血液學檢驗技術 課件 20.項目二十：血液凝固與凝血因子檢驗

單元四血栓與止血檢驗及其應用項目二十血液凝固與凝血因子檢驗任務一血液凝固目錄項目二十血液凝固與凝血因子檢驗任務二凝血因子檢驗項目二十血液凝固與凝血因子檢驗1.掌握：血液凝固的概念；凝血因子的名稱和分類；凝血過程的三個途徑；共同途徑的三個階段；APTT、PT、TT及FIB的測定方法、參考區(qū)間及臨床意義。2.熟悉：各凝血因子在凝血過程中的作用；內源和外源凝血途徑的概念；血液凝固機制圖；CT和ACT的測定方法、參考區(qū)間及臨床意義。3.了解：各凝血因子的特征；FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ促凝活性和FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ促凝活性及FⅩⅢ定性檢測的實驗原理、參考值和臨床意義。4.具備凝血檢測標本的采集和處理能力，具有CT、ACT、APTT、PT、TT及FIB的檢測能力。5.學會依據(jù)臨床要求有選擇性進行凝血功能相關指標檢測，并能根據(jù)結果提示臨床常見的出凝血疾病。學習目標任務一血液凝固項目二十血液凝固與凝血因子檢驗血液凝固的概念血液凝固是指血液由液體狀態(tài)轉變?yōu)槟z狀態(tài)的過程。血液凝固任務一血液凝固

（一）凝血因子參加血液凝固的凝血因子至少有14個：12個經典的凝血因子：包括FⅠ、FⅡ、FⅢ、FⅣ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅩ、FⅪ、FⅫ、FⅩⅢ2個激肽系統(tǒng)的因子：激肽釋放酶原（PK）和高分子量激肽原（HMWK或HK）

任務一血液凝固

凝血因子的特征分為以下四類依賴維生素K的凝血因子：FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ接觸激活因子：FⅫ、FⅪ、PK、HMWK凝血酶敏感因子：FⅠ、FⅤ、FⅧ、FⅩⅢ其他凝血因子：TF、Ca2+、vWF任務一血液凝固（一）凝血因子

（二）凝血機制內源凝血途徑（指從FⅫ激活到FⅩ被激活的過程）外源凝血途徑（從FⅢ的釋放到FⅩ被激活的過程）共同途徑（從FⅩ的激活到纖維蛋白形成的過程）任務一血液凝固

共同凝血途徑包括以下三個階段：

（1）凝血酶原酶（凝血活酶）生成（2）凝血酶生成（3）纖維蛋白形成任務一血液凝固（二）凝血機制

任務一血液凝固（二）凝血機制任務二凝血因子檢驗項目二十血液凝固與凝血因子檢驗

凝血因子檢測項目（一）全血凝固時間（CT）測定（二）活化凝血時間（ACT）測定（三）活化部分凝血活酶時間（APTT）測定（四）血漿凝血酶原時間（PT）測定（五）凝血酶時間測定(TT)及糾正試驗（六）血漿纖維蛋白原（FIB）測定（七）FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ促凝活性測定（八）FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ促凝活性測定（九）FⅩⅢ檢測任務二凝血因子檢驗

（一）全血凝固時間（CT）測定【實驗原理】離體的靜脈血與試管內壁接觸后，血液中的FⅫ被激活，啟動內源凝血途徑，從而使血液發(fā)生凝固。從靜脈血離開血管后至完全發(fā)生凝固所需要的時間即為CT?！緟⒖紖^(qū)間】試管法：4～12分鐘；硅管法：15～30分鐘；塑料管法：10～19分鐘?！九R床意義】1.延長：①內源凝血途徑相關凝血因子缺乏或活性下降；②共同凝血途徑相關凝血因子缺乏或活性下降，③原發(fā)或繼發(fā)性纖溶亢進，④血液循環(huán)中存在病理性抗凝物質。2.縮短：①高凝狀態(tài)；②血栓性疾病。任務二凝血因子檢驗

（二）活化凝血時間（ACT）測定【實驗原理】在待測血液中加入白陶土-腦磷脂的混懸液以充分激活的FⅪ、FⅫ，并為凝血反應提供豐富的催化表面，啟動內源凝血途徑，血液發(fā)生凝固所需時間即ACT。同試管法CT測定?！緟⒖紖^(qū)間】凝固法：1～2.5分鐘。【臨床意義】1.同CT相同。2.用于監(jiān)測肝素抗凝治療。任務二凝血因子檢驗

（三）活化部分凝血活酶時間（APTT）測定【實驗原理】37℃條件下，在待測血漿中加入足夠量的活化接觸因子作為激活劑(如白陶土等)，并加入部分凝血活酶代替PF3，在Ca2+的參與下，即可激活FⅫ而啟動內源凝血途徑，使血漿發(fā)生凝固。從加入Ca2+到血漿凝固所需的時間即APTT。【參考區(qū)間】凝固法：25～35秒，超過正常對照值10秒以上為異常?！九R床意義】1.延長：血漿中內源凝血系統(tǒng)凝血因子（FⅫ、FⅪ、FⅨ、FⅧ等）或共同途徑中的凝血因子（FⅠ、FⅡ、FⅤ、FⅩ）水平下降或缺乏；原發(fā)或繼發(fā)性纖溶亢進，血液循環(huán)中存在病理性抗凝物質。2.縮短：高凝狀態(tài)；血栓性疾病。3.肝素抗凝治療的監(jiān)測。任務二凝血因子檢驗

（四）血漿凝血酶原時間（PT）測定【實驗原理】在37℃條件下,在待測血漿中加入足量的組織凝血活酶(含組織因子、磷脂)作為激活劑，并加入適量Ca2+，即可激活FⅦ而啟動外源凝血途徑，使血漿發(fā)生凝固。從加入Ca2+到血漿開始凝固所需的時間即為PT?！緟⒖紖^(qū)間】PT(s)11～13秒，PTR0.85～1.15，INR0.8～1.5。PTA70%～130%?！九R床意義】1.延長：①先天性凝血因子缺乏，②獲得性凝血因子缺乏，③原發(fā)性及繼發(fā)性纖溶亢進，④血液中存在抗凝物質或口服抗凝劑等。2.縮短：①先天性FⅤ增多癥，②高凝狀態(tài)，③血栓性疾病，④長期口服避孕藥。3.口服抗凝劑的監(jiān)測：口服抗凝劑期間，INR維持在2～3為最佳抗凝效果。任務二凝血因子檢驗

（五）凝血酶時間測定(TT)及糾正試驗【實驗原理】在37℃條件下,向待測血漿加入“標準化”凝血酶，測定開始出現(xiàn)纖維蛋白絲所需的時間即為TT。凝血酶時間糾正試驗又稱甲苯胺藍糾正試驗。【參考區(qū)間】凝固法：16～18秒，超過正常對照3秒以上。在TT延長的待測血漿中加入甲苯胺藍后，TT縮短5秒以上視為糾正。【臨床意義】1.延長：纖維蛋白原的量和質存在異常；血液循環(huán)中存在肝素或肝素樣抗凝物質；原發(fā)性及繼發(fā)性纖溶亢進。2.縮短：主要見于異常纖維蛋白血癥或巨球蛋白血癥等。3.溶栓治療的監(jiān)測任務二凝血因子檢驗

（六）血漿纖維蛋白原（FIB）測定【實驗原理】在待測血漿中加入足量的凝血酶，在凝血酶作用下纖維蛋白原轉變?yōu)槔w維蛋白而使血液凝固，測定凝固的時間。血漿中纖維蛋白原的量與凝固時間成負相關，將檢測結果與以國際標準品為參比血漿制成的標準曲線對比可得出纖維蛋白原的含量。【參考區(qū)間】凝血酶法：2～4g/L?！九R床意義】1.增高：①感染，②無菌性炎癥，③高凝狀態(tài)與血栓性疾病，④惡性腫瘤，⑤外傷、外科手術后及放射治療后。2.減低：①原發(fā)性纖維蛋白原質或量的異常，②原發(fā)或繼發(fā)性纖溶亢進。3.抗凝治療、溶栓治療的監(jiān)測。任務二凝血因子檢驗

（七）FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ促凝活性測定【實驗原理】將待測血漿分別與缺乏凝血因子FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ的血漿混合，測定混合后血漿的凝血酶原時間（PT）。將混合血漿的PT與健康人新鮮混合血漿（測定健康人新鮮混合血漿PT并制作標準曲線）做比較，計算出待測血漿相當于健康人血漿凝血因子活性的百分比?！緟⒖紖^(qū)間】FⅡ：C、FⅤ：C、FⅦ：C、FX：C70%～120%?！九R床意義】1.活性增高：主要見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。2.活性減低：①肝臟疾?。虎诰S生素K缺乏和口服抗凝劑；③彌散性血管內凝血及循環(huán)中存在上述因子的抑制物。④先天性FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ缺乏癥。任務二凝血因子檢驗

（八）FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ促凝活性測定【實驗原理】在待測血漿中分別與缺乏凝血因子FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ的基質血漿混合，測定混合后血漿的APTT。將混合血漿的APTT與健康人新鮮混合血漿（測定健康人新鮮混合血漿APTT并制作標準曲線）做比較，計算出待測血漿相當于健康人血漿凝血因子活性的百分比?！緟⒖紖^(qū)間】FⅧ：C：103％±25.7％；FⅨ：C：98.1％±30.4％；FⅪ：C：100％±18.4％；FⅫ：C：92.4％±20.7％?！九R床意義】1.活性增高：見于高凝狀態(tài)、血栓前狀態(tài)和血栓性疾病，肝臟疾病時FⅧ：C活性可增高。2.活性減低：①血友??；②血管性血友?。虎鄹闻K疾??；④先天性FⅪ、FⅫ缺乏癥。任務二凝血因子檢驗

（九）FⅩⅢ檢測1.FⅩⅢ定性檢測【實驗原理】待測血漿加入Ca2+后形成纖維蛋白單體，F(xiàn)ⅩⅢa可以使纖維蛋白單體交聯(lián)后形成不溶性的纖維蛋白聚合物凝塊，此凝塊不溶于5mol/L尿素溶液或2％單氨（碘）醋酸溶液。如果待測血漿FⅩⅢ活性缺乏，則形成的纖維蛋白凝塊易溶于上述溶液中。因此，可以根據(jù)待測血漿對缺乏FⅩⅢ血漿的糾正程度來測定FⅩⅢ：C。【參考區(qū)間】24h內纖維蛋白凝塊不溶解?！九R床意義】見亞基抗原檢測。任務二凝血因子檢驗

（九）FⅩⅢ檢測2.FⅩⅢ亞基抗原檢測（火箭電泳法）【實驗原理】FⅩⅢ是由兩個A亞基和兩個B亞基構成的四聚體，在含有A亞基和B亞基抗血清的瓊脂凝膠板中，加入待測血漿（抗原），通過電泳形成A亞基或B亞基與抗血