DB32T 3283-2017 番茄抗南方根結(jié)線蟲鑒定技術(shù)規(guī)程　　

ICS65.020.20B31備案號：54552-2017DB32TechnicalregulationforidentificatingtomatoresistancetosouthernTechnicalregulationforidentificatingtomatoresistancetosouthern江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局IDB32/T3283—2017本標(biāo)準(zhǔn)的按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》的規(guī)定編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王銀磊、趙統(tǒng)敏、余文貴、楊瑪麗、趙麗萍。1DB32/T3283—2017番茄抗南方根結(jié)線蟲鑒定技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了番茄對番茄根結(jié)線蟲病抗性鑒定及評價的育苗管理、線蟲準(zhǔn)備、病情鑒定、病情調(diào)查、抗性評價等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于江蘇省范圍內(nèi)的番茄對南方根結(jié)線蟲病的抗性鑒定及其抗性評價工作。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。GB/T8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則NY/T1858.7番茄抗黃瓜花葉病毒病鑒定技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義3.1病情級別Diseaseratingscale人為定量植物個體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述(注:引自NY/T1858.7)。3.2病情指數(shù)Diseaseindex是全面考慮發(fā)病率與嚴(yán)重度兩者的綜合指標(biāo)(注:引自NY/T1858.7)。病情指數(shù)按公式（1）計算：DI=──────────×100%.....................................................................................(1)式中：DI：病情指數(shù)Xi：病害分級標(biāo)準(zhǔn)各級級值ni：各級嚴(yán)重度的調(diào)查單株數(shù)Ni：調(diào)查單株總數(shù)amax：最高級值4試劑與耗材2DB32/T3283—20174.1試劑10％磷酸三鈉溶液50g磷酸三鈉(Na3PO4?12H2O)溶于500mL水中即成。4.2耗材本鑒定技術(shù)規(guī)程中使用耗材包括：磷酸三鈉、培養(yǎng)皿、燒杯、剪刀、鑷子、草炭、蛭石、育苗盤、營養(yǎng)缽等。5儀器與設(shè)備本鑒定技術(shù)規(guī)程中使用儀器設(shè)備包括：冰箱、恒溫培養(yǎng)箱、計數(shù)器、烘箱、改進貝曼漏斗、人工氣侯室、移液器、顯微鏡、血球計數(shù)板等。6育苗及育苗管理6.1育苗方式將鑒定品種用10％磷酸三鈉溶液浸種、催芽，種子露白后進行播種。以日光溫室或塑料大棚作為育苗場地，播種選用基質(zhì)配比為草炭：蛭石=2:1。播種選用128孔（16*8）的穴盤，每孔播種1粒。幼苗達到2葉1心時及時進行移栽，移栽時選用基質(zhì)為沙壤土：河沙=2:1，基質(zhì)配好混勻后置于烘箱180℃烘烤2小時。將幼苗單株定植于直徑15cm*高15cm的營養(yǎng)缽中。接種苗所處環(huán)境溫度白天23℃~26℃,夜間17℃~19℃。6.2播種及接種期間田間肥水管理參鑒品種播種至接種期間，水肥管理與常規(guī)生產(chǎn)一致。6.3病蟲害的防治參鑒番茄品種在接種前10d和接種后45d內(nèi)應(yīng)避免施用任何農(nóng)藥，其它期間病蟲害防治使用藥劑按照GB4285和GB8321規(guī)定執(zhí)行。6.4對照品種試驗中設(shè)置抗病和感病對照品種，可選用Moneymaker或蘇粉9號（Solanumlycopersicum）作為感病對照品種，選用含有純合Mi-1基因的Motelle（Solanumlycopersicum）作為抗病對照材料。7接種方法7.1根結(jié)線蟲的準(zhǔn)備利用分子鑒定的方法，對根結(jié)線蟲進行鑒定，確定所用線蟲為南方根結(jié)線蟲。用感病材料作為根結(jié)線蟲的繁殖寄主，待根結(jié)線蟲在植株根部繁殖出大量卵塊后，將植株連根拔起，挑取線蟲卵塊于改進的貝曼漏斗上。將貝曼漏斗置于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿加水至液面與卵塊層面平齊。將培養(yǎng)皿置于28℃的培養(yǎng)箱中，進行二齡幼蟲的孵化。每24小時收集孵化液并再次加入蒸餾水進行孵化，將收集好的線蟲接種液放置于室溫，每天對接種液進行3~4次的人工補氧。收集兩次孵化液后，在顯微鏡下，用血球計數(shù)板對接種液的濃度測定，待線蟲接種液的總蟲量達到接種所需量時用于接種。7.2人工接種鑒定方法3DB32/T3283—2017待鑒定品種苗齡為4葉1心時，方可進行人工接種。接種實驗以人工氣候室為宜，便于對溫度進行控制。接種前一天澆水一次。待鑒定品種和抗感病對照品種各30株。接種時，用1.5ml的移液器吸頭在距植株根莖部2cm的位置左右對稱扎兩個深約1cm~2cm的小洞。用移液器將接種液平均的接終于兩個洞內(nèi)，每個苗盆接種3000條南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲，接種后一天方可澆水，但不可澆大水，7天后澆水恢復(fù)正常管理?？刂迫斯夂蚴噎h(huán)境，使環(huán)境溫度白天23℃~26℃,夜間17℃~19℃。鑒定室內(nèi)不施用任何殺蟲劑。8病情調(diào)查8.1調(diào)查時間接種45d后，將待鑒定材料和抗感病對照材料小心的從苗缽中取出，抖掉土壤，用水沖洗干凈。8.2調(diào)查方法對每份鑒定材料的根結(jié)數(shù)進行人工統(tǒng)計，根據(jù)根結(jié)數(shù)對每一植株進行鑒定分級，記載病情級別。8.3發(fā)病記載分級標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)分級標(biāo)準(zhǔn)記載病情，分級標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1番茄根結(jié)線蟲病病情級別及其癥狀描述病情級別癥狀描述8.4病情指數(shù)的計算和記載根據(jù)表1記載接種植株的病情級別及其相對應(yīng)的癥狀描述，調(diào)查所有接種植株的發(fā)病情況，記載各品種（系）每一單株的病情級別，按公式（1）計算病情指數(shù)。9抗性評價9.1鑒定有效性判別當(dāng)鑒定圃中的感病對照品種的病情指數(shù)達到75％以上，該批次抗番茄根結(jié)線蟲病鑒定視為有效。9.2抗性級別依據(jù)鑒定番茄品種（系）發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對番茄根結(jié)線蟲病的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2番茄品種(系)對番茄根結(jié)線蟲病抗性評價標(biāo)準(zhǔn)4DB32/T3283—2017病情指數(shù)(%)抗性評價英文縮寫0RS9.3重復(fù)鑒定初次鑒定中表現(xiàn)為高抗、抗病、中抗、感病的材料，進行重復(fù)鑒定。9.4抗性評價一次鑒定結(jié)果僅能作為初步鑒定結(jié)果，不能作為抗性評價的依據(jù)。根據(jù)兩次及兩次以上抗性鑒定結(jié)果對鑒定材料進行抗病性評價，抗性級別以統(tǒng)計的最高病情指數(shù)為準(zhǔn)。10接種后與鑒定材料的處理將鑒定后的田間病株及病土進行高溫烘箱烘烤后方可丟棄。11鑒定記載表格番茄抗根結(jié)線蟲病鑒定結(jié)果記載表