DB32T 3762.16-2021 新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 第16部分：核酸數(shù)字PCR法　　

DB32TechnicalspecificationsforSPart16:Novelcoronavirusnu江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 1 2 2 2 2——第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定心、泰州市疾病預(yù)防控制中心、蘇州銳訊生物科技有限公司、北京新羿生物科1拭子等，以及其他需要檢測(cè)的樣本的核算數(shù)字PDB32/T3762.3新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第3部分4縮略語數(shù)字PCR：數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digitalpolydNTPs：脫氧核糖核酸三磷酸（deoxy-ribonucle人RNaseP基因：人核糖體核酸酶基因增結(jié)束后對(duì)各個(gè)反應(yīng)單元的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，進(jìn)而計(jì)算出原始樣本中目標(biāo)分子濃目前數(shù)字PCR技術(shù)包括芯片式和微滴式兩種，芯片式通過微流控芯片實(shí)現(xiàn)對(duì)原始反應(yīng)體系的分現(xiàn)體系的分割，該方法有反應(yīng)速度快，檢測(cè)成本低的優(yōu)點(diǎn)。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)新型冠狀病毒核酸數(shù)字PCR的定量檢測(cè)，本標(biāo)準(zhǔn)通過數(shù)字PCR的擴(kuò)增反應(yīng)直接得出新冠病毒ORF1a/b基因和N基因27.1新冠病毒核酸提取試劑盒：應(yīng)當(dāng)選擇國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的試劑，建議選擇磁珠法、膜吸分的數(shù)字PCR預(yù)混液，推薦根據(jù)不同的數(shù)字PCR方法和儀器選5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG新型冠狀病毒N基因5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-9操作步驟312345試驗(yàn)中應(yīng)設(shè)置陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。用含2019-nCoVORF1ab基因特異片段的病毒樣顆粒、含2019-nCoVN基因特異片段的病毒樣顆粒和含人RNaseP基因特異片段的質(zhì)粒作為陽性對(duì)照。用無核c)陽性對(duì)照兩個(gè)靶標(biāo)（ORF1ab、N）熒光4如果出現(xiàn)單個(gè)靶標(biāo)＞100copies/mL的檢測(cè)結(jié)果，則需>100copies/mL，判定為陽性；