DB45T 2866-2024 靈芝菌種制備技術(shù)規(guī)程

45I 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 5 5 6A.1母種培養(yǎng)基 6A.2原種、栽培種培養(yǎng)基 6A.3檢驗培養(yǎng)基 6本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1靈芝菌種制備技術(shù)規(guī)程GB4806.7食品安全國家標準食品接觸用塑料材料及NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程4.1品種及菌種的選擇4.2菌種制備環(huán)境4.3設(shè)施設(shè)備25.1培養(yǎng)基5.2容器要求母種選用試管作為容器，規(guī)格為18mm×180mm或者20mm×200mm；組織分離或純化選用培養(yǎng)皿，規(guī)格直徑為90mm或60mm。5.3培養(yǎng)基分裝及滅菌5.3.1培養(yǎng)基試管分裝及滅菌分裝培養(yǎng)基至試管的1/5～1/4，用硅膠塞封口，頂端膠塞長40mm～50mm。每5支試管扎成一捆，用消毒過的牛皮紙包住膠塞一頭，用橡皮筋扎緊，膠塞一頭朝上放入滅菌鍋，在121.5℃~123℃(0.11養(yǎng)基凝固并冷卻后裝進無菌聚丙烯袋備用。5.3.2培養(yǎng)基滅菌及培養(yǎng)皿分裝培養(yǎng)基裝入300mL～500mL三角瓶刻度的1/2處，用硅膠塞封口，在121.5℃~123℃(0.11MPa～0.12培養(yǎng)皿內(nèi)，倒入培養(yǎng)基的量占培養(yǎng)皿高度的1/3。組織塊培養(yǎng)4d～5d，長出20mm左右的白色菌絲，挑取健壯、潔白、均勻、整齊的前端約3mm～4mm5.5母種要求及入庫5.5.1母種要求母種在25℃~30℃下培養(yǎng)，6d～8d長滿斜面，其它要求見表1。(3mm～5mm)×(3mm～5mm)無無3符合NY/T1742、NY/T1731的規(guī)定。母種檢驗完成后應及時入庫貯藏，庫房溫度為4℃~6℃,避光，適當通風，入庫貯藏時間不超過1年。超過1年的母種應進行出芝檢驗后再進行后繼原種培養(yǎng)容器采用500mL～750mL，瓶口直徑≤4cm的聚丙烯塑料瓶或玻璃瓶；栽培種采用(13cm~15cm)×(26cm～28cm)×(0.04cm～0.06cm)的聚丙烯塑料袋，聚丙烯塑料袋應符合GB4806.7的要求。培養(yǎng)基配方參見附錄A。闊葉木屑、棉籽殼、桑枝屑應于前一天預濕，麥麩、輕質(zhì)碳酸鈣、石灰等％～％，培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口4.5cm～5.5cm。瓶（袋）的棉塞培養(yǎng)基配制好后，在4h內(nèi)進行裝袋并高壓滅菌，在0.14MPa～0.15MPa（溫度為126℃~127℃)下滅菌2.5h。每瓶原種接40～50袋栽培種，菌種塊要緊接種后，原種、栽培種放置培養(yǎng)室進行培養(yǎng)。培養(yǎng)室環(huán)境要求黑暗、通風，溫度為25℃~27℃,空氣相對濕度為6070％。每隔2d～3d檢查并清除污染的菌種。445mm～55mm生長均勻、無抑制拮抗線、緊貼瓶壁、無干縮，有少無無45mm～55mm菌絲體潔白、色澤一致、均勻健壯、舒展、濃密、菌落邊緣整培養(yǎng)基不干縮，無積水、顏色均勻、無暗斑、無色素、無高溫抑制線、無無符合NY/T1742、NY/T173115℃,避光，適當通風。入庫貯藏時間不超過50d，超過50d應進行出菇檢驗后再進行后繼生產(chǎn)。湯培養(yǎng)基中，在28℃~30℃條件下振蕩培養(yǎng)1d～2d，觀察培養(yǎng)液是否混濁，若混濁則判定有細菌污56A.1母種培養(yǎng)基A.1.1PDA培養(yǎng)基去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH自然。A.1.2PDA綜合培養(yǎng)基A.1.3淀粉加富培養(yǎng)基去皮馬鈴薯200g，可溶性淀粉20g，蛋白胨2g，磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂0.5g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，pH自然。A.2原種、栽培種培養(yǎng)基用水應符合GB5749的規(guī)定。桑枝、棉籽殼2030闊葉木屑6070麥麩1520%,石灰12石膏12過磷酸鈣0.51含水量5862pH自然。A.3檢驗培