2025屆高考生物一輪復(fù)習(xí)新考案-大單元11生物技術(shù)與工程第53講微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(人教版2019)VIP

大單元十一生物技術(shù)與工程第53講微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用【課標(biāo)內(nèi)容】1．滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提；2．闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品與無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)；3．說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物；4．概述平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法；5．概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法?？键c(diǎn)1培養(yǎng)基和無(wú)菌技術(shù)考點(diǎn)落實(shí)知識(shí)1微生物的培養(yǎng)基1．概念：人們按照微生物對(duì)__營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)__的不同需求，配制出供其__生長(zhǎng)繁殖__的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。2．類(lèi)型(1)根據(jù)物理性質(zhì)分①固體培養(yǎng)基——用于微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)和保藏等。②__液體培養(yǎng)基__——一般用于工業(yè)生產(chǎn)。③半固體培養(yǎng)基。三者的區(qū)別在于是否加入凝固劑及加的量多少。常用的凝固劑有__瓊脂__等。(2)根據(jù)成分分①__天然培養(yǎng)基__——一般用于普通培養(yǎng)和工業(yè)化生產(chǎn)，如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。②合成培養(yǎng)基——多用于研究和育種。(3)根據(jù)用途分eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(基礎(chǔ)培養(yǎng)基,特殊培養(yǎng)基\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(__選擇培養(yǎng)基__,鑒別培養(yǎng)基等))))3．培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成(1)各種培養(yǎng)基一般都含有__水、碳源、氮源__和無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)作用主要來(lái)源水良好的溶劑、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重要組成成分培養(yǎng)基、空氣、代謝產(chǎn)物碳源提供碳元素，有些是異養(yǎng)生物的__能源__物質(zhì)葡萄糖、蔗糖、淀粉、纖維素等氮源提供氮元素，合成__蛋白質(zhì)、核酸__、磷脂以及含氮代謝產(chǎn)物無(wú)機(jī)氮源，如銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源，如酵母粉、__牛肉膏__、__蛋白胨__等無(wú)機(jī)鹽組成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和許多化合物，調(diào)節(jié)生命活動(dòng)；某些化能自養(yǎng)菌的能源如磷酸鹽等無(wú)機(jī)化合物(2)培養(yǎng)基的其他條件：滿(mǎn)足微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及O2等的需求。培養(yǎng)微生物種類(lèi)特殊要求乳酸桿菌培養(yǎng)基中添加__維生素__霉菌培養(yǎng)基的pH調(diào)至__酸性__細(xì)菌培養(yǎng)基的pH調(diào)至__中性或弱堿性__厭氧微生物需要提供__無(wú)氧__的條件深度指津不同種類(lèi)的微生物代謝特點(diǎn)不同，因此對(duì)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求也不同。如，自養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是無(wú)機(jī)鹽，碳源可來(lái)自大氣中的CO2，氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽提供。異養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源、氮源必須由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無(wú)機(jī)氮源。知識(shí)2無(wú)菌技術(shù)獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是__防止雜菌污染__。無(wú)菌技術(shù)主要包括：__消毒__和__滅菌__。1．消毒和滅菌項(xiàng)目消毒滅菌概念使用較為_(kāi)_溫和__的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體__表面__或內(nèi)部一部分微生物使用__強(qiáng)烈__的理化方法殺死物體內(nèi)外__所有__的微生物，包括__芽孢和孢子__常用方法__煮沸__消毒法、巴氏消毒法、__酒精__消毒法、紫外線(xiàn)消毒法__濕熱__滅菌(如高壓蒸汽滅菌法)、干熱滅菌、__灼燒__滅菌區(qū)別最大區(qū)別在于是否殺死芽孢和孢子2．三種滅菌方法的比較類(lèi)型濕熱滅菌干熱滅菌灼燒滅菌媒介沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽熱空氣火焰的充分燃燒層方法高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃，維持15～30min160～170℃、1～2h(2023年人教版)直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒對(duì)象__培養(yǎng)基__等耐高溫的和需要保持干燥的物品，如__玻璃器皿__、__金屬用具_(dá)_等__接種工具_(dá)_、試管口、瓶口等原理高溫或高溫、高壓使蛋白質(zhì)__變性失活__，導(dǎo)致微生物活體以及芽孢和孢子全部死亡3．操作對(duì)象或注意點(diǎn)(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的__空間__、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和__消毒__。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行__滅菌__。(3)為了避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作都應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在__酒精燈火焰__附近進(jìn)行。(4)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與__周?chē)奈锲穇_接觸。解疑釋惑教材中的高壓蒸汽滅菌鍋利用的是濕熱滅菌原理。關(guān)于手動(dòng)式高壓蒸汽滅菌鍋的使用如下：操作步驟操作要領(lǐng)①加水向外層鍋內(nèi)加水(蒸餾水或純化水)，水面達(dá)到水位標(biāo)記線(xiàn)即可(水量過(guò)少會(huì)燒干)②裝鍋將待滅菌物品放在滅菌桶中(不要裝得太滿(mǎn)，至少留__1/3__空間)，加蓋，__對(duì)稱(chēng)__旋緊固定螺栓③加熱排氣加熱滅菌鍋，打開(kāi)排氣閥，等冷空氣__充分排出__后，關(guān)閉排氣閥(壓強(qiáng)達(dá)標(biāo)時(shí)，溫度上不去，蒸汽的穿透力低，影響滅菌效果)④保溫、保壓100kPa、121℃下，15～30min(蘇教版為103kPa、121℃下15～20min)⑤出鍋壓力表指針降至“0”點(diǎn)，溫度下降后再打開(kāi)排氣閥概念思辨1．判斷下列說(shuō)法的正誤：(1)液體培養(yǎng)基含有水，而固體培養(yǎng)基不含水。(×)提示：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基都含有水，它們的區(qū)別為是否含有凝固劑。(2)以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物，其中碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)。(×)提示：CO2為無(wú)機(jī)碳源，不能作為能源物質(zhì)。(3)無(wú)菌技術(shù)能有效避免操作者被微生物感染。(√)(4)用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進(jìn)行消毒。(×)提示：用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基都要進(jìn)行滅菌。(5)巴氏消毒法用于牛奶、啤酒、果酒和醬油等不耐高溫的液體。(√)(6)對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌時(shí)，只需要在酒精燈火焰上燒紅環(huán)狀部分。(×)提示：需要灼燒接種環(huán)的金屬部分以及手柄，凡是能夠深入試管的部分都需要灼燒滅菌。2．在科研和生產(chǎn)上，研究和應(yīng)用微生物的前提是__防止雜菌污染__，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。在實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)微生物，一方面要為人們需要的微生物提供合適的__營(yíng)養(yǎng)__和環(huán)境條件，另一方面確保其他微生物無(wú)法混入。典題說(shuō)法考向1培養(yǎng)基的選擇下列關(guān)于培養(yǎng)基和所含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的說(shuō)法，正確的是(C)A．通常情況下，瓊脂既可作為凝固劑，也可作為微生物的碳源B．蛋白胨為微生物的生長(zhǎng)主要提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素C．培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)維生素D．被污染的培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌后還能繼續(xù)使用解析：一般情況下，瓊脂可以作為凝固劑，但不能作為微生物的碳源，A錯(cuò)誤；蛋白胨可以為微生物的生長(zhǎng)主要提供碳源、氮源和維生素等，不能提供磷酸鹽，牛肉膏提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等，B錯(cuò)誤；為了滿(mǎn)足乳酸桿菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求，保證乳酸桿菌能正常生長(zhǎng)繁殖，培養(yǎng)乳酸桿菌的時(shí)候需要在培養(yǎng)基中添加維生素，C正確；污染的培養(yǎng)基不能再次滅菌后使用，因?yàn)榭赡軐?dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)發(fā)生變化，從而使培養(yǎng)基失去營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，D錯(cuò)誤?？枷?無(wú)菌技術(shù)(2019·江蘇卷)下列關(guān)于微生物實(shí)驗(yàn)操作的敘述，錯(cuò)誤的是(A)A．培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒C．接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)污染D．菌種分離和菌落計(jì)數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基解析：接種室、接種箱等常用紫外線(xiàn)消毒法處理，接種環(huán)等常用灼燒滅菌法處理，吸管、培養(yǎng)皿等常用干熱滅菌法處理，培養(yǎng)基及多種器材用高壓蒸汽滅菌法處理。獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，以下敘述錯(cuò)誤的是(B)A．接種過(guò)程中，試管口、瓶口等容易被污染的部位，通過(guò)火焰灼燒來(lái)滅菌B．為防止雜菌污染，在配制培養(yǎng)基時(shí)都需要加入適量的抗生素C．在接種室噴灑適量煤酚皂溶液，再進(jìn)行紫外線(xiàn)消毒，可以加強(qiáng)消毒效果D．有的微生物能夠寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)，用其來(lái)凈化污水屬于生物消毒法解析：在存放時(shí)，試管口、瓶口與空氣接觸容易被雜菌污染，接種時(shí)通過(guò)酒精燈火焰灼燒來(lái)滅菌，A正確；抗生素能夠殺死細(xì)菌，如果想獲得的微生物是細(xì)菌，則細(xì)菌不能在加入抗生素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，B錯(cuò)誤；在接種室噴灑適量煤酚皂溶液，屬于化學(xué)藥物消毒，再進(jìn)行紫外線(xiàn)消毒，可以加強(qiáng)消毒效果，C正確；有的微生物能夠寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)使細(xì)菌裂解，常用于凈化污水、污泥，屬于生物消毒法，D正確?？键c(diǎn)2微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)考點(diǎn)落實(shí)知識(shí)1微生物的純培養(yǎng)1．純培養(yǎng)：在微生物學(xué)中，將接種于__培養(yǎng)基__內(nèi)，在合適條件下形成的含__特定種類(lèi)微生物__的群體稱(chēng)為培養(yǎng)物。由__單一個(gè)體繁殖__所獲得的微生物群體稱(chēng)為純培養(yǎng)物，獲得__純培養(yǎng)物__的過(guò)程就是純培養(yǎng)。2．微生物純培養(yǎng)的步驟：__配制培養(yǎng)基__、__滅菌__、倒平板、__接種__、分離和培養(yǎng)等步驟。3．酵母菌的純培養(yǎng)(1)菌落：分散的微生物在適宜的__固體培養(yǎng)基__表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的__子細(xì)胞群體__。(2)獲得單菌落的兩種方法：__平板劃線(xiàn)法__和__稀釋涂布平板法__。(3)酵母菌的純培養(yǎng)步驟eq\a\vs4\al(,\x(\a\al(制備,培養(yǎng)基)),)eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(\a\vs4\al(配制培養(yǎng)基：,)去皮馬鈴薯200g切塊，加水1000mL，煮爛，用紗布過(guò)濾，,

加20ga．__葡萄糖__，15～20gb．__瓊脂__，,

用蒸餾水定容至1000mL,↓,\a\vs4\al(滅菌：配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中進(jìn)行c.__高壓蒸汽__滅菌；,

培養(yǎng)皿進(jìn)行d．__干熱__滅菌),↓,\a\vs4\al(倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至e.__50__℃左右，在f.__酒精燈火焰__,

附近倒平板)))eq\a\vs4\al(,\x(\a\al(接種和分,離酵母菌)),)—eq\b\lc\[(\a\vs4\al\co1(通過(guò)g.__接種環(huán)__在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn),的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面))eq\x(培養(yǎng)酵母菌)eq\a\vs4\al(—)eq\b\lc\[(\a\vs4\al\co1(完成平板劃線(xiàn)后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的,平板和h．__一個(gè)未接種__的平板i.__倒置__，,放入28℃左右的j．__恒溫培養(yǎng)箱__中培養(yǎng)24～48h))注：倒平板的具體操作步驟如下圖所示：①拔出錐形瓶的棉塞↓②將瓶口迅速通過(guò)火焰↓③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基(10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋↓④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿k．__倒過(guò)來(lái)__放置解疑釋惑平板倒置培養(yǎng)的目的主要有：既可以__防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基__造成污染，又可以__避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)__，等等。知識(shí)2分離純化，獲得單菌落的兩種方法1．純化方法eq\o(\s\up7(),\s\do5(A))eq\o(\s\up7(),\s\do5(B))(1)上圖A可表示用__平板劃線(xiàn)__法接種獲得的平板，菌體的分離是通過(guò)__連續(xù)劃線(xiàn)__操作實(shí)現(xiàn)的。(2)上圖B可表示用__稀釋涂布平板__法接種獲得的平板，菌體的分散是通過(guò)一系列的__梯度(等比)稀釋__操作實(shí)現(xiàn)的。(3)獲得圖A用到的接種工具是接種環(huán)，而圖B是__涂布器__。圖A、B都可用于觀察菌落特征。2．平板劃線(xiàn)的具體操作①將接種環(huán)放在火焰(外焰)上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅↓②在火焰旁冷卻接種環(huán)(防止__溫度過(guò)高殺死菌種__)。同時(shí)，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞↓③將試管口通過(guò)火焰↓④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液↓⑤將試管口通過(guò)火焰，并塞上棉塞↓⑥在火焰附近將皿蓋__打開(kāi)一條縫隙__(不能完全打開(kāi)，防止__雜菌污染__)，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃__三至五條平行線(xiàn)__，蓋上皿蓋↓⑦灼燒接種環(huán)，待其__冷卻__后，從第一次劃線(xiàn)的__末端__開(kāi)始作第二次劃線(xiàn)。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線(xiàn)。注意不要將__最后一次__的劃線(xiàn)與第一次的劃線(xiàn)相連解疑釋惑三次灼燒接種環(huán)的目的不同①第一次劃線(xiàn)前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染__培養(yǎng)物__；②每次劃線(xiàn)前：殺死殘留菌種，保證每次劃線(xiàn)菌種來(lái)自上次劃線(xiàn)__末端__；③劃線(xiàn)結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。概念思辨1．判斷下列說(shuō)法的正誤：(1)由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱(chēng)為純培養(yǎng)。(×)提示：由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱(chēng)為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)。(2)培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌。(×)提示：培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿的操作屬于倒平板，在配制培養(yǎng)基的過(guò)程中要先滅菌后倒平板。(3)轉(zhuǎn)換劃線(xiàn)角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線(xiàn)。(√)(4)平板冷凝后應(yīng)將平板倒置，防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。(√)2．如何判斷在制備和培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基是否被污染？提示：設(shè)置一組未接種微生物的空白培養(yǎng)基，與接種了微生物的平板放在相同的條件下培養(yǎng)，若空白培養(yǎng)基上未長(zhǎng)出菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基未被污染。典題說(shuō)法考向1培養(yǎng)基的配制下列有關(guān)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是(A)A．培養(yǎng)基的配制全程都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行B．溶化時(shí)，將稱(chēng)好的牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同放入燒杯C．平板冷凝后要將其倒置，以防皿蓋上的冷凝水滴入培養(yǎng)基D．可以通過(guò)適宜條件下培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基以確定培養(yǎng)基是否被污染解析：培養(yǎng)基的配制不需要全程都在酒精燈火焰旁進(jìn)行，只有滅菌后的各項(xiàng)操作要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，A錯(cuò)誤；溶化時(shí)，將稱(chēng)好的牛肉膏連同稱(chēng)量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱，B正確；平板冷凝后要將其倒置，使皿蓋在下，皿底在上，以防皿蓋上的冷凝水滴入培養(yǎng)基，造成雜菌污染，C正確；可以通過(guò)適宜條件下培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基以確定培養(yǎng)基是否被污染，如果未接種的培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基被污染了，D正確?？枷?微生物的分離與純化(2020·江蘇卷)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線(xiàn)接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如下圖所示。下列敘述正確的是(B)A．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．菌落周?chē)睦w維素被降解后，可被剛果紅染成紅色解析：倒入培養(yǎng)基后的培養(yǎng)皿加蓋，放置在水平桌面等待培養(yǎng)基冷卻凝固后倒置，完成倒平板，不需要輕微晃動(dòng)，A錯(cuò)誤；圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；觀察圖知，實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)了單菌落，能達(dá)到菌種純化的目的，C錯(cuò)誤；纖維素會(huì)與剛果紅形成紅色復(fù)合物，纖維素被分解后，紅色消失，D錯(cuò)誤。(2023·蘇錫常鎮(zhèn)一模)下列關(guān)于微生物純培養(yǎng)的敘述，正確的是(A)A．待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置培養(yǎng)B．在皿蓋或皿底作標(biāo)記，均不會(huì)影響對(duì)菌落的觀察C．涂布器進(jìn)行涂布的速度越快越好，可有效防止雜菌污染D．未接種的空白培養(yǎng)基上若無(wú)菌落出現(xiàn)，可再次利用解析：涂布后的平板待菌液被培養(yǎng)基吸收后應(yīng)倒置培養(yǎng)，可防止水分蒸發(fā)過(guò)快，A正確；微生物培養(yǎng)過(guò)程中通常在皿底作標(biāo)記，這樣不會(huì)影響對(duì)菌落的觀察，B錯(cuò)誤；用涂布器進(jìn)行涂布時(shí)需要將菌液涂布均勻，否則會(huì)影響觀察，在酒精燈火焰旁進(jìn)行接種操作可有效防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；未接種的空白培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，其上若無(wú)菌落出現(xiàn)，可說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠，但空白培養(yǎng)基不能再次使用，D錯(cuò)誤?？键c(diǎn)3微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)知識(shí)1微生物的選擇培養(yǎng)1．選擇培養(yǎng)的作用原理：人為提供__有利于目的菌生長(zhǎng)__的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)__抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)__。2．稀釋涂布平板法操作過(guò)程取樣，將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的瓶中，搖勻，取__1mL上清液__加入盛有__9mL無(wú)菌水__的試管中，依次__等比稀釋__。取最后一支試管中菌液__0.1mL__滴加到培養(yǎng)基表面進(jìn)行涂布。如下圖所示：注意：(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需__滅菌__；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處。(2)涂布平板時(shí)：①__涂布器__用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上__灼燒__；②不要將__過(guò)熱__的涂布器放入盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精；③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管槍頭不要接觸任何物體；④培養(yǎng)皿蓋不能完全打開(kāi)，應(yīng)只掀開(kāi)一條縫。知識(shí)2微生物的計(jì)數(shù)1．測(cè)定微生物數(shù)量常用的方法(1)稀釋涂布平板法(間接計(jì)數(shù)法、活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②為了使結(jié)果接近真實(shí)值，應(yīng)設(shè)置三個(gè)或三個(gè)以上的平板(平行重復(fù)原則，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力和準(zhǔn)確性)，計(jì)算菌落平均數(shù)。另外，為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，要求選擇同一稀釋度的平板菌落數(shù)在__30～300__的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。③用此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目__少__。這是因?yàn)開(kāi)_當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落__。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。(2)__顯微鏡直接計(jì)數(shù)__法2．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣蒧_脲酶__，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到__催化__作用。CO(NH2)2＋H2Oeq\o(―――→,\s\up7(脲酶))CO2＋2NH3(2)分離方法：利用以__尿素__為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)。(3)鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入__酚紅__指示劑，指示劑變紅說(shuō)明菌落中的菌體為分解尿素的細(xì)菌。(4)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)一般用__稀釋涂布平板__法。(5)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→__樣品的稀釋__→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的__計(jì)數(shù)__。深度指津微生物的鑒別方法(1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的__形狀__、大小、隆起程度和__顏色__等特征進(jìn)行鑒別。(2)指示劑鑒別法：如在上述以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入__酚紅__指示劑。(3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的__透明圈__來(lái)篩選分解纖維素的微生物。注：后兩種方法需要利用__鑒別__培養(yǎng)基，是利用微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，產(chǎn)生特定的顏色或其他變化。再如，__伊紅—亞甲藍(lán)__瓊脂培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌，生長(zhǎng)在此培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤。概念思辨判斷下列說(shuō)法的正誤：(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類(lèi)。(×)(2)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采用稀釋涂布平板法。(×)(3)土壤取樣時(shí)需要對(duì)紙袋和鐵鏟都預(yù)先滅菌。(√)(4)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低。(×)(5)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)目。(×)(6)菌落計(jì)數(shù)可以每隔12h統(tǒng)計(jì)一次，且菌落數(shù)目穩(wěn)定。(×)(7)剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。(×)典題說(shuō)法考向1微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(2023·蘇州期中)如圖為兩種微生物分離純化的方法，下列敘述正確的是(B)eq\o(\s\up7(),\s\do5(甲))乙A．甲圖中3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為103倍B．甲圖所測(cè)定的微生物數(shù)量一般用菌落數(shù)表示C．乙圖所示的操作過(guò)程中接種環(huán)需要灼燒5次D．甲、乙兩種操作均可以用于微生物的計(jì)數(shù)解析：甲圖中3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為104倍，A錯(cuò)誤；甲圖所測(cè)定的微生物數(shù)量的方法為稀釋涂布平板法，該方法一般用菌落數(shù)表示微生物數(shù)量，B正確；采用平板劃線(xiàn)法接種微生物時(shí)，每次劃線(xiàn)前后都要灼燒接種環(huán)，因此乙圖所示的操作過(guò)程中接種環(huán)需要灼燒6次，C錯(cuò)誤；甲圖采用稀釋涂布平板法接種微生物，該方法可對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，乙圖采用平板劃線(xiàn)法接種微生物，該方法不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤?？枷?微生物培養(yǎng)的應(yīng)用(2022·江蘇卷)下列是某同學(xué)分離產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是(D)A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌解析：農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物；為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，只有產(chǎn)脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)；當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌；產(chǎn)脲酶菌分解尿素，不分解酚紅指示劑，酚紅指示劑是用來(lái)鑒定尿素分解產(chǎn)物的。(2019·江蘇卷)下列關(guān)于產(chǎn)纖維素酶菌分離及運(yùn)用的敘述，不合理的是(A)A．篩選培養(yǎng)基中應(yīng)含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)B．可從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌C．在分離平板上長(zhǎng)出的菌落需進(jìn)一步確定其產(chǎn)纖維素酶的能力D．用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈可提高其飼用價(jià)值解析：篩選產(chǎn)纖維素酶菌的培養(yǎng)基應(yīng)以纖維素為唯一碳源；木材、秸稈中富含纖維素，故可以從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌；用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選纖維素分解菌后，為了確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定其產(chǎn)纖維素酶的能力；用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈，可以把纖維素分解成葡萄糖，提高飼用價(jià)值。深度指津選擇培養(yǎng)基——4種常見(jiàn)制備方法或?qū)嵗?多選)根據(jù)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB19645—2010)規(guī)定，每毫升合格的牛奶中細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)50000個(gè)。某興趣小組利用恒溫水浴鍋對(duì)新鮮牛奶進(jìn)行消毒后，進(jìn)行細(xì)菌總數(shù)測(cè)定，主要步驟如下圖所示。相關(guān)敘述正確的是(ABD)A．步驟①中用巴氏消毒法對(duì)新鮮牛奶進(jìn)行消毒，可以減少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失B．步驟②對(duì)牛奶進(jìn)行梯度稀釋可以使聚集的微生物分散，便于在培養(yǎng)基表面形成單菌落C．步驟③中牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基要先高壓蒸汽滅菌再調(diào)pH，以防止高溫影響pH的穩(wěn)定D．實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)培養(yǎng)基上的菌落可能不止一種，若平均菌落總數(shù)少于50個(gè)，則表明消毒合格解析：80℃、15s處理新鮮牛奶屬于巴氏消毒法，采用短時(shí)高溫處理的目的是盡量減少食物中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失，A正確。步驟②將牛奶進(jìn)行梯度稀釋的目的是使聚集在一起的微生物分散，便于在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，B正確。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)先調(diào)pH再滅菌，C錯(cuò)誤。由于生牛奶中的微生物可能不止一種，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基屬于天然培養(yǎng)基，細(xì)菌、真菌等均可生長(zhǎng)，因此，在實(shí)驗(yàn)中，培養(yǎng)基上可能不止出現(xiàn)一種菌落；依據(jù)樣品液稀釋1000倍，接種液體積為1mL，計(jì)算推測(cè)若平均菌落總數(shù)少于50個(gè)，則表明消毒后牛奶中細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)50000個(gè)，消毒合格，D正確。1．(2023·江蘇卷)下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是(A)A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過(guò)濾除菌法除菌D．血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定解析：本題主要考查細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)。通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，酵母菌菌落比細(xì)菌大而厚，B錯(cuò)誤；培養(yǎng)基含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，易為雜菌污染，酵母菌和細(xì)菌培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，而過(guò)濾除菌法是用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去，一般用于不耐高溫的物體的除菌，C錯(cuò)誤；血細(xì)胞計(jì)數(shù)板可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，細(xì)菌計(jì)數(shù)板可用于細(xì)菌等較小的細(xì)胞的計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。2．平板涂布是分離菌種常用的方法，下列相關(guān)敘述不恰當(dāng)?shù)氖?B)A．固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50℃左右時(shí)倒平板B．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長(zhǎng)C．平板涂布分離到的單菌落需進(jìn)一步劃線(xiàn)純化D．平板涂布法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計(jì)數(shù)解析：倒好的平板需要冷卻凝固后使用，且不宜久存，以免表面干燥，影響接種后微生物的生長(zhǎng)。3．(2023·山東卷)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是(D)A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C．接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物解析：不含有氮源的平板可用來(lái)培養(yǎng)能利用空氣中氮?dú)獾奈⑸?，A錯(cuò)誤；平板涂布時(shí)，涂布器使用前必須進(jìn)行滅菌處理，以防止外來(lái)雜菌的污染，B錯(cuò)誤；接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基，也可能有少量微生物，所以不能直接丟棄，C錯(cuò)誤；在以尿素為唯一氮源的平板上，若微生物可以產(chǎn)生脲酶，則可以利用脲酶分解尿素而獲得氮源生長(zhǎng)，其他不能產(chǎn)生脲酶的微生物則不能生長(zhǎng)，可以把合成脲酶的微生物分離出來(lái)，D正確。4．(2023·鹽城一模)人們?cè)谘芯?、利用微生物時(shí)，需用無(wú)菌技術(shù)培養(yǎng)獲取純種微生物，并對(duì)其進(jìn)行計(jì)數(shù)或保存。下列有關(guān)敘述正確的是(A)A．用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，結(jié)果往往比實(shí)際值低B．培養(yǎng)基配制過(guò)程是計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、調(diào)pH、定容、滅菌、倒平板C．高壓蒸汽滅菌后，打開(kāi)排氣閥，待壓力表指針降至“0”后開(kāi)蓋取物D．獲得純種微生物后，利用涂布平板法接種至斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行低溫保存解析：用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞常形成一個(gè)菌落，因此結(jié)果往往比實(shí)際值低，A正確；培養(yǎng)基配制過(guò)程先定容，后調(diào)pH，B錯(cuò)誤；滅菌后，等壓力表指針降至“0”時(shí)，打開(kāi)排氣閥排氣，打開(kāi)鍋蓋，取出滅菌物品，C錯(cuò)誤；獲得純種微生物后，利用劃線(xiàn)分離法接種至斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行低溫保存，D錯(cuò)誤。5．(多選)(2021·江蘇卷)為提高一株石油降解菌的凈化能力，將菌涂布于以石油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，以致死率為90%的輻照劑量誘變處理。下列敘述不合理的是(AB)A．將培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)皿中后滅菌，可降低培養(yǎng)基污染的概率B．涂布用的菌濃度應(yīng)控制在30～300個(gè)·mL－1C．需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)考察輻照時(shí)間對(duì)存活率的影響，以確定最佳誘變時(shí)間D．挑取培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的較大單菌落，純化后進(jìn)行降解效率分析解析：培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝于培養(yǎng)皿中，A不合理；涂布時(shí)所用菌液不超過(guò)0.1mL，平板上的菌落數(shù)應(yīng)介于30～300個(gè)，又題干中90%的致死率，因此涂布用的菌濃度控制在3000～30000個(gè)·mL－1，B不合理；輻照劑量和誘變時(shí)間都是正式實(shí)驗(yàn)的無(wú)關(guān)變量，可通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定，C合理；石油降解菌能分解石油獲得碳源，形成菌落，挑取培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的較大單菌落，純化后進(jìn)行降解效率分析，以獲得能高效降解石油的菌種，D合理。配套精練一、單項(xiàng)選擇題1．(2023·南京江寧區(qū)一模改編)下列與微生物培養(yǎng)有關(guān)的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是(C)A．平板劃線(xiàn)法每次劃線(xiàn)前和最后一次劃線(xiàn)后都需要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌B．巴氏消毒法可以殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，而不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分C．培養(yǎng)基的配制全程都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行D．利用稀釋涂布平板法對(duì)微生物計(jì)數(shù)，結(jié)果較真實(shí)值低解析：培養(yǎng)基的配制不需要全程都在酒精燈火焰旁進(jìn)行，只有滅菌后的各項(xiàng)操作要在酒精燈火焰旁進(jìn)行。2．(2023·常熟中學(xué))下表為某培養(yǎng)基的部分配方，下列有關(guān)敘述正確的是(C)成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4瓊脂F(xiàn)eSO4蒸餾水含量10g10g2g15g0.5g1000mLA．配制培養(yǎng)基、倒平板、接種均需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行B．該培養(yǎng)基的有機(jī)碳源包括蛋白胨、葡萄糖和瓊脂C．除去蛋白胨，該培養(yǎng)基可用于選擇培養(yǎng)固氮微生物D．倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長(zhǎng)解析：培養(yǎng)基配制好后需要進(jìn)行滅菌，故配制培養(yǎng)基過(guò)程不需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，A錯(cuò)誤；瓊脂只是凝固劑，不是碳源，B錯(cuò)誤；除去蛋白胨，該培養(yǎng)基就是無(wú)氮培養(yǎng)基，只有利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈吹墓痰⑸锬軌蛟谏厦嫔L(zhǎng)，C正確；倒好的平板要等冷卻凝固后再使用，D錯(cuò)誤。3．(2024·南京調(diào)研)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上接種尿素分解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是(B)A．圖示采用的接種方法為平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法B．培養(yǎng)基中的尿素被分解后，可使酚紅指示劑變?yōu)榧t色C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．可用干熱滅菌法對(duì)盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿和試管等進(jìn)行滅菌解析：據(jù)圖可知，圖中的微生物接種方法是平板劃線(xiàn)法，A錯(cuò)誤；培養(yǎng)基中的尿素被分解后呈堿性，可使酚紅指示劑變?yōu)榧t色，B正確；該接種方法中隨著劃線(xiàn)次數(shù)增加，菌落數(shù)目減少，該實(shí)驗(yàn)Ⅲ區(qū)有單菌落，可以達(dá)到菌種純化目的，C錯(cuò)誤；可用濕熱滅菌法對(duì)盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿和試管等進(jìn)行滅菌，D錯(cuò)誤。4．(2024·淮安調(diào)研)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是(D)A．平板涂布時(shí)需在酒精燈火焰旁，打開(kāi)皿蓋放在一邊，用滅菌后的涂布器進(jìn)行涂布B．空白平板使用前需進(jìn)行無(wú)菌鑒定，接種后未長(zhǎng)出菌落的平板可以直接丟棄C．采用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往多于原始菌液中微生物數(shù)量D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物解析：平板涂布時(shí)，不能將皿蓋打開(kāi)放在一邊，需用左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條縫隙，用滅菌后的涂布器涂布，A錯(cuò)誤；接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基也可能有少量微生物，為避免污染環(huán)境，不能直接丟棄，B錯(cuò)誤；采用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個(gè)細(xì)胞聚集在一起繁殖形成的，所以統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往少于實(shí)際的活菌數(shù)，C錯(cuò)誤；在以尿素為唯一氮源的平板上，若微生物可以產(chǎn)生脲酶，則可以利用脲酶分解尿素氨而獲得氮源生長(zhǎng)，其他不能產(chǎn)生脲酶的微生物則不能生長(zhǎng)，可以把合成脲酶的微生物分離出來(lái)，D正確。5．(2022·海南卷)為探究校內(nèi)植物園土壤中的細(xì)菌種類(lèi)，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(C)A．采樣時(shí)應(yīng)隨機(jī)采集植物園中多個(gè)不同地點(diǎn)的土壤樣本B．培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，可選用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基C．土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落D．鑒定細(xì)菌種類(lèi)時(shí)，除形態(tài)學(xué)鑒定外，還可借助生物化學(xué)的方法解析：土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，才能將聚集的細(xì)菌分散開(kāi)，在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯(cuò)誤。6．(2023·南京三模)下列有關(guān)微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是(D)A．濕熱滅菌后倒的平板和接種后的平板均需倒置B．將未接種的平板培養(yǎng)并觀察有無(wú)菌落，以判斷培養(yǎng)基滅菌是否合格C．同一稀釋度下至少要涂布三個(gè)平板，待菌落數(shù)穩(wěn)定后計(jì)數(shù)D．纖維素分解菌鑒定時(shí)，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅則能初步鑒定解析：平板倒置既可防止皿蓋上凝結(jié)的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染，又可避免培養(yǎng)基表面的水分過(guò)快揮發(fā)，A正確；將未接種的平板培養(yǎng)并觀察有無(wú)菌落，若未接種的培養(yǎng)基表面有菌落生長(zhǎng)，則培養(yǎng)基滅菌不合格，若未接種的培養(yǎng)基表面無(wú)菌落生長(zhǎng)，則培養(yǎng)基滅菌合格，B正確；同一稀釋度下至少要涂布三個(gè)平板，進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，并且要培養(yǎng)到菌落數(shù)穩(wěn)定時(shí)計(jì)數(shù)，避免因培養(yǎng)時(shí)間不足而引起的菌落計(jì)數(shù)出現(xiàn)誤差，C正確；對(duì)纖維素分解菌鑒定時(shí)，需在培養(yǎng)基中加入剛果紅試劑，D錯(cuò)誤。7．(2024·南京六校聯(lián)合調(diào)研)熔噴布的主要成分是聚丙烯，會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。某科研小組從土壤中分離到一種能分解聚丙烯的細(xì)菌。下列說(shuō)法正確的是(B)A．配制固體培養(yǎng)基時(shí)，需要在無(wú)菌的環(huán)境中進(jìn)行B．稀釋涂布平板法所用的菌濃度應(yīng)控制在300～3000個(gè)·mL－1C．從土壤中分離能分解聚丙烯的細(xì)菌，可采用平板劃線(xiàn)法進(jìn)行分離與計(jì)數(shù)D．純培養(yǎng)時(shí)，在培養(yǎng)皿皿蓋做標(biāo)記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)解析：配制固體培養(yǎng)基時(shí)，不需要在無(wú)菌的環(huán)境中進(jìn)行，因?yàn)榕囵B(yǎng)基配制好之后要進(jìn)行滅菌，A錯(cuò)誤；涂布時(shí)吸取的菌液不超過(guò)0.1mL，平板上的菌落數(shù)應(yīng)介于30～300個(gè)，因此，涂布用的菌濃度應(yīng)控制在300～3000個(gè)·mL－1，B正確；平板劃線(xiàn)法只能對(duì)微生物進(jìn)行分離，不能計(jì)數(shù)，從土壤中分離能分解聚丙烯的細(xì)菌，可采用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離與計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；純培養(yǎng)時(shí)，在培養(yǎng)皿皿底做標(biāo)記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，這樣方便觀察，D錯(cuò)誤。8．(2023·南通期中)根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB19645—2010)每毫升合格的巴氏殺菌乳中細(xì)菌總數(shù)不得超過(guò)50000個(gè)。某興趣小組進(jìn)行了新鮮牛奶最合適的消毒溫度的探究，相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作不合理的是(C)A．為了使計(jì)數(shù)更標(biāo)準(zhǔn)，通常要同一稀釋度下的牛奶接種3個(gè)平板，重復(fù)計(jì)數(shù)B．將等量的新鮮牛奶分別置于60℃、70℃、80℃、90℃恒溫水浴鍋中處理相同且適宜的時(shí)間C．對(duì)處理后的牛奶利用平板劃線(xiàn)法進(jìn)行接種后，在37℃下培養(yǎng)24h，然后計(jì)數(shù)D．統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基上全部菌落數(shù)，不一定以菌落數(shù)最少組的處理溫度作為最適消毒溫度解析：為了使計(jì)數(shù)更標(biāo)準(zhǔn)，通常要同一稀釋度下的牛奶接種3個(gè)平板，重復(fù)計(jì)數(shù)，然后取平均值，這樣可以減小誤差，A正確；實(shí)驗(yàn)探究的是新鮮牛奶的最適消毒溫度，因此采用巴氏消毒法的相關(guān)溫度，將等量的新鮮牛奶分別置于60℃、70℃、80℃、90℃恒溫水浴鍋中處理相同且適宜的時(shí)間，B正確；對(duì)處理后的牛奶進(jìn)行梯度稀釋后，利用涂布法接種平板并在37℃下培養(yǎng)24h，然后計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；由于溫度過(guò)高會(huì)影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，進(jìn)而破壞牛奶中的營(yíng)養(yǎng)成分，所以菌落數(shù)最少的組對(duì)應(yīng)的溫度不一定是最適的消毒溫度，最適的消毒溫度應(yīng)保證每毫升合格巴氏殺菌乳中細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)50000個(gè)，同時(shí)還得保證牛奶的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值不被破壞，D正確。9．(2024·南京零模)細(xì)菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素進(jìn)行治療。當(dāng)細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性時(shí)，療效下降。金黃色葡萄球菌(SAU)是細(xì)菌性肺炎的病原體之一。A、B、C、D四種抗生素均可治療SAU引起的肺炎。為選出最佳療效的抗生素，研究者分別將含等劑量抗生素A、B、C、D四張大小相同的濾紙片a、b、c、d置于SAU均勻分布的平板培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)48h，結(jié)果如圖。下列相關(guān)敘述不正確的是(C)A．對(duì)實(shí)驗(yàn)使用的培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌，可以采用干熱滅菌的方法B．用一定稀釋倍數(shù)的菌液涂布在不含抗生素的培養(yǎng)基上可獲得SAU均勻分布的平板C．該實(shí)驗(yàn)表明，臨床上療效最佳的是抗生素DD．濾紙片b周?chē)志χ谐霈F(xiàn)一菌落，可能是形成該菌落的SAU發(fā)生了基因突變解析：對(duì)培養(yǎng)皿等玻璃器皿進(jìn)行滅菌可采用干熱滅菌的方法，A正確；抗生素會(huì)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，用一定稀釋倍數(shù)的菌液涂布在不含抗生素的培養(yǎng)基上可獲得SAU均勻分布的平板，B正確；抑菌圈越大，說(shuō)明抗生素的抑菌效果越好，因此A、B、C、D四種抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素A，C錯(cuò)誤；濾紙片b周?chē)志χ谐霈F(xiàn)一菌落，可能是該菌落的SAU發(fā)生了基因突變，產(chǎn)生抗性，D正確。10．(2024·南通海門(mén)區(qū)一調(diào))研究者將含有一定濃度A菌的少量培養(yǎng)基傾倒在固體培養(yǎng)基上，凝固后形成薄層，培養(yǎng)A菌至該薄層變渾濁(如圖)，然后接種某湖泊水樣，嘗試從湖水中分離出有溶菌特性的細(xì)菌。下列敘述錯(cuò)誤的是(A)A．含A菌的少量培養(yǎng)基中含有瓊脂和蛋白胨，為細(xì)菌提供碳源和氮源B．若湖泊水樣的含菌量較高，需稀釋后再依次涂布于不同的渾濁薄層上C．待接種的水樣被充分吸收后，將平板倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D．接種水樣后，在能溶解A菌的菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)溶菌圈解析：瓊脂是凝固劑，不為細(xì)菌提供碳源，蛋白胨主要來(lái)源于動(dòng)物原料，蛋白胨主要為細(xì)菌提供碳源、氮源，A錯(cuò)誤；為分離出具有溶菌作用的細(xì)菌，需要合適的菌落密度，因此應(yīng)將含菌量較高的湖泊水樣稀釋后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上，B正確；平板冷凝后皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，若將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，故待接種的水樣被充分吸收后，將平板倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，C正確；接種水樣培養(yǎng)一段時(shí)間后，能溶解A菌的菌落周?chē)粫?huì)出現(xiàn)菌體(菌體被破壞)，則其周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈(溶菌圈)，D正確。二、多項(xiàng)選擇題11．(2023·蘇錫常鎮(zhèn)二模)為篩選出可高效抑制番茄枯萎病菌(一類(lèi)真菌)的土壤芽孢桿菌菌株，科研人員從土壤中采集、分離、篩選芽孢桿菌菌株作為待測(cè)菌株，并采用平板對(duì)峙培養(yǎng)法觀察各待測(cè)菌株的抑菌能力。如圖為研究過(guò)程示意圖，下列敘述正確的是(BD)A．過(guò)程①常利用涂布器蘸取0.1mL菌液涂布平板B．過(guò)程②可根據(jù)芽孢桿菌菌落的形態(tài)、顏色進(jìn)行挑選C．若甲、乙、丙三個(gè)平板的平均菌落數(shù)為12個(gè)，則10g土樣中芽孢桿菌約有1.2×109個(gè)D．實(shí)驗(yàn)篩選出的菌株仍需進(jìn)行大田種植試驗(yàn)，以檢測(cè)防治效果解析：過(guò)程①常利用移液器移取0.1mL菌液涂布平板，用涂布器在培養(yǎng)基上對(duì)菌液進(jìn)行涂布，A錯(cuò)誤；每種細(xì)菌都有特定的菌落的形態(tài)、大小和顏色，所以過(guò)程②可根據(jù)芽孢桿菌菌落的形態(tài)、顏色進(jìn)行挑選，B正確；甲、乙、丙三個(gè)培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，多種微生物都能夠在上面生長(zhǎng)繁殖，不屬于選擇培養(yǎng)基，即12個(gè)菌落不一定都是芽孢桿菌形成的，C錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)篩選出的菌株需要進(jìn)一步確定其效果，通過(guò)大田種植試驗(yàn)，檢測(cè)防治效果，D正確。12．(2023·江蘇模擬)亞磷酸鹽是一種特殊的磷源，如圖是研究人員篩選、檢測(cè)并保存高效利用亞磷酸鹽細(xì)菌的過(guò)程。相關(guān)敘述正確的是(CD)A．圖中所用的培養(yǎng)基都應(yīng)以亞磷酸鹽為唯一磷源，并加入瓊脂B．步驟①的目的是便于精確計(jì)算土壤中能利用亞磷酸鹽的微生物數(shù)量C．步驟②采用涂布平板法接種，根據(jù)菌落的形態(tài)、大小、顏色等對(duì)菌種做初步鑒定D．步驟③檢測(cè)細(xì)菌利用亞磷酸鹽的能力，步驟④將優(yōu)良菌種保存于斜面培養(yǎng)基上解析：圖中所用的培養(yǎng)基都應(yīng)以亞磷酸鹽為唯一磷源，即選擇培養(yǎng)基，但③過(guò)程用的是液體培養(yǎng)基，沒(méi)有加入瓊脂，A錯(cuò)誤；利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)量，得到的是估計(jì)值，B錯(cuò)誤；菌落的形態(tài)、大小、顏色等可反映微生物的特征，可做初步鑒定，C正確；步驟③復(fù)篩過(guò)程目的是檢測(cè)細(xì)菌利用亞磷酸鹽的能力，步驟④將優(yōu)良菌種保存于斜面培養(yǎng)基上，以便后期利用，D正確。三、非選擇題13．(2024·如皋期初)測(cè)定水樣是否符合飲用水的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測(cè)定大腸桿菌的總數(shù)。大腸桿菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸造成