DB32-T 4450-2023 固態(tài)化學品經(jīng)口鼻動式吸入染毒操作規(guī)程

CCSC00江蘇省地方標準DB32/T4450—2023固態(tài)化學品經(jīng)口鼻動式吸入染毒操作規(guī)程o-2023-02-06發(fā)布2023-03-06實施江蘇省市場監(jiān)督管理局DB32/T4450—2023前言 Ⅲ1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14實驗前準備 24.1受試物來源 24.2受試物分類處理 24.3實驗動物準備 24.4實驗儀器準備 24.5劑量設(shè)計 25實驗操作內(nèi)容 35.1實驗動物染毒環(huán)境 35.2染毒系統(tǒng)過程控制 35.2.1染毒穩(wěn)定狀態(tài)確定 35.2.2染毒濃度控制和采樣要求 35.2.3染毒濃度計算 35.2.4染毒氣溶膠的粒徑檢測 45.2.5染毒過程中動物監(jiān)護和記錄 45.3實驗結(jié)束后操作 45.3.1染毒結(jié)束清洗消毒 45.3.2廢棄物處置 4參考文獻 5IDB32/T4450—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由江蘇省疾病預防控制中心提出。本文件由江蘇省實驗動物標準化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位:江蘇省疾病預防控制中心、北京慧榮和科技有限公司、江蘇恒生檢測有限公司、南京大學環(huán)境學院。ⅢDB32/T4450—2023固態(tài)化學品經(jīng)口鼻動式吸入染毒操作規(guī)程1范圍本文件確定了固態(tài)化學品經(jīng)口鼻動式吸入染毒的程序,規(guī)定了經(jīng)口鼻動式吸入染毒的實驗前準備和實驗操作內(nèi)容。本文件適用于化學品毒性鑒定機構(gòu)和其他科研機構(gòu)的固態(tài)化學品經(jīng)口鼻動式吸入染毒試驗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T15670.12—2017農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第12部分:短期重復吸入染毒(28天)毒性試驗GB/T21605—2008化學品急性吸入毒性試驗方法GB/T21754—2008化學品28天/14天重復劑量吸入毒性試驗方法GB/T21765—2008化學品亞慢性吸入毒性試驗方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。經(jīng)口鼻動式吸入染毒dynamicexposurefororal-nasalinhalation采用經(jīng)口鼻動式吸入設(shè)備,將實驗動物保定在動物固定器內(nèi),使其口鼻部充分暴露在染毒腔,在一定時間內(nèi)持續(xù)吸入通過專用發(fā)生裝置發(fā)生的質(zhì)量濃度穩(wěn)定的受試樣品的染毒方式。3.2半數(shù)致死濃度(LC50)medianlethalconcentration在一定時間內(nèi)經(jīng)呼吸道吸入受試樣品后引起受試動物發(fā)生死亡概率為50%的濃度,以單位體積空氣中受試樣品的質(zhì)量(mg/m3)來表示。[來源:GB/T21605—2008,2.2]3.3質(zhì)量中值空氣動力學直徑massmedianaerodynamicdiameter;MMAD由空氣動力學直徑大小不一的顆粒組成的氣溶膠樣品中,小于和等于某一空氣動力學直徑(例如5μm)的顆粒占氣溶膠樣品總質(zhì)量或總重量50%時,則該氣溶膠顆?？諝鈩恿W直徑即為此氣溶膠樣品的質(zhì)量中值空氣動力學直徑(5μm)。[來源:GB/T15670.12—2017,3.8]1DB32/T4450—20234實驗前準備4.1受試物來源受試物為固態(tài)化學品。受試物應(yīng)注明樣品名稱、來源、批號、含量(或規(guī)格)、保存條件、開封日期、配制方法、配制日期及有效期等。如使用賦型劑,所用賦形劑應(yīng)標明批號、規(guī)格和生產(chǎn)廠家。4.2受試物分類處理實驗前應(yīng)使用合適尺寸的超分篩等設(shè)備把受試物篩出較細顆粒物。根據(jù)受試物特性,其發(fā)生處理方式可分為以下幾類?！鲃有詮?吸濕性較弱,易于發(fā)生的受試物,可使用相應(yīng)粉塵發(fā)生器直接發(fā)生;—流動性強,吸濕性較強,開封后不能長時間放置的受試物,發(fā)生過程中應(yīng)保持密封?？墒褂貌捎眯D(zhuǎn)電刷式原理的發(fā)生器或者其他在發(fā)生過程中能夠保持受試物密封的發(fā)生器發(fā)生;—流動性弱的受試物,需與賦形劑混勻后發(fā)生處理。用于配比的賦形劑如無明確數(shù)據(jù)表明其毒性作用,實驗中應(yīng)增加空白對照組確認賦形劑對受試動物的影響。注:受試物的處理和發(fā)生,應(yīng)考慮操作人員的安全。對于毒性較高的受試物,建議稀釋后進行染毒實驗。若受試物具有潛在的易燃性或易爆性,應(yīng)采取相應(yīng)的防燃防爆措施。4.3實驗動物準備根據(jù)實驗需要,選擇合適的實驗動物,嚙齒類動物首選健康成年大鼠,非嚙齒類動物首選健康成年犬,必要時可以選擇非人靈長類,也可以選擇其他敏感動物,但應(yīng)說明原因。應(yīng)使用具有質(zhì)量合格證的實驗動物,同性別的各劑量組個體間體重相差不超過平均體重的±20%。試驗開始前,應(yīng)進行固定器預適應(yīng),根據(jù)動物種屬選擇相應(yīng)固定器,預適應(yīng)時間由短逐漸延長至正式實驗時間長度,一般為3天至5天,非人靈長類宜增加適應(yīng)性訓練的時間和頻率。在染毒時,動物固定器不宜對實驗動物施加不適當?shù)奈锢?、熱或壓迫?過強的外力限制會影響動物的生理指標。4.4實驗儀器準備應(yīng)使用經(jīng)口鼻動式吸入儀器進行實驗。經(jīng)口鼻動式吸入儀器包括但不限于粉塵發(fā)生器、吸入暴露塔、質(zhì)量濃度檢測儀、流量稀釋器、濾膜采樣器、流量級聯(lián)撞擊器、粒徑譜儀、環(huán)境參數(shù)監(jiān)測調(diào)節(jié)設(shè)備、送排風及廢氣處理設(shè)備等。正式實驗開始前,應(yīng)進行預實驗以確定合適的實驗參數(shù)設(shè)置,包括進氣流量、抽氣流量、稀釋流量、采樣流量及時間、壓差、氣溶膠發(fā)生器的樣品進給速度,受試物的使用量等。4.5劑量設(shè)計根據(jù)實驗目的按照相應(yīng)標準進行劑量設(shè)計,急性吸入毒性試驗劑量設(shè)計按照GB/T21605—2008中的5.2條款內(nèi)容,28天/14天重復劑量吸入毒性試驗劑量設(shè)計按照GB/T21754—2008中的4.1.2條款內(nèi)容,亞慢性吸入毒性試驗劑量設(shè)計按照GB/T21765—2008中的4.4條款內(nèi)容,慢性吸入毒性試驗劑量設(shè)計參照《化學品毒性鑒定技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)監(jiān)督發(fā)〔2005〕272號)的相關(guān)規(guī)定。當儀器需要重復使用時,不同劑量染毒試驗應(yīng)由低濃度到高濃度進行。2DB32/T4450—20235實驗操作內(nèi)容5.1實驗動物染毒環(huán)境染毒時,應(yīng)保持染毒腔內(nèi)溫度在22℃±3℃,相對濕度在30%~70%范圍,氧含量不低于19%,二氧化碳含量不高于1%,染毒腔和設(shè)備外部通風櫥之間應(yīng)保持微負壓,以保證染毒腔內(nèi)的受試物氣溶膠不會擴散到外部通風櫥。至少每小時記錄一次環(huán)境參數(shù)和樣品使用量,并確保每個暴露口足夠的受試物氣溶膠通氣量。5.2染毒系統(tǒng)過程控制5.2.1染毒穩(wěn)定狀態(tài)確定應(yīng)用經(jīng)口鼻動式吸入儀器進行染毒實驗前,應(yīng)對染毒腔受試物濃度進行調(diào)試。如果連續(xù)兩次測定的結(jié)果能夠證明染毒腔內(nèi)受試物的濃度相對恒定,即固體受試物在目標濃度的±20%范圍內(nèi)波動,則認為染毒系統(tǒng)濃度是穩(wěn)定的,并記錄到達穩(wěn)定所需時間,否則需要繼續(xù)調(diào)試。待染毒系統(tǒng)濃度確認穩(wěn)定后,將動物裝入固定器中并盡快固定于染毒腔,記錄實驗動物染毒開始與結(jié)束時間、染毒時進氣流量、抽氣流量、稀釋流量、采樣流量及時長、壓差、氣溶膠發(fā)生器的樣品進給速度、受試物的使用量等。5.2.2染毒濃度控制和采樣要求染毒實驗中,應(yīng)對受試物經(jīng)發(fā)生器產(chǎn)生的受試物濃度進行動態(tài)監(jiān)測。受試物濃度應(yīng)通過間斷(至少30min采樣一次)或連續(xù)采樣進行測定。設(shè)置采樣流量時,應(yīng)減少對染毒腔穩(wěn)態(tài)氣流造成不必要的干擾,在必要情況下,如濃度較低可考慮增加采樣流量或延長采樣時間。應(yīng)采用可靠的檢測方法進行濃度監(jiān)控,如濾膜稱重法或光學檢測儀檢測。若使用光學檢測儀器檢測濃度,應(yīng)提前校準光學檢測儀的顯示系數(shù),并且定期檢測受污染程度確保在可接受范圍,在檢測多成分受試物時,應(yīng)有相應(yīng)證明氣溶膠狀態(tài)下物質(zhì)和開始物質(zhì)有相似的分析數(shù)據(jù),如無法證明上述信息,則應(yīng)在整個實驗過程中有規(guī)律的進行間隔采樣分析。固態(tài)化學品吸入染毒過程中,變異系數(shù)(CV值=標準差與平均濃度的比值%)不超過20%。5.2.3染毒濃度計算染毒濃度應(yīng)直接測定動物呼吸帶的實際濃度,多次測定后取平均值,根據(jù)染毒濃度判定受試物的LC50。采用濾膜稱重法測定濃度時,至少每30min測定一次,取平均值,以公式(1)計算:×1000…………(1)式中:C—染毒濃度,單位為毫克每立方米(mg/m3);M2—稱重后濾膜質(zhì)量,單位為毫克(mg);M1—稱重前濾膜質(zhì)量,單位為毫克(mg);Q—采樣流量,單位為升每分鐘(L/min);T—采樣時間,單位為分鐘(min)。當受試樣品采用賦形劑稀釋時,以公式(2)計算:×1000…………3DB32/T4450—2023式中:R—受試樣品在賦形劑中的含量(%,質(zhì)量比)。注:公式(1)和公式(2)中,1000為單位換算系數(shù)。5.2.4染毒氣溶膠的粒徑檢測對于固態(tài)化學品制備的氣溶膠,應(yīng)對氣溶膠粒徑進行連續(xù)測定和監(jiān)控,至少每30min采樣一次,氣溶膠的MMAD值應(yīng)在1μm~4μm范圍內(nèi),且連續(xù)兩次測定的MMAD值的波動范圍在10%之內(nèi),幾何標準差在1.5~3.0之間。5.2.5染毒過程中動物監(jiān)護和記錄染毒過程中,應(yīng)觀察受試物和固定器對受試動物的影響,并記錄實驗中的動物狀態(tài)。如動物出現(xiàn)體位反轉(zhuǎn)等異常情況,應(yīng)及時調(diào)整,受試動物的體位變化可能導致吸入染毒濃度不足,或?qū)е轮舷⑺劳?。觀察并記錄動物外觀、肢體活動、行為方式以及呼吸狀態(tài)等變化發(fā)生的時間、程度和持續(xù)時間,尤其需要記錄口鼻部是否有異常分泌物以及眼球部是否有出血充血現(xiàn)象。5.3實驗結(jié)束后操作5.3.1染毒結(jié)束清洗消毒染毒結(jié)束后,按照染毒開始時的安裝順序,逐次取下固定器并取出動物,拆卸暴露腔和管路,將暴露塔底部沉積樣品收集后,對暴露腔和管路用洗滌劑浸泡,用清水沖洗干凈,避免殘留樣品對后續(xù)實驗影響。對于難以除去的殘留受試物可用高壓水槍或超聲波清洗,必要時使用中性洗滌劑清洗。清洗晾干后