阿嗎堿和毛鉤藤堿的高分辨二級(jí)質(zhì)譜裂解行為和裂解規(guī)律

阿嗎堿和毛鉤藤堿的高分辨二級(jí)質(zhì)譜裂解行為和裂解規(guī)律目錄1引言 32實(shí)驗(yàn)部分 52.1儀器及測(cè)試條件 52.2實(shí)驗(yàn)材料 52.3待測(cè)溶液 53結(jié)果與討論 53.1阿嗎堿的二級(jí)質(zhì)譜裂解行為推測(cè) 73.1.1阿嗎堿C環(huán)和D環(huán)的裂解行為 73.1.2阿嗎堿脫去E環(huán)后的C環(huán)和D環(huán)裂解行為 83.1.3阿嗎堿的C環(huán)和D環(huán)的裂解行為 93.1.4阿嗎堿脫去一個(gè)甲醇分子后，C環(huán)和E環(huán)的裂解行為 93.2毛鉤藤堿的二級(jí)質(zhì)譜裂解行為推測(cè) 103.2.1毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)的裂解行為 103.2.2毛鉤藤堿脫去D環(huán)的兩個(gè)支鏈，C環(huán)和D環(huán)裂解行為 113.2.3毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)裂解行為 123.2.4毛鉤藤堿C環(huán)和支鏈的裂解行為 123.3阿嗎堿和毛鉤藤堿的質(zhì)譜裂解規(guī)律總結(jié) 134.總結(jié) 16參考文獻(xiàn) 17致謝 17附:化合物譜圖 18摘要:目的：對(duì)阿嗎堿和毛鉤藤堿在高分辨二級(jí)質(zhì)譜下的裂解行為和裂解規(guī)律進(jìn)行研究分析，為質(zhì)譜鑒定提供參考和阿嗎堿和毛鉤藤堿的鑒定及結(jié)構(gòu)分析提供參考。方法：采用高分辨電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，在正離子模式下，研究了阿嗎堿和毛鉤藤堿的高分辨二級(jí)質(zhì)譜裂解行為，同時(shí)用精確質(zhì)量數(shù)對(duì)碎片離子進(jìn)行確證，對(duì)阿嗎堿和毛鉤藤堿的質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行分析。結(jié)果：對(duì)阿嗎堿和毛鉤藤堿的二級(jí)質(zhì)譜裂解行為進(jìn)行了推測(cè)并總結(jié)了阿嗎堿和毛鉤藤堿的裂解規(guī)律。關(guān)鍵詞:阿嗎堿；毛鉤藤堿；高分辨二級(jí)質(zhì)譜；裂解行為；裂解規(guī)律1引言阿嗎堿和毛鉤藤堿是兩種重要的生物堿類化合物，具有廣泛的藥理活性和潛在的藥用價(jià)值。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)部分生物堿的藥理活性進(jìn)行了廣泛的研究，包括其抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性，以及對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等的影響機(jī)制等方面的研究。單萜吲哚類生物堿:阿嗎堿為蘿芙木Rauvolfiaverticillate中的藥效成分,研究表明其具有抗炎和降血壓的療效，長(zhǎng)春花草藥中發(fā)現(xiàn)，是一種降壓試劑，用于研究高血壓，降低外周阻力和血壓。用于研究其作為腎上腺素和煙堿受體拮抗劑的作用REF_Ref164419014\r\h[1]。毛鉤藤堿屬柯楠亞屬的吲哚類生物堿，其有的C(3)-Hβ，C(15)Hα，C（20）-Hβ的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)REF_Ref164427454\r\h[12]。毛鉤藤堿是中藥鉤藤中的一個(gè)重要的有效成分之一REF_Ref164427459\r\h[13]；同時(shí)具有抗高血壓、抗炎、神經(jīng)保護(hù)等藥理作用REF_Ref164419310\r\h[2]。Ozaki,Yukijiro等人推測(cè)毛鉤藤堿的降壓作用的機(jī)理是通過α受體阻斷來擴(kuò)張血管達(dá)到降壓目的REF_Ref164427818\r\h[14]。針對(duì)部分生物堿的分析鑒定技術(shù)，國(guó)內(nèi)外研究者開展了質(zhì)譜、色譜、光譜等方面的技術(shù)研究，提出了一系列的分析方法和檢測(cè)技術(shù)。葉馨源“通過過高分辨質(zhì)譜提供的精確準(zhǔn)分子離子峰和二級(jí)質(zhì)譜信息，并結(jié)合各種質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析平臺(tái)（比如分子網(wǎng)絡(luò)）分析出白背三七所含化學(xué)成分的可能結(jié)構(gòu)，并歸納整理了白背三七所含生物堿（6種PAs、2種吡嗪類生物堿、3種吡啶羧酸類生物堿）成分的質(zhì)譜裂解規(guī)律”REF_Ref164419435\r\h[3]。WangMengli“建立了同時(shí)分離測(cè)定UR及其制劑中水蘇堿和硬毛帽柱木因堿的環(huán)糊精修飾膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(CD-MEKC)法。通過考察顯著因素對(duì)分離的影響，建立了最佳分離方法，并成功應(yīng)用于UR及其制劑中水蘇堿和硬毛帽柱木因堿的測(cè)定”REF_Ref164331922\r\h[4]。楊甲璽“利用中壓反相色譜、SephadexLH-20葡聚糖凝膠柱色譜、半制備高效液相色譜等方法對(duì)水半夏水煎液進(jìn)行分離純化,并根據(jù)理化性質(zhì)及核磁共振波譜、質(zhì)譜等數(shù)據(jù)分析鑒定化合物結(jié)構(gòu)”REF_Ref164331926\r\h[5]。夏永剛“運(yùn)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)方法研究知母、麥冬和薯蕷中螺甾烷醇型甾體皂苷的[M+NH4]+離子質(zhì)譜裂解行為”REF_Ref164331934\r\h[6]。趙祥升“利用電噴霧-四極桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOFMS/MS)技術(shù),在負(fù)離子模式下,探討巴戟天中4種環(huán)烯醚萜苷和2種蒽醌成分的質(zhì)譜裂解途徑。通過[M-H]-獲得化合物的相對(duì)分子質(zhì)量信息,進(jìn)一步對(duì)[M-H]-進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離,獲得相應(yīng)化合物的裂解途徑”REF_Ref164331939\r\h[7]。尹智慧“運(yùn)用量子化學(xué)方法輔助解析并比較槲皮素與桑色素在電噴霧離子阱質(zhì)譜(ESI-MS)負(fù)離子模式下的裂解行為，推導(dǎo)了質(zhì)譜碎裂過程”REF_Ref164331272\r\h[8]。陳玉娟用HPLC-ESI-MS技術(shù)和HyperChem7.5軟件分析烏頭堿的質(zhì)譜裂解規(guī)律：在正離子模式下,以電噴霧離子源,采用選擇性離子掃描分析烏頭類生物堿的一級(jí)和多級(jí)質(zhì)譜;用半經(jīng)驗(yàn)計(jì)算法計(jì)算各化合物的幾何結(jié)構(gòu)參數(shù)REF_Ref164422571\r\h[9]?？偟膩碚f，國(guó)內(nèi)外對(duì)阿嗎堿和毛鉤藤堿的研究涉及了多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域，包括藥理學(xué)、生物化學(xué)、藥物化學(xué)、藥物分析等，為進(jìn)一步揭示其藥理活性、生物合成途徑、分析鑒定技術(shù)、藥物化學(xué)特性以及藥物開發(fā)與臨床應(yīng)用提供了豐富的研究成果和理論基礎(chǔ)。然而，對(duì)于這兩種化合物的質(zhì)譜特性和裂解規(guī)律的研究還相對(duì)有限。深入了解阿嗎堿和毛鉤藤堿的質(zhì)譜性質(zhì)，對(duì)于準(zhǔn)確鑒定和定量研究這兩種化合物在復(fù)雜樣品中的存在具有重要意義。通過高分辨二級(jí)質(zhì)譜裂解分析，深入研究阿嗎堿和毛鉤藤堿在質(zhì)譜中的裂解行為和裂解規(guī)律。通過對(duì)其質(zhì)譜碎片的分析，揭示其分子結(jié)構(gòu)、鍵合模式以及可能的代謝途徑。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器及測(cè)試條件采用布魯克Esquire型HCT分光光度計(jì)，配ESI源，記錄多級(jí)質(zhì)譜。質(zhì)譜儀由EsquireControl軟件控制，以氮?dú)?99.9%)鞘氣和氦氣(99.99%)碰撞氣為正模式運(yùn)行。通過儀表控制軟件對(duì)電壓運(yùn)行參數(shù)進(jìn)行自動(dòng)優(yōu)化操作;碰撞誘導(dǎo)解離(CID)，40V;掃描范圍:50–400Da。HR-ESI-MS/MS檢測(cè)采用QExactiveFocus質(zhì)譜儀(ThermoScientific)正離子模式，數(shù)據(jù)處理采用TraceFinder軟件4.1版(ThermoScientific)。全質(zhì)量ddMS2模式，MS全掃描70000FWHM,MS/MS全掃描15000FWHM。其他運(yùn)行參數(shù)如下:噴淋電壓4.4kV;護(hù)套氣體壓力，30.0arb;輔助氣體壓力，5.0arb;毛細(xì)管溫度，250;加熱器溫度，300;高能碰撞離解(HCD)，35V;掃描范圍:100-350Da。2.2實(shí)驗(yàn)材料HPLC級(jí)MeOH(≥99.8%)購于Avantor精細(xì)化工公司(中國(guó))，氨購自阿拉丁試劑公司(中國(guó))，0.45μm目尼龍過濾器購自金騰公司(中國(guó))。氮?dú)?99.9%)和氦氣(99.99%)來自Jin-Hou特種氣體有限公司(?？?中國(guó))。2.3待測(cè)溶液所有未進(jìn)一步純化的樣品，先用甲醇溶解，再用0.1%的氨水堿化(滴)，然后過濾到0.45μm孔尼龍過濾器上;校準(zhǔn)注射泵，以4μL/min的連續(xù)流速將樣品送入ESI源。3結(jié)果與討論本此實(shí)驗(yàn)研究的阿嗎堿和毛鉤藤堿具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，其基本結(jié)構(gòu)中含有三個(gè)O和兩個(gè)N原子。在電噴霧正離子模式下，阿嗎堿和毛鉤藤堿的N原子，易得到電子，在質(zhì)譜圖中具有較高的響應(yīng)，均能產(chǎn)生很強(qiáng)的質(zhì)子化離子[M+H]+。利用高分辨質(zhì)譜儀對(duì)它們的[M+H]+離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析。發(fā)現(xiàn)阿嗎堿和毛鉤藤堿都表現(xiàn)出了一些非常相似的裂解途徑，在相同的碰撞能量下，有相似的碎片離子峰REF_Ref164427897\r\h[10]。在進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜掃描時(shí)，根據(jù)阿嗎堿和毛鉤藤堿的分子量大小選擇合適的掃描范圍REF_Ref164427915\r\h[11]。本文研究重點(diǎn)分析阿嗎堿和毛鉤藤堿［M+H］+準(zhǔn)分子離子的質(zhì)譜裂解行為，并結(jié)合各自的裂解規(guī)律。研究結(jié)果表明這些裂解生成的碎片離子主要集中在m/z100~350區(qū)間。表1阿嗎堿和毛鉤藤堿的串聯(lián)質(zhì)譜碎片離子化合物準(zhǔn)分子離子二級(jí)碎片離子偏差(ppm)化學(xué)組成RDB實(shí)驗(yàn)值(Da)理論值(Da)阿嗎堿[M+H]+/10eV353.1851353.18460.49C19H23O2N511351.1688351.169-0.16C19H21O2N512321.1588321.15840.4C18H19ON512266.0996266.0996-0.03C9H12O3N77.5265.0965265.1012-4.65C21H1315.5252.1012252.1019-0.67C16H14O2N10.5224.1064224.107-0.56C15H14ON9.5210.112210.1125-0.47C11H16O3N4.5208.1117208.1121-0.4C15H14N9.5206.096206.0964-0.45C15H12N10.5197.1073197.10730C13H13N28.5182.0963182.0964-0.18C13H12N8.5178.0861178.0863-0.19C10H12O2N5.5170.096170.0964-0.41C12H12N7.5158.096158.0964-0.42C11H12N6.5156.0804156.0808-0.4C11H10N7.5144.0803144.0808-0.44C10H10N6.5143.0728143.073-0.15C10H9N7130.0649130.0651-0.25C9H8N6.5130.0649130.0651-0.25C9H8N6.5124.0392124.0393-0.1C6H6O2N4.5117.0697117.0699-0.14C9H95.5115.0541115.0542-0.09C9H76.5108.0808108.08080C7H10N3.5103.0543103.05420.02C8H75.5毛鉤藤堿[M+H]+/10eV369.2164369.21590.5C20H27O2N510305.164305.1648-0.81C20H21ON211.5298.1429298.1438-0.83C18H20O3N9.5266.1167266.1176-0.89C17H16O2N10.5266.1167266.11620.46C15H14ON411238.1432238.1438-0.52C13H20O3N4.5226.1432226.1438-0.52C12H20O3N3.5224.1429224.1434-0.48C16H18N8.5208.0753208.0757-0.39C14H10ON10.5208.0753208.0757-0.39C14H10ON10.5206.0961206.0964-0.3C15H12N10.5197.1071197.1073-0.26C13H13N28.5182.0963182.0964-0.1C13H12N8.5170.096170.0964-0.44C12H12N7.5156.0804156.0808-0.34C11H10N7.5144.0804144.0808-0.38C10H10N6.5130.065130.0651-0.17C9H8N6.5117.0698117.0699-0.11C9H95.5115.0389115.039-0.04C5H7O32.5110.0964110.09640.01C7H12N2.5108.0808108.08080.03C7H10N3.5RDB：環(huán)與雙鍵數(shù)目3.1阿嗎堿的二級(jí)質(zhì)譜裂解行為推測(cè)阿嗎堿是一種生物堿類藥物，屬于芳香族胺類化合物。它的化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含一個(gè)苯環(huán)和一個(gè)環(huán)戊二烯酮環(huán)。其芳香環(huán)上有一個(gè)羥基和一個(gè)甲氧基基團(tuán)。阿嗎堿的分子式為C21H24N2O3，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+為353.1851（與理論值353.1846相比較masserror為0.49）。3.1.1阿嗎堿C環(huán)和D環(huán)的裂解行為阿嗎堿C環(huán)和D環(huán)的裂解行為：質(zhì)譜在正離子模式下，阿嗎堿與氫離子質(zhì)子化得到[M+H]+準(zhǔn)分子離子m/z353.1851。阿嗎堿的烯環(huán)裂解行為：在氫離子的誘導(dǎo)下，C2-C3斷裂，同時(shí)N4的未成鍵電子與C3形成C=N雙鍵。在此基礎(chǔ)上，C5和C6位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙鍵，即可得到碎片離子m/z144。在正電荷的誘導(dǎo)下，C6和C7位斷裂丟失一個(gè)乙烯基CH2=CH-生成117的子離子。另外，m/z353.1851的氮正離子誘導(dǎo)C5-C6鍵斷裂而生成穩(wěn)定的烯丙基型碳正離子m/z130。阿嗎堿的D環(huán)裂解行為：[M+H]+準(zhǔn)分子離子m/z353.1851失去H2（2Da）,C3位的一個(gè)氫和N5位的一個(gè)氫同時(shí)丟失，導(dǎo)致C3-N4單鍵變?yōu)镃3=N4雙鍵，并且N4位帶一個(gè)單位的正電荷,再發(fā)生reverseDiels-Alder(RDA)裂解反應(yīng)，C3=N4雙鍵變?yōu)镃3-N4單鍵，C3-C14單鍵和N4-C21單鍵變?yōu)镃3=C14雙鍵和N4=C21雙鍵并斷裂，產(chǎn)生m/z197的子離子。圖SEQ圖\*ARABIC1阿嗎堿C環(huán)和D環(huán)的裂解行為3.1.2阿嗎堿脫去E環(huán)后的C環(huán)和D環(huán)裂解行為阿嗎堿脫去E環(huán)后，m/z224的C環(huán)和D環(huán)裂解行為：阿嗎堿的C15和C19位直接發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙健，C15-N16單鍵和C19-N20單鍵斷裂生成m/z224，m/z224的裂解途徑分別解釋為三種。其一：m/z224→182，首先m/z224與氫離子質(zhì)子化，在氫離子的誘導(dǎo)下，C5-C6斷裂，同時(shí)N4的未成鍵電子與C5形成C=N雙鍵之后，C3-N4單鍵斷裂，C3-C14單鍵變?yōu)镃3=C14雙鍵,氮正離子誘導(dǎo)C20-C21鍵斷裂而生成碎片離子m/z182。其二：m/z224→156(158)，首先m/z224與氫離子質(zhì)子化，發(fā)生reverseDiels-Alder(RDA)裂解反應(yīng),C2=C7雙鍵變?yōu)镃2-C7單鍵，C6-C7單鍵變?yōu)镃6=C7雙鍵，C2-N3單鍵變?yōu)镃2=N3雙鍵，C3-N4單鍵和C5-C6單鍵斷裂，N4-C5單鍵變?yōu)镹4=C5雙鍵。在氫離子的誘導(dǎo)下，C14-C15單鍵斷裂，生成碎片離子m/z156，又或發(fā)生1,2-消除（E1,2），C14-C15單鍵斷裂，再與氫離子質(zhì)子化得到[M+H]+準(zhǔn)分子離子m/z158。其三：m/z224→208→206，首先m/z224與氫離子質(zhì)子化，C5和C6位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙鍵，C3和C14位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙健，C3-N4單鍵和N4-C5單鍵斷裂，再于C21處發(fā)生alpha反應(yīng)，脫去氨基后生成m/z208的子離子，m/z208的子離子再發(fā)生異構(gòu)并失去H2（2Da）生成m/z206。圖SEQ圖\*ARABIC2阿嗎堿脫去E環(huán)后的C環(huán)和D環(huán)裂解行為3.1.3阿嗎堿的C環(huán)和D環(huán)的裂解行為阿嗎堿的C環(huán)和D環(huán)的裂解行為：首先[M+H]+準(zhǔn)分子離子在N+正離子的誘導(dǎo)下，C4-N4單鍵、N4-C5單鍵和C14-C15單鍵協(xié)同斷裂，C3-C14單鍵變?yōu)镃3=C14雙鍵，從而生成m/z170（I）的子離子；該離子還可能有另外一種存在形式，即H6在C5+正離子的誘導(dǎo)下電離，得到更穩(wěn)定的共軛形式（II）。圖SEQ圖\*ARABIC3阿嗎堿的C環(huán)和D環(huán)的裂解行為3.1.4阿嗎堿脫去一個(gè)甲醇分子后，C環(huán)和E環(huán)的裂解行為阿嗎堿脫去一個(gè)甲醇分子后，C環(huán)和E環(huán)的裂解行為：阿嗎堿失去了CH3OH(32Da)生成m/z321的子離子,在此基礎(chǔ)上，C3和N4位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=N雙健，N4-C5單鍵和C2-C3單鍵斷裂，生成碎片離子m/z178，由于p-Π共軛效應(yīng)，p電子朝著雙鍵方向轉(zhuǎn)移，N的空間位阻比C的空間位阻大，所以電子會(huì)向下轉(zhuǎn)移，生成兩種子離子為m/z108和124。圖SEQ圖\*ARABIC4阿嗎堿脫去一個(gè)甲醇分子后，C環(huán)和E環(huán)的裂解行為3.2毛鉤藤堿的二級(jí)質(zhì)譜裂解行為推測(cè)毛鉤藤堿(化學(xué)式為C22H28N2O3)的化學(xué)結(jié)構(gòu)包含有苯丙素、脂環(huán)和含氮等結(jié)構(gòu)，毛鉤藤堿在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+為369.2164（與理論值369.2159相比較masserror為0.5）。3.2.1毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)的裂解行為毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)的開環(huán)裂解行為：質(zhì)譜在正離子模式下，毛鉤藤堿與氫離子質(zhì)子化得到[M+H]+準(zhǔn)分子離子m/z369.2164。毛鉤藤堿C環(huán)的開環(huán)裂解行為：在氫離子的誘導(dǎo)下，C2-C3斷裂，同時(shí)N4的未成鍵電子與C3形成C=N雙鍵。在此基礎(chǔ)上，C5和C6位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙健，即可得到碎片離子m/z144。在正電荷的誘導(dǎo)下，C6和C7位斷裂丟失一個(gè)乙烯基CH2=CH-生成m/z117的子離子。另外，m/z369.2164的氮正離子誘導(dǎo)C5-C6鍵斷裂而生成穩(wěn)定的烯丙基型碳正離子m/z130。毛鉤藤堿D環(huán)的開環(huán)裂解行為：[M+H]+準(zhǔn)分子離子m/z369.2164失去H2（2Da）,C3位的一個(gè)氫和N5位的一個(gè)氫一起丟失，導(dǎo)致C3-N4單鍵變?yōu)镃3=N4雙鍵，并且N4帶一個(gè)單位的正電荷,再發(fā)生reverseDiels-Alder(RDA)裂解反應(yīng)，C3=N4雙鍵變?yōu)镃3-N4單鍵，C3-C14單鍵和N4-C21單鍵變?yōu)镃3=C14雙鍵和N4=C23雙鍵并斷裂，產(chǎn)生m/z197的子離子。圖SEQ圖\*ARABIC5毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)的裂解行為3.2.2毛鉤藤堿脫去D環(huán)的兩個(gè)支鏈后，C環(huán)和D環(huán)裂解行為毛鉤藤堿脫去E環(huán)的兩個(gè)支鏈后，m/z224的C環(huán)和D環(huán)裂解行為：毛鉤藤堿的C15和C20位直接發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙鍵，C15-N16單鍵和C20-N21單鍵斷裂生成m/z224，m/z224的裂解途徑分別解釋為三種。其一：m/z224→182，首先m/z224與氫離子質(zhì)子化，在氫離子的誘導(dǎo)下，C5-C6斷裂，同時(shí)N4的未成鍵的電子與C5形成C=N雙鍵之后，C3-N4單鍵斷裂，C3-C14單鍵變?yōu)镃3=C14雙鍵,氮正離子誘導(dǎo)C20-C21鍵斷裂而生成碎片離子m/z182。其二：m/z224→156(158)，首先m/z224與氫離子質(zhì)子化，發(fā)生reverseDiels-Alder(RDA)裂解反應(yīng),C2=C7雙鍵變?yōu)镃2-C7單鍵，C6-C7單鍵變?yōu)镃6=C7雙鍵，C2-N3單鍵變?yōu)镃2=N3雙鍵，C3-N4單鍵和C5-C6單鍵斷裂，N4-C5單鍵變?yōu)镹4=C5雙鍵。在氫離子的誘導(dǎo)下，C16-C17單鍵斷裂，生成碎片離子m/z156，又或發(fā)生1,2-消除（E1,2）再與氫離子質(zhì)子化得到[M+H]+準(zhǔn)分子離子m/z158。其三：m/z224→208→206，首先m/z224與氫離子質(zhì)子化，C5和C6位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙鍵，C3和C14位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=C雙健，C3-N4單鍵和N4-C5單鍵斷裂，再于C23處發(fā)生alpha反應(yīng)，脫去氨基后生成m/z208的子離子，m/z208的子離子再發(fā)生異構(gòu)并失去H2（2Da）生成子離子m/z206。圖SEQ圖\*ARABIC6毛鉤藤堿脫去E環(huán)的兩個(gè)支鏈后，C環(huán)和D環(huán)裂解行為3.2.3毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)裂解行為毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)裂解行為：[M+H]+準(zhǔn)分子離子m/z369.2164在N+正離子的誘導(dǎo)下，C3-N4單鍵、N4-C5單鍵和C14-C15單鍵協(xié)同斷裂，C3-C14單鍵變?yōu)镃3=C14雙鍵，從而生成m/z170（I）的子離子；該離子還可能有另外一種存在形式，即H6在C5+正離子的誘導(dǎo)下電離，得到更穩(wěn)定的共軛形式（II）。圖SEQ圖\*ARABIC7毛鉤藤堿C環(huán)和D環(huán)裂解行為3.2.4毛鉤藤堿C環(huán)和支鏈的裂解行為毛鉤藤堿C環(huán)和支鏈的裂解行為：其一：毛鉤藤堿→m/z226→110，毛鉤藤堿在氫離子的誘導(dǎo)下，C3和N4位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=N雙鍵，C2-C3單鍵和N4-C5單鍵斷裂，即可得到碎片離子m/z226，m/z226在氫離子的誘導(dǎo)下，C5-C6單鍵斷裂，即可得到碎片離子m/z110。其二：毛鉤藤堿→m/z226：在氫離子的誘導(dǎo)下，毛鉤藤堿發(fā)生異構(gòu)，C2-C3單鍵斷裂，C3-N4單鍵變?yōu)镃3=N4雙鍵，在m/z3369.4693的氮正離子誘導(dǎo)下，C5-C6單鍵斷裂，N4-C5單鍵變?yōu)镹4=C5雙鍵，得到碎片離子m/z238。圖SEQ圖\*ARABIC8毛鉤藤堿C環(huán)和支鏈的裂解行為3.3阿嗎堿和毛鉤藤堿的質(zhì)譜裂解規(guī)律總結(jié)阿嗎堿的分子式為C21H24N2O3，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+為353.1851（與理論值353.1846相比較masserror為0.49）。在二級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)中出現(xiàn)了m/z144.0803、117.0697、130.0649、197.7073、224.1064、182.0963、156.0804、158.096、208.1117、206.096、170.096、321.1588、178.0864、108.0808和124.0392的碎片，其裂解行為如上圖所示。毛鉤藤堿的分子式為C22H28N2O3正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+為369.2164（與理論值369.2159相比較masserror為0.5）。在二級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)中出現(xiàn)了m/z144.0803、117.0697、130.0649、197.7073、224.1064、182.0963、156.0804、158.096、208.1117、206.096、170.096、226.1432、110.0964和238.1432的碎片，其裂解行為如上圖所示。根據(jù)阿嗎堿和毛鉤藤堿裂解的碎片離子和上文所述的裂解行為，可以總結(jié)阿嗎堿和毛鉤藤堿的質(zhì)譜裂解規(guī)律。阿嗎堿和毛鉤藤堿的[M+H]+離子的二級(jí)質(zhì)譜圖如附圖所示。結(jié)果表明：一、阿嗎堿和毛鉤藤堿的母離子極易在氫離子的誘導(dǎo)下，發(fā)生C環(huán)的開環(huán)反應(yīng)，并在正離子的誘導(dǎo)下發(fā)生1,2-消除（E1,2），生成m/z144的子離子，再斷裂丟失一個(gè)乙烯基CH2=CH-生成m/z117的子離子；又或發(fā)生beta反應(yīng)生成m/z130的子離子。二、阿嗎堿和毛鉤藤堿的母離子在氫離子的誘導(dǎo)下，脫去一分子H2，使碳氮單鍵變?yōu)樘嫉p鍵，再發(fā)生reverseDiels-Alder(RDA)裂解反應(yīng)，使D環(huán)裂解，生成m/z197的子離子圖SEQ圖\*ARABIC9阿嗎堿和毛鉤藤堿相同的質(zhì)譜裂解規(guī)律（一、二）三、阿嗎堿和毛鉤藤堿的母離子在氫離子的誘導(dǎo)下，發(fā)生1,2-消除（E1,2），生成共同的碎片離子m/z224，m/z224再與氫離子質(zhì)子化，其一：發(fā)生1,2-消除（E1,2）和alpha反應(yīng)，脫去氨基后生成m/z208的子離子，m/z208的子離子再發(fā)生異構(gòu)并失去H2（2Da）生成m/z206。其二：在N+正離子的誘導(dǎo)下發(fā)生C環(huán)和D環(huán)的裂解，生成碎片離子m/z182。其三：碎片離子m/z224發(fā)生1,2-消除（E1,2），C環(huán)和D環(huán)發(fā)生裂解，在N+正離子的誘導(dǎo)下發(fā)生alpha反應(yīng)，脫去氨基后生成m/z208的子離子，m/z208的子離子再發(fā)生異構(gòu)并失去H2（2Da）生成子離子m/z206。圖SEQ圖\*ARABIC10阿嗎堿和毛鉤藤堿相同的質(zhì)譜裂解規(guī)律（三）四、阿嗎堿和毛鉤藤堿的準(zhǔn)分子離子，在N+正離子的誘導(dǎo)下發(fā)生C環(huán)和D環(huán)的裂解，生成碎片離子m/z170（I）的子離子；該離子還可能有另外一種存在形式，即H6在C5+正離子的誘導(dǎo)下電離，得到更穩(wěn)定的共軛形式（II）。圖SEQ圖\*ARABIC11阿嗎堿和毛鉤藤堿相同的質(zhì)譜裂解規(guī)律（四）以上都是阿嗎堿和毛鉤藤堿相似的質(zhì)譜裂解規(guī)律。阿嗎堿和毛鉤藤堿都有其獨(dú)特的裂解行為：阿嗎堿脫去一個(gè)甲醇分子后，C環(huán)和E環(huán)的裂解行為生成子離子m/z108和124。毛鉤藤堿C環(huán)和支鏈的裂解行為，其一：毛鉤藤堿→m/z226→110，毛鉤藤堿在氫離子的誘導(dǎo)下，C3和N4位發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成C=N雙鍵，C2-C3單鍵和N4-C5單鍵斷裂，即可得到碎片離子m/z226，m/z226在氫離子的誘導(dǎo)下，C5-C6單鍵斷裂，即可得到碎片離子m/z110。其二：毛鉤藤堿→m/z226：在氫離子的誘導(dǎo)下，毛鉤藤堿發(fā)生異構(gòu)，C2-C3單鍵斷裂，C3-N4單鍵變?yōu)镃3=N4雙鍵，在m/z3369.4693的氮正離子誘導(dǎo)下，C5-C6單鍵斷裂，N4-C5單鍵變?yōu)镹4=C5雙鍵，得到碎片離子m/z238。綜上所述：阿嗎堿和毛鉤藤堿有相同的裂解行為，也有不同的裂解行為。筆者認(rèn)為可以通過質(zhì)譜裂解得到的碎片離子的不同來鑒定某組織是否含有阿嗎堿和毛鉤藤堿，也可以通過阿嗎堿和毛鉤藤堿的特征碎片離子來區(qū)分阿嗎堿和毛鉤藤堿。相同的碎片離子為m/z144.0803、117.0697、130.0649、197.7073、224.1064、182.0963、156.0804、158.096、208.1117、206.096和170.096。阿嗎堿的特征碎片離子為：m/z321.1588、178.0864、108.0808和124.0392。毛鉤藤堿的特征碎片離子為：m/z226.1432、110.0964和238.1432。4.總結(jié)本研究采用高分辨電噴霧二級(jí)質(zhì)譜技術(shù)(HR-ESI-MS/MS)研究了阿嗎堿和毛鉤藤堿的二級(jí)質(zhì)譜裂解行為和裂解規(guī)律。阿嗎堿和毛鉤藤堿的共同裂解規(guī)律表現(xiàn)在：在在氫離子的誘導(dǎo)下，發(fā)生烯環(huán)的開環(huán)反應(yīng)；又或脫去一分子H2，使碳氮單鍵變?yōu)樘嫉p鍵，再發(fā)生reverseDiels-Alder(RDA)裂解反應(yīng)，發(fā)生D環(huán)的裂解。最獨(dú)特的裂解規(guī)律在于：阿嗎堿和毛鉤藤堿都會(huì)發(fā)生1,2-消除（E1,2），使與D環(huán)相連的支鏈斷裂，生成相同的碎片離子m/z224，碎片離子m/z224再發(fā)生不同情況下的C環(huán)和D環(huán)的裂解。還有一點(diǎn)相似的情況：阿嗎堿和毛鉤藤堿的準(zhǔn)分子離子，在N+正離子的誘導(dǎo)下會(huì)直接發(fā)生C環(huán)和D環(huán)的裂解，生成碎片離子m/z170（I）的子離子；該離子還可能有另外一種存在形式，即H6在C5+正離子的誘導(dǎo)下電離，得到更穩(wěn)定的共軛形式（II）。阿嗎堿的特有裂解規(guī)律為：脫去一個(gè)甲醇分子后，C環(huán)和E環(huán)的裂解行為生成子離子m/z108和124。毛鉤藤堿的特有裂解規(guī)律為只在C環(huán)發(fā)生的裂解行為：其一：發(fā)生1,2-消除（E1,2）生成碎片離子m/z226，m/z226在氫離子的誘導(dǎo)下，生成碎片離子m/z110。其二：在氫離子的誘導(dǎo)下，毛鉤藤堿發(fā)生異構(gòu)，使C環(huán)發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，在氮正離子誘導(dǎo)下，得到碎片離子m/z238。本文總結(jié)出了阿嗎堿和毛鉤藤堿的二級(jí)質(zhì)譜裂解行為和裂解規(guī)律可為采用質(zhì)譜技術(shù)快速鑒定相似類型的化合物提供可靠的數(shù)據(jù)參考,為建立阿嗎堿和毛鉤藤堿的質(zhì)譜分子網(wǎng)絡(luò)提供必要的數(shù)據(jù)依據(jù)和研究思路。參考文獻(xiàn)鄭妍.異育亨賓生物堿的合成生物學(xué)研究[D].河南大學(xué),2021.DOI:10.27114/ki.ghnau.2021.002285.張建鋼,陳紀(jì)軍,耿長(zhǎng)安.《中國(guó)藥典》收載的鉤藤基原植物吲哚生物堿研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志,2019,44(04):685-695.DOI:10.19540/ki.cjcmm.20181121.006.葉馨源,吳建明,楊杰等.白背三七化學(xué)成分及代表性成分質(zhì)譜裂解特征的研究進(jìn)展[J].中草藥,2021,52(21):6687-6700.MengliW,JingG,ZhiyingW,eta