DB21T 3257-2020 豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法　

DB21MethodofELISAforPRRSVantibodyNEQ遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 1 2 2 3 3 3 4本標(biāo)準(zhǔn)協(xié)助單位：洛陽現(xiàn)代生物技術(shù)研究院有限公司、遼寧佰瑞生物科技有限公標(biāo)準(zhǔn)起草單位通訊地址：遼寧省動(dòng)物及產(chǎn)品檢疫中心（沈陽市沈河區(qū)萬柳塘路105號(hào)甲），1豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于在生物安全Ⅱ級(jí)（BSL-2）以上的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行豬繁殖與呼吸綜合征病毒病的診斷、監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查，適用于豬血清或血漿樣品中的豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢ELISA：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentaPRRSV：豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PorcineReproductiveandRespiratPBS：磷酸鹽緩沖液（phosphatebuffersolutOD：光密度，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度（opticaldens本方法原理是包被板上包被的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）抗原，可與待測(cè)樣品中的特異性抗體反應(yīng)，形成抗原-抗體復(fù)合物，再加入酶標(biāo)記的二抗，則形成免疫復(fù)合物，洗滌后，如待測(cè)樣品中含有PRRSV抗體，顯色深，為陽性，5.1微量可調(diào)移液器：50μL～2005.7洗板機(jī)2注：本技術(shù)規(guī)范中使用的試劑，除另有說明外，所有實(shí)驗(yàn)使用的試劑等級(jí)均為6.2陽性對(duì)照：豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性豬血6.4酶標(biāo)復(fù)合物：過氧化物酶標(biāo)記的抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒單克隆抗5mL采血針管和4mL、2mL和1.5mL離心管經(jīng)121±1℃高壓滅菌20min。前處理后的樣品密封裝于滅菌離心管內(nèi)，4℃或-20℃保7.2.2取出包被板，加入100μL沒液體。在最后一次洗滌液棄去后，將孔中殘留的洗滌液在吸水紙3）， 陰性對(duì)照平均值（NCX） 陽性對(duì)照平均值（PCX）試驗(yàn)成立判斷標(biāo)準(zhǔn)≥0.5；NCX≤0.3。9檢測(cè)過程中防止交叉污染的措施按照GB/T19495.2-20按照《農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)〈病死及病害動(dòng)物無害化處理技術(shù)規(guī)范〉的通知》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕254 磷酸二氫鉀十二水磷酸氫二鈉2.83gA.2洗滌液A.3樣品稀釋液A.4磷酸鹽-檸檬酸緩沖液（pH5.0）