細胞葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥（三）常見紅細胞酶缺陷癥

最常見的為葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥、丙酮酸激酶缺陷癥。任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗1．溶血的檢查非遺傳性有誘因，急性溶血，血管內(nèi)溶血；而遺傳性非球形細胞溶血性貧血具有慢性血管外溶血的實驗室特征2．G-6-PD缺乏的篩檢試驗高鐵血紅蛋白還原試驗、熒光斑點試驗、硝基四氮唑藍紙片法。熒光斑點試驗的特異性最高，高鐵血紅蛋白還原試驗的敏感性最強3．G-6-PD確診試驗G-6-PD活性定量檢測能準確反映酶的活性。1.紅細胞葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥

實驗室檢查任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗診斷依據(jù)是紅細胞G-6-PD活性的實驗室檢查，臨床表現(xiàn)及陽性家族史如篩選試驗中兩項中度異常；或一項篩選試驗中度異常加上Heinz小體生成試驗陽性（有40%紅細胞含Heinz小體，每個紅細胞有5個以上Heinz小體）并排除其他溶血病因；或一項篩選試驗中度異常，伴有明確的家族史；或一項篩檢試驗嚴重異常；或定量測定G-6-PD活性較正常平均值降低40%以上，均可確診。1.紅細胞葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥

診斷和鑒別診斷任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗PK基因缺陷，常染色體隱性遺傳，僅次于G-6-PD缺陷癥PK缺陷時，ATP產(chǎn)生減少，引起血管外溶血，表現(xiàn)為慢性溶血性貧血。檢驗

篩檢試驗紅細胞自溶血試驗、PK熒光斑點試驗

酶活性定量試驗PK活性檢測ATP測定

中間代謝產(chǎn)物測定2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG）

磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）2-磷酸甘油酸（2-PG）診斷和鑒別診斷紅細胞PK缺乏的實驗室診斷標準遺傳性紅細胞丙酮酸激酶缺乏癥主要通過紅細胞PK活性的測定進行診斷。2.丙酮酸激酶缺陷癥檢驗任務(wù)三紅細胞酶缺陷檢驗項目十溶血性貧血任務(wù)四血紅蛋白異常檢查項目十溶血性貧血成熟紅細胞內(nèi)的主要蛋白質(zhì)是血紅蛋白（Hb），占細胞干重的96%，占細胞容積的35%。正常血紅蛋白由兩對珠蛋白肽鏈和4個亞鐵血紅素構(gòu)成的4個亞基組成的四聚體，形狀近似球形的結(jié)合蛋白。血紅蛋白的合成受鐵的供應(yīng)、原卟啉和珠蛋白合成的影響。分子結(jié)構(gòu)：由血紅素和珠蛋白構(gòu)成，其分子由四個亞基構(gòu)成，即兩個α亞基和兩個β亞基，可組裝成α2β2結(jié)構(gòu)血紅蛋白合成：65%合成于有核紅細胞期，35%合成于網(wǎng)織紅細胞期血紅蛋白是一種結(jié)合蛋白，分子量約為64458每個亞基由：一條珠蛋白肽鏈和一個血紅素分子構(gòu)成血紅素是鐵原子和原卟啉Ⅸ的復(fù)合物。為含鐵卟啉衍生物，鐵原子位于原卟啉Ⅸ的卟啉環(huán)中心珠蛋白肽鏈有6種：α、β、γ、δ、ε、ζ。出生后白主要有α、β、γ、δ四種珠蛋白肽鏈（一）概述任務(wù)四血紅蛋白異常檢查血紅蛋白血紅素鐵原子原卟啉Ⅸ珠蛋白α、β、γ、δ、ε、ζ。出生后主要有α、β、γ、δ四種珠蛋白肽鏈正常血紅蛋白由兩對珠蛋白肽鏈和4個亞鐵血紅素構(gòu)成的4個亞基組成的四聚體，形狀近似球形的結(jié)合蛋白。血紅蛋白的合成受鐵的供應(yīng)、原卟啉和珠蛋白合成的影響。血紅蛋白由四條非共價結(jié)合的球蛋白鏈組成，每條鏈結(jié)合一血紅素基團，亦即血紅蛋白分子的氧結(jié)合位點。（一）概述任務(wù)四血紅蛋白異常檢查血紅素是鐵原子和原卟啉Ⅸ的復(fù)合物，是含鐵卟啉衍生物，鐵原子位于原卟啉Ⅸ的卟啉環(huán)中心。血紅素是血紅蛋白的組成成分，是Hb、Mb、多種酶和多種細胞色素的輔基，其合成于有核紅細胞和肝細胞的線粒體內(nèi)。血紅素合成后，離開線粒體，在胞質(zhì)內(nèi)與珠蛋白肽鏈結(jié)合為血紅蛋白；血紅素由脾臟、骨髓、肝臟中的巨噬細胞吞噬降解。在血紅素合成過程中酶的缺陷引起卟啉或其前體在體內(nèi)蓄積可導(dǎo)致卟啉病。珠蛋白按四級結(jié)構(gòu)與血紅素形成血紅蛋白，血紅蛋白的每個亞基由一條珠蛋白肽鏈和一個血紅素分子構(gòu)成，肽鏈在生理條件下成球形，把血紅素分子包在里面，這條肽鏈盤繞成的球形結(jié)構(gòu)又被稱為珠蛋白。（一）概述胚胎期：HbGower1（δ2ε2）HbGower2（α2ε2）HbPorthland（ζ2γ2）3周出現(xiàn)，12周完全消失出生后：HbA(α2β2)：占總量的96%～98%；HbA2(α2δ2)：占總量的1.2%～3.5%；HbF(α2γ2)：出生后迅速下降，2歲時接近成人，占總量的2%以下。胎兒后2/3期和新生兒期：HbF(α2γ2)：胎兒血紅蛋白任務(wù)四血紅蛋白異常檢查血紅蛋白病珠蛋白生成障礙性貧血，常見的疾?。寒惓Ｑt蛋白病，常見的疾?。海ㄖ榈鞍祖湐?shù)量異常，常染色體隱性遺傳）（珠蛋白鏈結(jié)構(gòu)異常，常染色體顯性遺傳）β-地中海貧血α-地中海貧血鐮狀細胞貧血（HbS?。┭t蛋白E病血紅蛋白病:由遺傳性或基因突變所致的珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)異常或合成肽鏈速率的改變，而引起血紅蛋白功能異常所致的疾病（二）異常血紅蛋白檢查任務(wù)四血紅蛋白異常檢查2.Hb電泳【實驗原理】血紅蛋白電泳(hemoglobinelectrophresis)是根據(jù)組成血紅蛋白的珠蛋白肽鏈不同，所含氨基酸不同，因此具有不同的等電點，在一定pH的緩沖液中帶有不同電荷。當血紅蛋白等電點小于緩沖液pHll時帶負電荷電泳時在電場中向陽極泳動，反之，血紅蛋白帶正電荷向陰極泳動。在一定電壓下經(jīng)過一定時間的電泳，不同的血紅蛋白由于所帶電荷不同、分子量不同,其泳動方向和速度不同，可分離出各自的區(qū)帶；對泳動出的各區(qū)帶進行比色或掃描，可對各種血紅蛋白進行定量分析。一般最常用的是pH8.5的堿性血紅蛋白電泳。任務(wù)四血紅蛋白異常檢查2.Hb電泳【參考區(qū)間】pH8.5TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳,結(jié)果如下：正常Hb電泳區(qū)帶HbA>95%,HbF<2%,HbA21.0%-3.1%,1-2條非血紅蛋白成分(NHb、NHb,)區(qū)帶。但正常情況下HbF與HbA很難分開，因此形成如下條帶。任務(wù)四血紅蛋白異常檢查2.Hb電泳【參考區(qū)間】pH8.5TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳,結(jié)果如下：異常H區(qū)帶以HBA為標準,異常Hb分為快速異常Hb(如HbH.HbJHbK)和慢速異常H(如HCHDB等)。任務(wù)四血紅蛋白異常檢查3.抗堿血紅蛋白測定【實驗原理】抗堿血紅蛋白檢測（alkaliresistanthemoglobin）是將待測的血液與一定量的堿性溶液混合，胎兒血紅蛋白(HbF)及某些異常血紅蛋白具有比HbA更強的抗堿作用，不發(fā)生變性,存在于上清液中；而HbA則變性沉淀。取上清液于540mm處測定吸光度，即可檢測抗堿血紅蛋白的濃度。此試驗也稱為堿變性試驗，其檢測的是抗堿血紅蛋白，除HbF外HbBart’s和部分HbH也有抗堿能力，需進一-步通過電泳鑒別。【參考區(qū)間】

本試驗主要測定HbF，健康成人≤2%，新生兒可高達40%以上。任務(wù)四血紅蛋白異常檢查4.異丙醇沉淀試驗

【實驗原理】異丙醇沉淀實驗（isopropanoltest）是因不穩(wěn)定血紅蛋白較正常血紅蛋白更易裂解,在異丙醇這種能降低血紅蛋白分子內(nèi)部氫鍵的非極性溶劑中，不穩(wěn)定血紅蛋白的穩(wěn)定性下降，比正常血紅蛋白更快沉淀。當溶血液中含有不穩(wěn)定血紅蛋白時,溶血液在加人異丙醇后很快混濁，并形成絨毛狀沉淀。【參考區(qū)間】健康成人標本陰性，臍血陽性，新生兒出生一個月后逐漸開始轉(zhuǎn)為陰性，六個月后為陰性。任務(wù)四血紅蛋白異常檢查5.HbA2微柱層析實驗【實驗原理】

HbA2微柱層析法主要根據(jù)HbA和HbA2等電點不同通過層析分離的方法將之分開。正常情況下,HbA和HbA2的等電點不同,HbA2的等電點為pH7.38，而HbA的等電點為pH6.95。在pH7.4以上的緩沖液中血紅蛋白均帶負電荷，可以與層析柱內(nèi)DEAE纖維素上的陰離子交換而吸附在纖維素分子上。改變洗脫液的pH,使其接近HbA,的等電點時,HbA2與DEAE纖維素分子的親和力下降,其從纖維柱上洗脫下來。選用洗脫液的pH與HbA的等電點接近時可將HbA洗脫下來，通過對洗脫液比色可分別定量測定HbA和HbA?！緟⒖紖^(qū)間】健康成年人HbA2:1.41%—3.61%,一歲以下約1%。任務(wù)四血紅蛋白異常檢查6.紅細胞包涵體檢查【實驗原理】紅細胞包涵體試驗是由于不穩(wěn)定血紅蛋白易氧化變性沉淀、在新鮮血液中加入煌焦油藍，37度孵育后，易被染成墨綠色或藍色球形小體，彌散而均勻的分布于紅細胞內(nèi)?！緟⒖紖^(qū)間】健康成年人為0%-5%。任務(wù)四血紅蛋白異常檢查珠蛋白生成障礙性貧血定義又稱為地中海貧血或海洋性貧血，它是由于遺傳的基因缺陷導(dǎo)致血紅蛋白中至少一種珠蛋白合成缺乏或不足，引起的貧血或病理狀態(tài)。分類按缺乏的珠蛋白鏈的種類分類α珠蛋白生成障礙性貧血β珠蛋白生成障礙性貧血按缺乏的珠蛋白鏈的程度分類完全無生成的α°、β°珠蛋白生成障礙性貧血部分生成的α+、β+珠蛋白生成障礙性貧血（βδ）°或（βδ）+珠蛋白生成障礙性貧血

1、概述（三）常見異常血紅蛋白病任務(wù)四血紅蛋白異常檢查圖10-16-1靶形紅細胞圖10-16-2紅細胞碎片任務(wù)四血紅蛋白異常檢查是珠蛋白生成障礙性貧血中發(fā)病率最高的一種類型。第11號染色體上控制β珠蛋白鏈合成的基因突變，β珠蛋白鏈合成受到抑制，雜合子的α鏈的合成速度比β鏈快2.0~2.5倍，純合子的α鏈合成的速度超過β鏈更多，甚至可完全沒有β鏈合成。多余的α鏈將導(dǎo)致：（1）α鏈聚合成不穩(wěn)定的四聚體（α4）增加，HbA2和HbF含量增加。（2）很不穩(wěn)定，容易發(fā)生沉淀，形成靶形紅細胞；（3）α鏈包含體附著于紅細胞膜，使紅細胞僵硬，導(dǎo)致無效造血。（4）紅細胞對鉀離子的通透性增加，能量代謝能力降低，生存期縮短。1、概述任務(wù)四血紅蛋白異常檢查分類輕型雜合子β珠蛋白生成障礙性貧血

沒有任何癥狀和貧血，但血涂片中可發(fā)現(xiàn)少數(shù)靶形紅細胞，紅細胞脆性試驗有輕度減低，HbA2輕度增高（大于3.5%）是其特點。重型純合子β珠蛋白生成障礙性貧血父母雙方均為輕型β珠蛋白生成障礙性貧血，出生后貧血進行性加重，有溶貧臨床表現(xiàn)，有地中海貧血面容。相關(guān)實驗室檢查明顯異常。中間型β珠蛋白生成障礙性貧血β珠蛋白生成障礙性貧血純合子型或雙重雜合子型。1、概述任務(wù)四血紅蛋白異常檢查由于α珠蛋白基因的缺乏或缺陷使α珠蛋白鏈合成速度明顯降低或幾乎不能合成引起的。由第16對染色體上兩對聯(lián)鎖的α珠蛋白基因（父母雙方各繼承兩個）所控制。1、概述任務(wù)四血紅蛋白異常檢查實驗室檢查血象貧血輕重不等，紅細胞大小不均，靶形RBC、碎片多大于10%，Ret增多，紅細胞脆性減低。骨髓象骨髓中紅細胞增生極度活躍，粒紅比例倒置，呈無效性增生和原位溶血血紅蛋白電泳檢測出異常血紅蛋白基因診斷2、實驗室檢查任務(wù)四血紅蛋白異常檢查2.實驗室檢查任務(wù)四血紅蛋白異常檢查珠蛋白生成障礙性貧血的鑒別診斷uHb，是由于控制血紅蛋白的肽鏈的基因突變，某些維持穩(wěn)定性的氨基酸被取代或缺失，致使血紅蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，稱為不穩(wěn)定血紅蛋白本病診斷有重要意義的是變性珠蛋白小體檢查、熱變性試驗和異丙醇沉淀試驗為陽性，一般用異丙醇試驗篩選，熱變性試驗和變性珠蛋白小體檢查診斷。多為正細胞性貧血，紅細胞大小不均，有異形和碎片，有時可見靶形紅細胞，網(wǎng)織紅細胞增高。血紅蛋白電泳僅有部分病例可分離出異常血紅蛋白區(qū)帶。易變性和沉淀，形成變性珠蛋白小體相應(yīng)臨床表現(xiàn)差異大（2）不穩(wěn)定血紅蛋白的實驗室檢查任務(wù)四血紅蛋白異常檢查不穩(wěn)定血紅蛋白病HbS，又稱鐮狀細胞貧血。出現(xiàn)異常血紅蛋白S的常染色體顯性遺傳疾病。因HbA的β鏈形成HbS（Hbα2β26谷→纈），當血氧過低時HbS互相聚集，形成纖維狀多聚體。，當有足夠的多聚體形成時，紅細胞即由雙面凹盤狀變成鐮刀形，此過程稱“鐮變”。【實驗室檢查】血紅蛋白降低，紅細胞大小不均，出現(xiàn)異形細胞、多染性紅細胞、有核紅細胞、靶形紅細胞等，鐮狀紅細胞不多見。網(wǎng)織紅細胞常大于10%。紅細胞鐮變試驗陽性，紅細胞滲透脆性明顯降低。血紅蛋白電泳，可見HbS帶位于HbA和HbA2間，采用基因分析，可作出基因診斷。HbS病有三種表現(xiàn)形式：①純合子形式，即鐮狀細胞貧血；②雜合子形式，即紅細胞鐮狀細胞性狀；③HbS和其他異常血紅蛋白的雙雜合子狀態(tài)（3）血紅蛋白S病任務(wù)四血紅蛋白異常檢查血紅蛋白S病HbE，是β鏈第26位谷氨酸被賴氨酸替代的異常血紅蛋白(α2β226谷-賴)。HbE病是出現(xiàn)血紅蛋白E的常染色體不完全顯性遺傳性血紅蛋白病，為我國最常見的血紅蛋白病?！緦嶒炇覚z查】多為小細胞低色素性輕度貧血，紅細胞滲透脆性降低，血紅蛋白電泳顯示HbE占75%~92%，因HbE不穩(wěn)定，異丙醇沉淀試驗陽性和熱變性試驗弱陽性；變性珠蛋白小體檢測陽性。三種類型：HbE純合子、HbE特征和HbE/β珠蛋白生成障礙性貧血臨床表現(xiàn)一般為輕度溶血性貧血，脾不腫大或輕度腫大，呈小細胞低色素性貧血，易感染并使貧血加重。（4）血紅蛋白E病任務(wù)四血紅蛋白異常檢查血紅蛋白E病任務(wù)五免疫性溶血性貧血檢驗項目十溶血性貧血（一）概述免疫性溶血性貧血-是由于免疫功能紊亂產(chǎn)生某種抗體能與自己正常紅細胞表面的抗原結(jié)合或激活補體，引起紅細胞過早破壞而導(dǎo)致的一組獲得性溶血性貧血，統(tǒng)稱免疫性溶血性貧血。依據(jù)病因可分為三類自身免疫性貧血同種免疫性貧血藥物免疫性貧血任務(wù)五免疫性溶血性貧血檢驗（二）免疫性溶血性貧血實驗室檢查1、抗人球蛋白試驗【實驗原理】檢測自身免疫性溶血性貧血(autoimmunehemolyticanemia,AIHA)患者體內(nèi)自身抗體(IgG,不完全抗體)的常用方法。該抗體能與表面有相應(yīng)抗原的紅細胞結(jié)合，使紅細胞致敏但不凝集。試驗分為直接抗人球蛋白試驗(directantiglobulintest,DAGT)用來檢測紅細胞表面有無不完全抗體；間接抗人球蛋白試驗(indirectantiglobulintest,IAGT)用來檢測血清中有無不完全抗體。直接試驗應(yīng)用抗人球蛋白試劑(抗IgG、IgM、IgA和/或抗C)與紅細胞表面的IgG分子結(jié)合，如紅細胞表面有自身抗體，可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。間接試驗應(yīng)用Rh(D)陽性O(shè)型紅細胞與受檢血清混合孵育，如血清中存在不完全抗體，可使紅細胞致敏，若再加入抗人球蛋白血清，可出現(xiàn)凝集。任務(wù)五免疫性溶血性貧血檢驗任務(wù)五免疫性溶血性貧血檢驗抗人球蛋白實驗原理示意圖【參考范圍】陰性。【臨床意義】自身免疫性溶血性貧血、冷凝集素綜合征、陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥、藥物性免疫性溶血、新生兒同種免疫性溶血、溶血性輸血反應(yīng)等直接抗人球蛋白試驗陽性，當抗體與紅細胞結(jié)合后，如有過剩抗體直接和間接試驗為陽性。系統(tǒng)性紅斑狼瘡、傳染性單核細胞增多癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎、淋巴細胞增殖性疾病、惡性腫瘤及某些慢性肝腎疾病等