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第一章臨床檢驗分離儀器第一節(jié)移液器目錄第一章臨床檢驗分離儀器第二節(jié)離心機第三節(jié)電泳儀第一章臨床檢驗分離儀器1.掌握臨床常用移液器、離心機、電泳儀的工作原理及常規(guī)使用方法。2.熟悉臨床常用移液器、離心機、電泳儀的基本結(jié)構(gòu)、基本類型。3.了解臨床常用移液器、離心機、電泳儀的維護與常見故障處理、臨床應(yīng)用。學習目標第一章臨床檢驗分離儀器第一節(jié)移液器第一節(jié)移液器移液器(locomotivepipette)又名加樣槍、移液槍、或微量加樣器(槍)、微量移液槍(槍),是連續(xù)可調(diào)、計量和轉(zhuǎn)移液體的專用器材。目前移液器的吸液范圍從小于1ul至10ml之間。第一節(jié)移液器一、移液器的類型(一)根據(jù)移液器通道數(shù)目分類(二)根據(jù)移液器自動化程度分類(三)根據(jù)移液器移液量是否可調(diào)分類(四)根據(jù)移液器加樣的物理學原理分類第一節(jié)移液器一、移液器的類型(一)根據(jù)移液器通道數(shù)目分類單通道移液器多通道移液器第一節(jié)移液器一、移液器的類型(二)根據(jù)移液器自動化程度分類手動移液器電動移液器第一節(jié)移液器一、移液器的類型(三)根據(jù)移液器移液量是否可調(diào)分類定量移液器可調(diào)式移液器第一節(jié)移液器一、移液器的類型(四)根據(jù)移液器加樣的物理學原理分類正向置換移液器空氣置換移液器空氣置換移液器正向置換移液器第一節(jié)移液器二、移液器的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)主要有顯示窗、容量調(diào)節(jié)部件、活塞、O-形環(huán)、吸引管和吸頭(吸液嘴)等幾個部分。第一節(jié)移液器二、移液器的基本結(jié)構(gòu)移液器的基本結(jié)構(gòu)主要有顯示窗、容量調(diào)節(jié)部件、活塞、O-形環(huán)、吸引管和吸頭(吸液嘴)等幾個部分。第一節(jié)移液器三、移液器的工作原理胡克定律:在一定限度內(nèi),彈簧伸展的長度與彈力成正比。移液器內(nèi)活塞通過彈簧的伸縮運動來實現(xiàn)吸液和放液。也就是移液器的吸液體積與移液器內(nèi)彈簧伸展的長度成正比。英國科學家胡克第一節(jié)移液器三、移液器的工作原理(一)空氣墊加樣基于空氣墊加樣原理而設(shè)計的移液器稱為空氣墊移液器(也稱空氣置換移液器),其中空氣墊的作用是將吸至塑料吸頭內(nèi)的液體樣品與移液器內(nèi)的活塞分隔開,空氣墊通過移液器內(nèi)活塞的彈簧伸縮運動而移動,進而帶動吸頭中的液體吸入或放出。(二)活塞正移動加樣基于活塞正移動加樣原理而設(shè)計的移液器稱為活塞正移動移液器(也稱正向置換移液器)。它可以在空氣墊移液器難以應(yīng)用的情況下使用。如移取具有高蒸氣壓、高黏稠度,以及密度大于2.0kg/L的液體。第一節(jié)移液器四、移液器的使用方法及其注意事項以可調(diào)式單通道移液器為例介紹移液器的使用方法及其注意事項。第一節(jié)移液器四、移液器的使用方法及其注意事項(一)使用方法1.選擇合適的移液器移取的液體體積必須在所選擇的移液器的量程范圍內(nèi)并接近其最大量程,以保證量取液體的準確性。如移取15ul的液體,最好選擇最大量程為20ul的移液器,選擇50ul及其以上量程的移液器都不夠準確。第一節(jié)移液器四、移液器的使用(一)使用方法2.設(shè)定移液體積調(diào)節(jié)移液器的移液體積控制旋鈕,進行移液量的設(shè)定。螺桿上刻痕對著本體上的刻線就是所需的容積。逆時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕為增加移液量,順時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕為減少移液量。調(diào)節(jié)移液量時,應(yīng)視體積大小而定調(diào)節(jié)方法。從大體積調(diào)為小體積時順時針轉(zhuǎn)動旋鈕即可,從小體積調(diào)為大體積時,可先逆時針旋轉(zhuǎn)使刻度至超過設(shè)定體積的刻度少許(最大刻度除外),再回調(diào)至設(shè)定體積,以保證移取的最佳精確度。第一節(jié)移液器四、移液器的使用方法及其注意事項(一)使用方法3.裝配吸頭應(yīng)選擇與移液器量程相匹配的吸頭,不同類型的移液器裝配吸頭時可不同。使用單通道移液器時,右手握住移液器,指鉤朝外,將移液端垂直插入吸頭中,稍微用力下壓轉(zhuǎn)動緊密安裝吸頭。使用多通道移液器時,將移液器的第一排對準第一個管嘴,傾斜插入,前后稍微搖動擰緊。吸頭插入后略超過O-形環(huán),并可以看到連接部分形成清晰的密封圈即可。然后吸排空氣幾次,以保證活塞腔內(nèi)外氣壓一致。
第一節(jié)移液器四、移液器的使用方法及其注意事項(一)使用方法4.吸液:
吸液前,要保證移液器、吸頭和待移取液體處于同一溫度,可用待移取液體潤洗吸頭1-2次,尤其是黏稠的液體或密度與水不同的液體。
用可調(diào)式單通道移液器時,應(yīng)垂直握住移液器,先用拇指將移液操作桿按至第一檔,然后將吸頭尖端垂直侵入液面以下2-3mm深度,緩慢均勻地松開操作桿,待吸頭吸入溶液后靜置2-3秒,并斜貼在容器壁上淌走吸頭外壁多余的液體。按下或松開移液操作桿時必須循序漸進,決不允許讓操作桿急速彈回。
第一節(jié)移液器四、移液器的使用方法及其注意事項(一)使用方法5.放液
將移液器吸頭移進待裝容器,但吸頭不能完全移進容器。然后用拇指按壓移液操作桿到第一檔排出液體,稍停留1-2秒繼續(xù)將移液操作桿按至第二檔排出吸頭中殘余液體。排完液體移出移液器,緩慢松開操作桿使之復(fù)位。放液時,移液器可垂直懸空放液,也可使移液器成15。-20。傾斜,吸頭尖貼容器壁進行放液。第一節(jié)移液器四、移液器的使用方法及其注意事項(一)使用方法6.移液器的放置
使用移液器完畢后,用拇指按住去頭桿向下壓,退去用過的吸頭。然后旋轉(zhuǎn)螺桿將其容量調(diào)到標識的最大值,并把移液器懸掛在專用的移液器架上。長期不用時應(yīng)置于專用盒內(nèi)。第一節(jié)移液器四、移液器的使用方法及其注意事項(二)注意事項1.設(shè)定移液體積時,轉(zhuǎn)動旋鈕不可太快,也不能旋轉(zhuǎn)超出其最大或最小量程。2.應(yīng)選用與移液器匹配的、有質(zhì)量保證的吸頭。吸頭不匹配主要表現(xiàn)為對氣密性的影響,會直接影響移液器的精確性,通常會使移液量小于設(shè)定量。3.在裝配吸頭的過程中,用移液器反復(fù)強烈撞擊吸嘴反而會擰不緊。長期如此操作,可導(dǎo)致移液器中的零部件松散,嚴重時會導(dǎo)致調(diào)節(jié)刻度的旋鈕卡住,對移液器的精確性造成影響。4.應(yīng)垂直吸液,傾斜的狀態(tài)會造成氣壓面改變,影響移液精度。5.吸液和放液速度不能過快??煳鼘τ?ml及以上量程的移液器,容易造成上沖,過快的放液會增加液體的殘留量。6.吸液時不能將吸頭全部插入溶液中,以免造成吸頭外壁殘留過多液體,使移液量不準。放液時吸頭不能全部移進容器,以免交叉污染。7.當移液器吸頭里有液體時,切勿將移液器水平放置或倒置,以免液體倒流而腐蝕活塞彈簧,嚴重的會造成損壞、交叉污染等。8.對移液器進行高溫消毒時,應(yīng)首先查閱所使用的移液器是否適合高溫消毒后再進行處理。第一節(jié)移液器五、移液器的維護與常見故障處理(一)移液器的維護1.移液器的清潔2.移液器的消毒3.移液器上污染核酸的去除4.移取不同性質(zhì)液體的移液器操作要求與保養(yǎng)方法(二)移液器常見故障及其處理1.移液器的拆卸方法2.移液器的常見故障及排除第一節(jié)移液器五、移液器的維護與常見故障處理常見故障可能原因解決辦法吸液嘴內(nèi)有殘液吸液嘴不適配吸液嘴塑料濕潤性不均一吸液嘴未裝好使用原配吸液嘴裝緊吸液嘴重裝新吸液嘴移液器的常見故障及其解決辦法第一節(jié)移液器五、移液器的維護與常見故障處理常見故障可能原因解決辦法漏液或移液量太少吸液嘴不適配吸液嘴和連件間有異物活塞或O-形環(huán)上硅油不夠O-形環(huán)與活塞未扣好或O-形環(huán)損壞
操作不當需要校準或液體密度與水差異大移液器被損壞使用原配吸液嘴清潔連件,重裝新吸液嘴涂上硅油清潔并潤滑O-形環(huán)和活塞或更換O-形環(huán)
認真按規(guī)定操作根據(jù)指導(dǎo)重新校準
維修第一節(jié)移液器五、移液器的維護與常見故障處理常見故障可能原因解決辦法按鈕卡住或運動不暢活塞被污染或有氣溶膠滲透清潔并潤滑O-形環(huán)和活塞,清潔吸液嘴連件移液器堵塞,吸液量太少液體滲進移液器且已干燥清潔并潤滑活塞和吸液嘴連件吸液嘴推出器卡住或運動不暢吸液嘴連件和/或吸液嘴推出軸被污染清潔吸液嘴連件和推出軸第一節(jié)移液器六、移液器的臨床應(yīng)用移液器被廣泛應(yīng)用于臨床診斷實驗室、生物技術(shù)實驗室、藥學和化學實驗室、環(huán)境實驗室、食品實驗室等。常見的移液器有以下幾類:1.微量移液器微量移液器是生物、化學實驗室常用的小容量移取液體的單道微量移液器。2.外置活塞移液器外置活塞移液器可以適用于高黏度液體,如蛋白,樹脂,最高黏度可達50,000mm2/s,最高密度可達13.6g/cm3,如汞等;高蒸汽壓的液體,最高蒸汽壓可達500mbar,無論酒精還是一些碳氫化合物、發(fā)泡性液體,都能移取。具有與單道空氣活塞式移液器一樣準確的精度和誤差系數(shù)。3.瓶口移液器根據(jù)型號不同,通常用于中等流量(0.5ml-100ml)的液體的運輸,如酸,堿等,根據(jù)吸取的液體的性質(zhì)不同分為DispensetteIII,DispensetteOrganic和DispensetteHF??梢哉w于121℃中消毒。第一節(jié)移液器六、移液器的臨床應(yīng)用4.手動連續(xù)移液器可以迅速而方便地移取2ul-5000ul的試劑。一次吸液完成49次之多。對于粘稠,高密度液體和高蒸汽壓液體也可以準確移取。適用于PlastibrandPD吸頭,Combitips吸頭以及其他活塞式吸頭。5.電子連續(xù)移液器利用微處理器控制操作可達到自動識別特定的PD-吸頭。移液體積控制范圍從1ul-50ml,移動7.01ul,70.1ul等毫無問題。能自動分配,電子連續(xù)移液器可根據(jù)連續(xù)三次移液的平均間隔時間,然后進行分液。(所需時間可自動計算,不需人工計算和輸入)。智能充電,可直接將電子連續(xù)移液器插入充電器進行充電,也可將電池取下進行充電。更換備用電池時,原儲存數(shù)據(jù)不會因斷電而丟失。6.電子滴定器常用于食品,制藥,石油化工等行業(yè)。體積小,電池壽命長,適合于狹小空間和遠離電源的地方使用。操作簡便,吸入試劑時,按“Fill”鍵,手輪向上旋動,如開始滴定,按“Titr”鍵開始,手輪向下旋動,即開始顯示滴定體積。數(shù)字顯示,減少了人為讀數(shù)和計算體積時所帶來的誤差。無需工具,用戶可自行校準。第一章臨床檢驗分離儀器第二節(jié)
離心機第二節(jié)離心機
離心機,是利用離心力,分離液體與固體顆?;蛞后w與液體的混合物中各組分的儀器。第二節(jié)離心機一、離心機的工作原理(一)液體中的微粒在重力場中的分離若想把生物樣品中的微粒從液體中分離出來,最簡單的方法是將液體靜置一段時間,液體中的微粒由于重力場的作用可逐漸下沉,下沉的速度與微粒的大小、形態(tài)、密度、重力場的強度及液體的黏度有關(guān)。如紅細胞顆粒,直徑為數(shù)微米,可以在通常重力作用下觀察到它們的沉降過程。這個現(xiàn)象稱為重力沉降。第二節(jié)離心機一、離心機的工作原理
(二)液體中的微粒在離心力場中的沉降離心是利用旋轉(zhuǎn)運動的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進行分離、濃縮和提純生物樣品的一種方法。懸浮液在高速旋轉(zhuǎn)下,由于巨大的離心力作用,使懸浮的微小顆粒(細胞器、生物大分子的沉淀等)以一定的速度沉降,從而使溶液得以分離、濃縮和提純,顆粒的沉降速度取決于離心機的轉(zhuǎn)速、顆粒的質(zhì)量、大小和密度。旋轉(zhuǎn)速度越大,顆粒的沉降也就越快。在離心力場中加速度達到數(shù)萬甚至數(shù)十萬倍重力加速度時,顆粒的沉降也加快了同樣的倍數(shù)。這就使得許多在重力場中不能沉降的細小顆粒及密度較低的物體組份能用離心技術(shù)進行分離純化。第二節(jié)離心機一、離心機的工作原理
1.離心力(centrifugalforce,F(xiàn)c)當物體所受外力小于運動所需要的向心力時,物體將向遠離圓心的方向運動。物體遠離圓心的運動稱離心運動。離心運動是由于向心力消失或不足而造成的。離心作用是根據(jù)在一定角速度下作圓周運動的任何物體都受到一個向外的離心力進行的。離心力(Fc)的大小等于離心加速度ω2r與顆粒質(zhì)量m的乘積,即:
式中ω是旋轉(zhuǎn)角速度,N是每分鐘轉(zhuǎn)頭旋轉(zhuǎn)次數(shù),r為離心半徑,m是質(zhì)量。2.相對離心力(relativecentrifugalforce,RCF)相對離心力是指在離心力場中,作用于顆粒的離心力相當于地球重力的倍數(shù),單位是重力加速度“g”。由于各種離心機轉(zhuǎn)子的半徑或離心管至旋轉(zhuǎn)軸中心的距離不同,離心力也不同,因此在文獻中常用“相對離心力”或“數(shù)字×g”表示離心力,例如25000×g,表示相對離心力為25000。只要RCF值不變,一個樣品可以在不同的離心機上獲得相同的結(jié)果。一般情況下,低速離心時相對離心力常以轉(zhuǎn)速“rpm”來表示,高速離心時則以“g”表示。RCF=1.118×10-5n2r式中r為離心轉(zhuǎn)子的半徑距離,以cm為單位;n為轉(zhuǎn)子每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(r/min)。第二節(jié)離心機一、離心機的工作原理3.沉降速度(sedimentationvelocity)指在強大離心力作用下,單位時間內(nèi)物質(zhì)運動的距離。即:式中,為介質(zhì)的密度,ρ為微粒的密度,g為重力加速度,f為阻力系數(shù)。由上式可知,微粒的沉降速度與成正比,與阻力系數(shù)f成反比。4.沉降時間(sedimentationtime,Ts)在實際工作中,常常遇到要求在已有的離心機上把某一種溶質(zhì)從溶液中全部沉降分離出來需用多大轉(zhuǎn)速與多長時間可達到目的的問題。如果轉(zhuǎn)速已知,則需確定分離某粒子所需的時間即沉降時間。在離心機的某一轉(zhuǎn)速下把溶液中某一種溶質(zhì)全部沉降分離出來所需的時間即沉降時間。5.沉降系數(shù)(sedimentationcoefficient)
顆粒在單位離心力場作用下的沉降速度,其單位為秒。沉降系數(shù)與樣品顆粒的分子量、分子密度、組成、形狀等都有關(guān),樣品顆粒的質(zhì)量或密度越大,它表現(xiàn)出的沉降系數(shù)也越大。各種生物樣品的沉降系數(shù)差別很大,因此可以應(yīng)用離心技術(shù)來進行其定性和定量的分析及分離制備。第二節(jié)離心機二、常用的離心方法常用的離心方法差速離心法密度梯度離心法分析型超速離心法第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(一)差速離心法
差速離心法(differentialvelocitycentrifugationmethod)是利用不同的粒子在離心力場中沉降的差別,在同一離心條件下,通過不斷增加相對離心力,使一個非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分步沉淀的離心方法。主要用于一般及特殊樣品的分離,例如分離細胞器和病毒。第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(一)差速離心法
操作過程一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心,分離出第二部分沉淀如此反復(fù)加高轉(zhuǎn)速,逐級分離出所需要的物質(zhì)第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(一)差速離心法
第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(二)密度梯度離心法
密度梯度離心法(isodensitycentrifugationmethod)又稱為區(qū)帶離心法。樣品在一定惰性梯度介質(zhì)中進行離心沉淀或沉降平衡,在一定離心力作用下把顆粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(二)密度梯度離心法
第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(二)密度梯度離心法
1.速率區(qū)帶離心法速率區(qū)帶離心法是根據(jù)被分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同,離心后分別處于不同的密度梯度層內(nèi)形成幾條分開的樣品區(qū)帶,達到彼此分離的目的。第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(二)密度梯度離心法1.速率區(qū)帶離心法
此離心法須嚴格控制離心時間,使得既能使各種粒子在介質(zhì)梯度中形成區(qū)帶,又要把時間控制在任一粒子達到沉淀前。若離心時間過長,所有的樣品全部都到達離心管底部;若離心時間不足,則樣品還沒有分離。此法是一種不完全的沉降,沉降受物質(zhì)本身大小的影響較大,因此一般是在物質(zhì)大小相異而密度相同的情況下應(yīng)用。第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(二)密度梯度離心法2.等密度區(qū)帶離心法
當不同顆粒存在浮力密度差時,在離心力場中,顆?;蛳蛳鲁两?,或向上浮起,一直沿梯度移動到它們密度恰好相等的位置上(即等密度點)形成區(qū)帶,故稱為等密度區(qū)帶離心法。第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(二)密度梯度離心法2.等密度區(qū)帶離心法
顆粒的有效分離取決于其浮力密度差,與顆粒的大小和形狀無關(guān),但后兩者決定著達到平衡的速率、時間和區(qū)帶的寬度。顆粒的浮力密度與其原來的密度、水化程度及梯度溶質(zhì)的通透性或溶質(zhì)與顆粒的結(jié)合等因素有關(guān)。因此,要求介質(zhì)梯度應(yīng)有一定的陡度,要有足夠的離心時間形成梯度顆粒的再分配,進一步離心也不會有影響。第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(三)分析型超速離心法分析性超速離心法主要是為了研究生物大分子的沉降特性和結(jié)構(gòu),而不是專門收集某一特定組份。因此它使用了特殊的轉(zhuǎn)子和檢測手段,以便連續(xù)監(jiān)測物質(zhì)在一個離心場中的沉降過程。
第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(三)分析型超速離心法
1.分析性超速離心法的工作原理分析型超速離心機主要由一個橢圓形的轉(zhuǎn)子、一套真空系統(tǒng)和一套光學系統(tǒng)所組成。該轉(zhuǎn)子通過一個柔性的軸聯(lián)接成一個高速的驅(qū)動裝置,此軸可使轉(zhuǎn)子在旋轉(zhuǎn)時形成自己的軸。轉(zhuǎn)子在一個冷凍的真空腔中旋轉(zhuǎn),其容納了兩個小室:分析室和配衡室。配衡室是一個經(jīng)過精密加工的金屬塊,作為分析室的平衡用。分析室的容量一般為1ml,呈扇形排列在轉(zhuǎn)子中,其工作原理與一個普遍水平轉(zhuǎn)子相同。分析室有上下兩個平面的石英窗,離心機中裝有的光學系統(tǒng)可保證在整個離心期間都能觀察小室中正在沉降的物質(zhì),可以通過對紫外光的吸收(如對蛋白質(zhì)和DNA)或折射率的不同對沉降物進行監(jiān)測。
第二節(jié)離心機二、常用的離心方法(三)分析型超速離心法
2.分析性超速離心法的應(yīng)用范圍(1)測定生物大分子的相對分子重量測定相對分子重量中應(yīng)用最廣的是沉降速度法。超速離心的高速使得任意分布的粒子通過溶劑從旋轉(zhuǎn)的中心輻射地向外移動,在清除了粒子的溶劑和尚含有沉降物的溶劑之間形成一個明顯的界面,該界面隨時間的推移而移動,這就是粒子沉降速度的一個指標。用照相記錄,即可求出粒子的沉降系數(shù)。(2)生物大分子的純度估計分析型超速離心機已廣泛地應(yīng)用于研究DNA制劑、病毒和蛋白質(zhì)的純度。用沉降速度的技術(shù)來分析沉降界面是測定制劑均質(zhì)性的最常用方法之一,出現(xiàn)單一清晰的界面一般認為是均質(zhì)的,如有雜質(zhì)則在主峰的一側(cè)或兩側(cè)出現(xiàn)小峰。(3)分析生物大分子中的構(gòu)象變化分析型超速離心機已成功地用于檢測大分子構(gòu)象的變化,例如DNA可能以單股或雙股出現(xiàn),其中每一股在本質(zhì)上可能是線性的,也可能是環(huán)狀的。如果遇到某種因素(溫度或有機溶劑),DNA分子可能發(fā)生一些構(gòu)象上的變化,這些變化也許可逆、也許不可逆,這些構(gòu)象上的變化可以通過檢查樣品在沉降速度上的差異來證實。
第二節(jié)離心機三、離心機的分類按用途可分為制備型、分析型和制備分析兩用型。按轉(zhuǎn)速可分為低速、高速、超速等離心機(臨床上習
慣以轉(zhuǎn)速對離心機進行分類)。
按結(jié)構(gòu)可分為臺式、多管微量式、細胞涂片式、血液
洗滌式、高速冷凍式、大容量低速冷凍式、臺
式低速自動平衡離心機等。第二節(jié)離心機三、離心機的分類(一)低速離心機是臨床實驗室常規(guī)使用的一類離心機。最大轉(zhuǎn)速在10000r/min以內(nèi),相對離心力在15000×g以內(nèi),容量為幾十毫升至幾升,分離形式是固液沉降分離。主要用作血漿、血清的分離及腦脊液、胸腹水、尿液等有形成份的分離。第二節(jié)離心機三、離心機的分類(二)高速離心機最大轉(zhuǎn)速為20000rpm~25000rpm(r/min),最大相對離心力為89000×g,最大容量可達3升,分離形式是固液沉降分離。主要用于臨床實驗室分子生物學中的DNA、RNA的分離和基礎(chǔ)實驗室對各種生物細胞、無機物溶液、懸浮液及膠體溶液的分離、濃縮、提純樣品等。為了防止高速離心過程中溫度升高而使酶等生物分子變性失活,還裝設(shè)了冷凍裝置,因此又稱高速冷凍離心機。第二節(jié)離心機三、離心機的分類(三)超速離心機轉(zhuǎn)速可達50000rpm~80000rpm,相對離心力最大可達510000×g,離心容量由幾十毫升至2升。分離形式是差速沉降分離和密度梯度區(qū)帶分離,離心管平衡允許的誤差要小于0.1克。為了防止樣品液濺出,附有離心管帽;為了防止溫度升高,裝有冷凍裝置。第二節(jié)離心機三、離心機的分類(三)超速離心機超速離心機的出現(xiàn),使生物科學的研究領(lǐng)域有了新的擴展,它能使過去僅僅在電子顯微鏡觀察到的亞細胞器得到分級分離,還可以分離病毒、核酸、蛋白質(zhì)和多糖等。第二節(jié)離心機四、離心機的基本結(jié)構(gòu)(一)低速離心機1.電動機是離心機的主件,多為串激式。它包括定子和轉(zhuǎn)子兩部分。串激式電動機有很大的啟動轉(zhuǎn)矩,隨著負載的增加,轉(zhuǎn)速急速下降,空載時轉(zhuǎn)速很高。使用時如無特殊需要,不要將離心機的轉(zhuǎn)盤卸掉。2.離心轉(zhuǎn)盤(轉(zhuǎn)頭)離心轉(zhuǎn)盤常用鑄鋁制成,是平頂錐形,中間有一圓孔,套在電動機上端的轉(zhuǎn)軸上,然后用螺帽旋緊固定,轉(zhuǎn)盤上有6-12個對稱的45°角的斜孔,以放試管。3.調(diào)速裝置調(diào)速裝置(用于電動機)有多種。如多抽頭變阻器、瓷盤可變電阻器等多種形式。在電源與電動機之間串聯(lián)一只多抽頭扼流圈或瓷盤可變電阻器,改變電動機的電流和電壓,通過旋轉(zhuǎn)或觸摸面板自動控制系統(tǒng),達到轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)。4.離心套管離心套管主要用塑料和不銹鋼制成。塑料離心管透明(或半透明),常用性能較好的材料,如聚丙烯(PP)。其硬度小,可用穿刺法取出梯度層,但易變形,抗有機溶劑腐蝕性差,使用壽命短。塑料離心管都有管蓋,離心前管蓋必須蓋嚴,防止倒置時漏液。不銹鋼離心管強度大,不變形,能抗熱、抗凍、抗化學腐蝕。第二節(jié)離心機四、離心機的基本結(jié)構(gòu)(二)高速(冷凍)離心機1.轉(zhuǎn)動裝置離心機的轉(zhuǎn)動裝置主要由電動機、轉(zhuǎn)頭軸,以及它們之間連接的部分構(gòu)成。2.速度控制系統(tǒng)是由標準電壓、速度調(diào)節(jié)器、電流調(diào)節(jié)器、功率放大器、電動機、速度傳感器等部分構(gòu)成。通常采用的速度傳感器有測速發(fā)電機傳感器,光電速度傳感器、電磁速度傳感器等。3.真空系統(tǒng)超速離心機的轉(zhuǎn)速很高,當轉(zhuǎn)速超過4×10rpm轉(zhuǎn)時,空氣摩擦產(chǎn)生的高熱就成了嚴重問題。因此,超速離心機都配有真空系統(tǒng),將離心腔密封并抽成真空,以克服空氣的摩擦阻力,保證離心機達到正常所需要的轉(zhuǎn)速。4.溫度控制系統(tǒng)高速離心機的溫度控制是在轉(zhuǎn)頭室裝置一熱電偶,監(jiān)測其溫度。制冷壓縮機采用全封閉式,由壓縮機、冷凝器、毛細管和蒸發(fā)器四個部分組成。為了降低噪音,冷凝器通常采用水冷卻系統(tǒng)。用接觸式熱敏電阻作為控溫儀的感溫元件,在測量儀表上可選擇溫度和讀出其溫度控制值。5.安全保護裝置超速離心機的安全保護裝置通常包括主電源過電流保護裝置、驅(qū)動回路超速保護、冷凍機超負荷保護和操作安全保護等四個部分。第二節(jié)離心機四、離心機的基本結(jié)構(gòu)(三)超速(冷凍)離心機通常由驅(qū)動和速度控制、溫度控制、真空系統(tǒng)、轉(zhuǎn)頭組成。超速離心機的驅(qū)動裝置是由水冷或風冷電動機通過精密齒輪箱或皮帶變速,或直接用變頻感應(yīng)電機驅(qū)動,并由微機進行控制。還有一個過速保護系統(tǒng),以防止轉(zhuǎn)速超過轉(zhuǎn)頭最大規(guī)定轉(zhuǎn)速而引起轉(zhuǎn)頭的撕裂或爆炸,為此,離心腔用能承受此種爆炸的裝甲鋼板密閉。安裝在轉(zhuǎn)頭下面的紅外線射量感受器直接并連續(xù)監(jiān)測離心腔的溫度,以保證更準確更靈敏的溫度調(diào)控。這種紅外線溫控比高速離心機的熱電偶控制裝置更敏感,更準確。超速離心機裝有真空系統(tǒng),這是它與高速離心機的主要區(qū)別。另外,分析型超速離心機還使用了特殊設(shè)計的轉(zhuǎn)頭和光學檢測系統(tǒng),以便連續(xù)地監(jiān)測物質(zhì)在一個離心場中的沉降過程。在整個離心期間都能通過紫外吸收或折射率的變化監(jiān)測離心杯中沉降的物質(zhì),并可拍攝沉降物質(zhì)的照片。第二節(jié)離心機五、離心機的使用與注意事項(一)使用方法操作流程(1)打開電源開關(guān),離心機檢查。(2)開啟蓋門,選用合適的轉(zhuǎn)頭,平衡離心管和其內(nèi)容物,并對稱放置,以便使負載均勻地分布在轉(zhuǎn)頭的周圍。(3)設(shè)定好轉(zhuǎn)速、時間等參數(shù)后,按下啟動按鈕開始離心。離心過程中應(yīng)隨時觀察離心機上的儀表是否正常工作,如有異常應(yīng)立即停機檢查,及時排除故障。未找出原因前不得繼續(xù)運轉(zhuǎn)。(4)離心結(jié)束后,開啟門蓋,取出離心管后,關(guān)閉電源開關(guān)。第二節(jié)離心機五、離心機的使用與注意事項(一)使用方法1.離心方法的選擇通常,對顆粒的質(zhì)量和密度與溶液相差較大的分離樣品,只要選擇合適的離心轉(zhuǎn)速和離心時間,就能達到較好的分離效果。對存在兩種以上質(zhì)量和密度不同的樣品顆粒,則可采用差速離心法。差速離心方法常針對不同的離心速度和離心時間要求,使沉降速度不同的樣品顆粒按批次分離。對于有密度梯度差異的樣品介質(zhì),可采用密度梯度離心法,使沉降系數(shù)比較接近的物質(zhì)得以分離。當不同樣品顆粒的密度范圍在離心介質(zhì)的密度梯度范圍內(nèi)時,可采用等密度梯度離心。第二節(jié)離心機五、離心機的使用(一)使用方法2.離心參數(shù)的設(shè)置第二節(jié)離心機六、離心機的維護保養(yǎng)與常見故障處理(一)離心機的維護與保養(yǎng)1.日維護與保養(yǎng)檢查轉(zhuǎn)子鎖定螺栓是否松動;用溫水(55℃左右)及中性洗滌劑清洗轉(zhuǎn)子,用蒸餾水沖洗,軟布擦干后用電吹風吹干、上蠟、干燥保存。2.月維護與保養(yǎng)用溫水及中性洗滌劑清潔轉(zhuǎn)子、離心機內(nèi)腔等;使用70%酒精消毒液對轉(zhuǎn)子進行消毒。3.年度維護與保養(yǎng)與當?shù)亟?jīng)銷商聯(lián)系檢查離心機馬達、轉(zhuǎn)子、門蓋、腔室、速度表、定時器、速度控制系統(tǒng)等部件,保證各部位的正常運轉(zhuǎn)。第二節(jié)離心機六、離心機的維護保養(yǎng)與常見故障處理常見故障故障原因排除方法電機不轉(zhuǎn)1.主電源指示燈不亮
保險絲熔斷,或電源線、插頭插座接觸不良2.主電源指示燈亮而電機不能啟動
(1)波段開關(guān)、瓷盤變阻器損壞或其連接線斷脫(2)磁場線圈的連接線斷脫或線圈內(nèi)部短路1.重新接線或更換插頭插座2.更換損壞元件或重新焊接線3.檢查真空泵表及油壓指示值(二)離心機的常見故障處理第二節(jié)離心機六、離心機的維護保養(yǎng)與常見故障處理常見故障故障原因排除方法電機達不到額定轉(zhuǎn)速1.軸承損壞或轉(zhuǎn)動受阻,軸承內(nèi)缺油或軸承內(nèi)有污垢引起摩擦阻力增大2.整流子表面有一層氧化物,甚至燒成凹凸不平或電刷與整流子外沿不吻合使轉(zhuǎn)速下降3.用萬用表檢查轉(zhuǎn)子線圈中有某匝線圈短路或斷路1.清洗及加潤滑油,或更換軸承2.
清理整流子及電刷,使其接觸良好,或者更換3.重新繞制線圈轉(zhuǎn)頭的損壞轉(zhuǎn)頭可因金屬疲勞、超速、過應(yīng)力、化學腐蝕、選擇不當、使用中轉(zhuǎn)頭不平衡及溫度失控等原因而導(dǎo)致離心管破裂,樣品滲漏轉(zhuǎn)頭損壞正確選用合適的離心管和離心轉(zhuǎn)頭,在轉(zhuǎn)頭的安全系數(shù)及保證期內(nèi)使用第二節(jié)離心機六、離心機的維護保養(yǎng)與常見故障處理常見故障故障原因排除方法冷凍機不能啟動及制冷效果差1.電源不通保險絲熔斷,或電源線、插頭插座接觸不良2.電壓過低,安全裝置動作使冷凍機不能啟動??赡苁请娋W(wǎng)電壓低,或配電板配線過多3.通風性能不好,散熱器效果差,或散熱器蓋滿灰塵,影響制冷效果1.重新接線,或更換插頭插座2.恢復(fù)電網(wǎng)電壓,或減少配電板的配線3.改善散熱器的通風,或清理第二節(jié)離心機六、離心機的維護保養(yǎng)與常見故障處理常見故障故障原因排除方法機體震動劇烈、響聲異常1.離心管重量不平衡,放置不對稱2.轉(zhuǎn)頭孔內(nèi)有異物,負荷不平衡或使用了不合格的試管套3.轉(zhuǎn)軸上端固定螺帽松動,轉(zhuǎn)軸摩擦或彎曲4.電機轉(zhuǎn)子不在磁場中心會產(chǎn)生噪音5.機座上減震彈簧的固定螺絲松動或其中一根彈簧斷裂6.轉(zhuǎn)子本身損傷1.正確操作2.清除孔內(nèi)異物3.擰緊轉(zhuǎn)軸上端螺帽,或更換轉(zhuǎn)軸第二節(jié)離心機七、離心機的臨床應(yīng)用血液分離離心機,是對血液各種有形成份分離提取的主要手段,大部分血液組份可以在1次-2次離心分離得到。第一次為輕分離時間短,轉(zhuǎn)速低,一般離心為3分鐘~5分鐘,相對離心力2000g~3000g,常溫下分離,通過輕分離使血液中紅、白細胞沉淀,血小板仍懸浮在溶液中。這種分離方式適用于從全血中得到富含紅、白細胞的集聚物。重分離,離心時間長5分鐘-7分鐘,相對離心力4000g~5000g,在4℃溫度中分離。重離心適用于從細胞組份中分離新鮮血漿。一般情況下,輕離心和重離心聯(lián)合使用。在離心過程中,運用沉降原理,使血液中的大分子和重顆粒產(chǎn)生沉淀,達到血液組份的分離,我們利用這一沉降理論,可以計算出不同組份的沉降速率。第一章臨床檢驗分離儀器第三節(jié)電泳儀
第三節(jié)電泳儀電泳(electrophoresis)是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)(electrophoresistechnique)??梢詫崿F(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器稱之為電泳儀(electrophoresister)。
第三節(jié)電泳儀第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理利用待分離樣品中的各種分子(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、多肽、核苷酸等)都具有可電離基團,它們在某個特定的pH值下可以帶正電或負電,由于不同生物分子其自身帶電性質(zhì)、分子本身大小以及形狀等差異,在電場作用下,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率,從而達到對樣品進行分離、鑒定或純化的目的。第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理電泳分析技術(shù)原理電泳結(jié)果第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理電泳過程中同時發(fā)生的電解、電泳、電沉積和電滲四種作用,是一個復(fù)雜的電化學反應(yīng)過程。陰極電泳涂料所含的樹脂帶有堿性基團,經(jīng)酸中和后成鹽而溶于水,通直流電后,酸根離子向陽極移動,樹脂離子及其包裹的顏料粒子帶正電荷向陰極移動,并沉積在陰極上。第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理電泳過程中同時發(fā)生的電解、電泳、電沉積和電滲四種作用,其是一個復(fù)雜的電化學反應(yīng)過程:陰極電泳涂料所含的樹脂帶有堿性基團,經(jīng)酸中和后成鹽而溶于水,通直流電后,酸根離子向陽極移動,樹脂離子及其包裹的顏料粒子帶正電荷向陰極移動,并沉積在陰極上。若將帶凈電荷Q的粒子放入電場,則該粒子所受到的電荷引力為:
F引=EQ
在溶液中,運動粒子與溶液之間存在阻力F阻
F阻=6πrηV
當F引=F阻時EQ=6πrηVV=EQ/6πrη
由上式可以看出,粒子的移動速度(泳動速度V)與電場強度(E)和粒子所帶電荷量(Q)成正比,而與粒子的半徑(r)及溶液的粘度(η)成反比。第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理電泳的影響因素電場強度溶液的PH值溶液的離子強度電滲作用粒子的遷移率吸附作用其他第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理1.電場強度電場強度是在電場方向上單位長度的電勢降落,也叫電勢梯度。電場強度越大,帶電粒子受到的電場力愈大,泳動速度越快。電場強度越小,帶電粒子受到的電場力愈小,泳動速度越慢。第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理決定粒子的電荷性質(zhì)電荷量多少2.溶液的PH值作用:第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理3.溶液的離子強度溶液的離子強度對帶電粒子的泳動有影響。溶液的離子強度越高,顆粒泳動速度越慢。反之則越快。離子強度太低,擴散現(xiàn)象嚴重,使分辨力明顯降低,從而影響泳動的速率。離子強度太高,會降低顆粒的泳動速度。第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理4.粒子的遷移率遷移率為帶電粒子在單位電場強度下的移動速度,常用μ來表示,是一個由許多因素(包括離子半徑、溶劑化作用、介電常數(shù)、溶劑粘度、離子形狀和凈電荷、溶液pH、解離度和溫度等)決定的。一般來說,顆粒帶凈電荷量越大或其直徑越小,其形狀越接近球形,在電場中的泳動速度就越快;反之,則越慢。顆粒帶凈電荷量越大或其直徑越小,其形狀越接近球形,在電場中的泳動速度就越快;反之,則越慢。第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理5.電滲作用當支持物不是絕對惰性物質(zhì)時,常常會有一些離子基團如羧基、磺酸基、羥基等吸附溶液中的正離子,使靠近支持物的溶液相對帶電,在電場作用下,此溶液層會向負極移動。反之,若支持物的離子基團吸附溶液中的負離子,則溶液層會向正極移動。這種在電場中溶液對于固體支持物的相對移動現(xiàn)象稱為電滲。電滲方向與電泳方向相同,則粒子移動速度是二者速度之和,反之是二者之差。第三節(jié)電泳儀一、電泳儀的工作原理6.吸附作用介質(zhì)對樣品的滯留作用。導(dǎo)致了樣品的拖尾現(xiàn)象從而降低了分辨率。紙的吸附作用最大,醋酸纖維素膜的吸附作用較小或無。7.其他焦耳熱、溶液黏度、濕度、電壓穩(wěn)定度和支持物篩孔均可影響電泳速度和質(zhì)量。第三節(jié)電泳儀二、電泳技術(shù)的分類1.根據(jù)工作原理的不同:可分為移界電泳、區(qū)帶電泳、等速電泳、等電聚焦電泳、免疫電泳等。2.根據(jù)有無固體支持物可分為:自由電泳和支持物電泳3.根據(jù)支持載體的位置或形狀可分成:水平電泳、垂直電泳、板狀電泳、柱狀電泳、U型管電泳、倒V字形電泳、毛細管電泳等。4.根據(jù)支持物的特點又可分為:①無阻滯支持物電泳。②高密度的凝膠電泳。5.根據(jù)電源控制的不同,一般可分為以下3類:(1)恒壓電泳;(2)恒流電泳;(3)恒功率電泳。6.根據(jù)自動化程度的不同,可分為半自動和全自動型。7.根據(jù)其功能的不同,可分為制備型、分析型、轉(zhuǎn)移型、濃縮型等。8.根據(jù)用法的類型可分為:雙向電泳、交叉電泳、連續(xù)紙電泳、電泳-層析相結(jié)合技術(shù)等。9.根據(jù)不同的使用目的可分為:核酸電泳、血清蛋白電泳、制備電泳、DNA測序電泳等。第三節(jié)電泳儀三、電泳儀的操作流程目前常用的電泳儀主要有兩種類型:手工操作的電泳儀自動化操作的電泳儀第三節(jié)電泳儀三、電泳儀的操作流程(一)手工電泳儀的操作流程目前一般實驗室使用的電泳儀多為手工操作,電源部分和電泳槽部分是分離的,加樣多采用手工方法。雖然不同品牌型號的電泳儀操作上有些不同,但基本步驟一致。第三節(jié)電泳儀三、電泳儀的操作流程第三節(jié)電泳儀三、電泳儀的操作流程(二)自動化電泳分析儀的操作流程臨床使用較多的是自動化電泳分析儀,將手工煩瑣的程序進行自動化處理,具有電腦程序化管理,快捷簡便的人機對話等功能,自動化電泳儀的操作流程如圖所示。第三節(jié)電泳儀三、電泳儀的操作流程第三節(jié)電泳儀四、電泳儀的基本結(jié)構(gòu)電泳分析技術(shù)所需要的電泳設(shè)備可分為主要設(shè)備和輔助設(shè)備。主要設(shè)備指電泳儀電源、電泳槽。輔助設(shè)備指恒溫循環(huán)冷卻裝置、伏時積分器、凝膠烘干器等。有的還有分析檢測裝置。目前臨床常規(guī)使用的自動化電泳儀一般分為兩個部分:電泳可控制單元(包括電源、電泳槽和半導(dǎo)體冷卻裝置)和染色單元。第三節(jié)電泳儀四、電泳儀的基本結(jié)構(gòu)(一)電泳儀電源電泳電源是建立電泳電場的裝置,作用是提供一個連續(xù)調(diào)節(jié)的、穩(wěn)定的電壓或電流。通常為穩(wěn)定(輸出電壓、輸出電流或輸出功率)的直流電源。第三節(jié)電泳儀四、電泳儀的基本結(jié)構(gòu)(二)電泳槽電泳槽是樣品分離的場所,是電泳儀的一個主要部件。槽內(nèi)裝有電極、緩沖液槽、電泳介質(zhì)支架等。電泳槽的種類很多,如單垂直電泳槽、雙垂直電泳槽、臥式多用途電泳槽、圓盤電泳槽、管板兩用電泳槽、薄層等電聚焦電泳槽、瓊脂糖水平電泳槽、盒式電泳槽、垂直可升降電泳槽、垂直夾心電泳槽、U型管電泳槽、DNA序列分析電泳槽、轉(zhuǎn)移電泳槽等。第三節(jié)電泳儀四、電泳儀的基本結(jié)構(gòu)(三)附加裝置輔助設(shè)備指恒溫循環(huán)冷卻裝置、伏時積分器、凝膠烘干器等。有的還有分析檢測裝置。第三節(jié)電泳儀五、電泳儀的維護及常見故障處理(一)電泳儀的維護
電泳儀在整個電泳設(shè)備中起著非常關(guān)鍵的作用,電泳設(shè)備的正常運行是電泳分析技術(shù)的基本保證,所以對電泳設(shè)備的日常維護顯得非常重要。在平時的工作過程中應(yīng)做到每日維護、每周維護、每月維護以及按需維護。每日維護的重點應(yīng)當是電極的維護,電泳工作結(jié)束后,應(yīng)用干濾紙擦凈電極,避免電泳緩沖液沉積于電極上或酸堿對電極的腐蝕。每月維護的重點應(yīng)是掃描系統(tǒng)的鼻塞濾鏡及光源。在日常的運行過程中應(yīng)做到:①儀器使用環(huán)境應(yīng)清潔,經(jīng)常擦去儀器表面塵土和污物;②不要將電泳儀放在潮濕的環(huán)境中保存;③長時間不用應(yīng)關(guān)閉電源,同時拔下電源插頭并蓋上防護罩。只有這樣,電泳分析結(jié)果的準確度才能得以保證。第三節(jié)電泳儀五、電泳儀的維護及常見故障處理(二)電泳儀的常見故障及處理
電泳儀屬于精密儀器,在操作過程中要嚴格遵守操作規(guī)程,但不可避免會出現(xiàn)各種各樣的故障,若運行時出現(xiàn)故障報警,應(yīng)立即停止電泳,先檢查負載是否短路或開路,輸出電壓或電流的設(shè)定值,電泳實驗的裝置。以毛細管電泳儀常見故障及解決方法為例。第三節(jié)電泳儀五、電泳儀的維護及常見故障處理毛細管電泳儀的常見故障及處理故障現(xiàn)象故障原因處理方法轉(zhuǎn)盤識別錯誤燈上吸附細微灰塵關(guān)機,用潔凈棉簽輕輕拭去燈表面的灰塵,儀器開機后再進行G32的測定樣品識別錯誤有灰塵吸附;血清分離不好關(guān)機,拆開儀器內(nèi)透明有機玻璃,用無水乙醇擦拭加樣針外壁,然后安裝好,再用儀器內(nèi)程序進行加樣針清洗1-2次,進行C27加樣針加樣感應(yīng)定位第三節(jié)電泳儀五、電泳儀的維護及常見故障處理故障現(xiàn)象故障原因處理方法儀器報警(缺少稀釋杯或稀釋杯位置錯誤)稀釋杯位置錯誤觀察稀釋杯位置,如果沒有處于正常位置,可手動將其移動到其原來位置,然后進行稀釋杯感應(yīng)定位曲線不理想,顯示不穩(wěn)定毛細管的長期使用出現(xiàn)不清潔毛細管清洗程序進行清洗,然后按激活程序進行激活即可第三節(jié)電泳儀五、電泳儀的維護及常見故障處理故障現(xiàn)象故障原因處理方法電泳時出現(xiàn)峰丟失未接入檢測器,或檢測不起作用進樣溫度太低柱箱溫度太低無載氣流檢查設(shè)定值檢查溫度,并根據(jù)需要調(diào)整檢查溫度,并根據(jù)需要調(diào)整檢查壓力調(diào)節(jié)器儀器運行過程中突然斷電電流量不穩(wěn)定或儀器內(nèi)有短路現(xiàn)象采用穩(wěn)壓措施,咨詢工程師更換保險電壓達不到設(shè)定值電阻小電流大,而電泳儀功率有限,電泳緩沖液雜質(zhì)多或者電極短路更換電泳緩沖液,檢修電極第三節(jié)電泳儀六、電泳儀的臨床應(yīng)用(一)血清蛋白電泳
血清中的蛋白質(zhì)構(gòu)成了血清溶解物的絕大部分,其中有白蛋白、各種球蛋白、脂蛋白、酶、酶抑制劑、凝血因子等。新鮮血清經(jīng)醋酸纖維薄膜或瓊脂糖電泳、染色后,通??梢?條帶,即清蛋白、α1、α2、β和γ球蛋球蛋白。許多疾病總血清蛋白濃度和各蛋白組分的比例有所改變,通過血清蛋白電泳圖譜能幫助我們對某些疾病進行診斷及鑒別診斷。第三節(jié)電泳儀六、電泳儀的臨床應(yīng)用(二)尿蛋白電泳臨床進行尿蛋白電泳的主要目的是:①確定尿蛋白的來源;②了解腎臟病變的嚴重程度(選擇性蛋白尿與非選擇性蛋白尿),從而有助于診斷和預(yù)后的判斷。主要根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量及電荷特性而將其分離,形成電泳區(qū)帶,染色,并用光密度掃描儀結(jié)合總蛋白定量,便可得出各區(qū)帶蛋白的含量。當不能進行腎活檢時,尿蛋白電泳結(jié)果能很好地協(xié)助臨床判斷腎臟的主要損害。
(三)血紅蛋白及糖化血紅蛋白電泳應(yīng)用電泳法鑒別患者血液中Hb的類型及含量,對于貧血類型的臨床診斷及治療具有重大意義。Hb電泳結(jié)果應(yīng)根據(jù)不同年齡人群進行分析。如:HbA2增高可見于-輕型地中海貧血。HbA2減低可見于缺鐵性貧血及其它Hb合成障礙性疾病。(四)免疫固定電泳
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