食品中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)

第一節(jié)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)食品中腸道致病桿菌的檢驗(yàn)1醫(yī)學(xué)ppt

沙門(mén)氏菌（Salmonella）是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬,1880年Eberth首先發(fā)現(xiàn)傷寒沙門(mén)氏菌，1885年Salmon與Smith又分離出豬霍亂沙門(mén)氏菌，以后取名Salmon氏之名為本菌屬屬名。已發(fā)現(xiàn)近2000個(gè)血清型，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)近200個(gè)血清型。對(duì)人類(lèi)有致病性腸熱癥——傷寒沙門(mén)菌，甲型副傷寒沙門(mén)菌、肖氏沙門(mén)菌、希氏沙門(mén)菌食物中毒——鼠傷寒沙門(mén)菌、豬霍亂沙門(mén)菌、腸炎沙門(mén)菌敗血癥——豬霍亂沙門(mén)菌最常見(jiàn)2醫(yī)學(xué)ppt生物學(xué)性狀形態(tài)染色符合腸桿菌特點(diǎn)，革蘭氏染色陰性短桿菌，無(wú)莢膜，無(wú)芽胞，多數(shù)有鞭毛(周生毛菌)，有動(dòng)力（也有無(wú)動(dòng)力的變種）。鼠傷寒沙門(mén)菌（samonellatyphimurium）

3醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌革蘭氏染色照片4醫(yī)學(xué)ppt5醫(yī)學(xué)ppt6醫(yī)學(xué)ppt培養(yǎng)特性EMB、SS上呈無(wú)色透明乳糖不發(fā)酵菌落沙門(mén)氏菌SS平板培養(yǎng)物（黑色菌落）7醫(yī)學(xué)ppt鼠傷寒沙門(mén)鼠傷寒沙門(mén)在SS培養(yǎng)基上形成半透明較小菌落8醫(yī)學(xué)ppt在酸性條件下菌落中心產(chǎn)生H2S(SS培養(yǎng)基）9醫(yī)學(xué)ppt生化反應(yīng)乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多數(shù)H2S+，動(dòng)力+，尿素（-）抗原結(jié)構(gòu)O抗原——特異性低、穩(wěn)定、分群（組）H抗原——特異性高，不穩(wěn)定，分型Vi抗原（毒力抗原）——不穩(wěn)定，可阻止“O”凝集抵抗力不強(qiáng)10醫(yī)學(xué)ppt致病性與免疫性致病物質(zhì)侵襲力菌毛——吸附Ⅲ型分泌系統(tǒng)——穿入細(xì)胞，擴(kuò)散Vi抗原——微莢膜（抗吞噬）內(nèi)毒素外毒素——個(gè)別（鼠傷寒沙門(mén)菌）產(chǎn)生，與ETEC腸毒素相似11醫(yī)學(xué)ppt12醫(yī)學(xué)ppt腸熱癥臨床過(guò)程潛伏期2W發(fā)病初期：第1W（第一次菌血癥）、高熱、肝脾腫大、皮疹、WBS↓等全身中毒癥狀，此期血液（80%）、骨髓（90%（+）有大量細(xì)菌發(fā)病極期：第2-4W，全身癥狀持續(xù)加重，此期血、骨髓中仍有菌，但糞便（60%）、尿（20%）、皮疹液中可查到細(xì)菌，由于Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)——并發(fā)癥發(fā)生，血液抗體達(dá)到陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)——肥達(dá)反應(yīng)恢復(fù)期：第四周末，體溫下降，癥狀消失，恢復(fù)期帶菌1年（糞便仍陽(yáng)性），血液抗體仍高13醫(yī)學(xué)ppt胃腸炎（食物中毒）

潛伏期短，6-24h，起病急，病程短2-4天，發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉敗血癥經(jīng)口感染，經(jīng)腸道入血，敗血癥癥狀明顯而腸道癥狀不明顯帶菌者健康帶菌者，恢復(fù)期帶菌者免疫性腸熱癥，病后免疫牢固，其它可重復(fù)感染14醫(yī)學(xué)ppt微生物學(xué)檢查與防治分離培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本采取:腸熱癥：第1-2W，血、骨髓；第2-3W，糞便、食物中毒：糞便、嘔吐物、可疑食物敗血癥：血帶菌者：糞便分離鑒定：

增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應(yīng)→血清鑒定15醫(yī)學(xué)ppt血清學(xué)診斷——肥達(dá)反應(yīng)（Widal）原理用已知傷寒沙門(mén)氏菌O抗原及H抗原，以及引起副傷寒的沙門(mén)氏菌H抗原與待檢血清作凝集試驗(yàn)，測(cè)定待檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)。（TO、TH、PA、PB）方法：試管凝集法（定量）TO≥1：80，TH≥1：160，PA、PB均≥1：80才有意義動(dòng)態(tài)觀察：雙份血清抗體四倍升高有診斷意義16醫(yī)學(xué)ppt臨床意義O抗體（IgM），H抗體（IgG）O、H抗體均升高，患傷寒的可能性大O、H抗體不升高，患傷寒的可能性小只有H升高，則可能是預(yù)防接種過(guò)或非特異性回憶反應(yīng)，只有O升高而H不高，則可能是感染早期或其他沙門(mén)菌的交叉反應(yīng)。17醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌主要寄生在人體、哺乳動(dòng)物和家禽的腸道內(nèi)，可隨同糞便的排泄污染水源，食品與藥品。沙門(mén)氏菌的種類(lèi)繁多，有些對(duì)人有致病力，如傷寒沙門(mén)菌和副傷寒沙門(mén)氏菌；有些對(duì)動(dòng)物有致病力，如鴨沙門(mén)氏菌和雛沙門(mén)氏菌；尚有一些對(duì)人和動(dòng)物皆有致病力，如腸炎沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌和豬霍亂沙門(mén)氏菌等。它們能引起人類(lèi)傷寒癥、急性胃腸炎和敗血癥等。帶有這些細(xì)菌的人與動(dòng)物?？芍苯踊蜷g接地污染藥品的生產(chǎn)環(huán)境、工具設(shè)備和原料輔料，以及半成品和成品等。特別是用動(dòng)物臟器制成的藥品,污染機(jī)率較高，影響患者用藥安全，并有可能通過(guò)藥品的流通而傳播。故將沙門(mén)氏菌，應(yīng)列為某些藥品的必檢項(xiàng)目。18醫(yī)學(xué)ppt（一）增菌培養(yǎng)：

?。薄茫保肮┰嚻废♂屢海保昂辽?，接種于備妥的１００毫升膽鹽乳糖增菌液內(nèi)。置３７°培養(yǎng)１８—２４小時(shí)，進(jìn)行增菌。19醫(yī)學(xué)ppt（二）分離培養(yǎng)：取上述增菌培養(yǎng)物，劃線接種于ＳＳ瓊脂和ＥＭＢ瓊脂平板各一個(gè)（劃線時(shí)，適當(dāng)增加ＳＳ瓊脂平板的涂抹量２-３環(huán)，可提高陽(yáng)檢率），置３７℃培養(yǎng)１８-２４小時(shí)。凡沙門(mén)氏菌，在ＳＳ和ＥＭＢ瓊脂平板上，菌落一般無(wú)色透明或半透明，圓形，周邊整齊，表面光滑濕潤(rùn)，在ＳＳ瓊脂平板上中心有時(shí)呈黑褐色。如有上述疑似菌落，應(yīng)選取２-３個(gè)分別進(jìn)行純培養(yǎng)，按下列方法鑒別。20醫(yī)學(xué)ppt傷寒沙門(mén)菌在SS瓊脂平板上的菌落特征21醫(yī)學(xué)ppt傷寒沙門(mén)菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上的菌落特征22醫(yī)學(xué)ppt傷寒沙門(mén)菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上呈紫色菌落23醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌SS平板培養(yǎng)物（黑色菌落）24醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌在BS平板上的典型菌落（產(chǎn)H2S菌株25醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌在BS平板上的菌落（Salmonellatyphimurium）26醫(yī)學(xué)ppt（三）初步鑒別：將上述純培養(yǎng)物分別穿刺并劃線接種三糖鐵（ＴＳＩ）瓊脂，置３７℃培養(yǎng)１８—２４小時(shí)。凡在ＴＳＩ瓊脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜面呈堿性，不變色），下層底部分解葡萄糖呈酸性變黃色（有氣泡或無(wú)氣泡），有動(dòng)力或無(wú)動(dòng)力，以及產(chǎn)生或不產(chǎn)生黑褐色的硫化氫反應(yīng)，并經(jīng)涂

片染色鏡檢為革蘭氏陰性桿菌，都應(yīng)繼續(xù)做生化試驗(yàn)和血清學(xué)檢查。27醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌三糖鐵28醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌革蘭氏染色照片29醫(yī)學(xué)ppt（四）生化試驗(yàn)：

取上述疑似菌落的純培養(yǎng)物、分別接種至葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖等發(fā)酵管培養(yǎng)基，并接種蛋白胨水和尿素培養(yǎng)基，經(jīng)３７℃培養(yǎng)２-５天，觀察結(jié)果。沙門(mén)氏菌一般生化反應(yīng)和動(dòng)力檢查，絕大數(shù)應(yīng)為、葡萄糖＋，乳糖－，麥芽糖＋，甘露醇＋，蔗糖－，靛基質(zhì)－，硫化氫＋，尿素酶－，動(dòng)力＋。當(dāng)一般生化試驗(yàn)符合時(shí)，應(yīng)做賴氨酸脫羧酶及氰化鉀試驗(yàn)。沙門(mén)氏菌賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)＋，氰化鉀－。30醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌氨基酸脫羧酶31醫(yī)學(xué)ppt沙門(mén)氏菌蛋白胨水32醫(yī)學(xué)ppt尿素瓊脂實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)異常,原因可能是沙門(mén)氏菌變種33醫(yī)學(xué)ppt(五）動(dòng)力試驗(yàn)：

取上述純培養(yǎng)物穿刺接種半固體培養(yǎng)基，于３７℃培養(yǎng)２４小時(shí)后，觀察動(dòng)力表現(xiàn)。無(wú)動(dòng)力表現(xiàn)的培養(yǎng)物，應(yīng)在室溫（２５°左右）保留２-３天后，再觀察。3