DB51T 3014-2023 家畜螨病診斷與防控技術(shù)規(guī)范　

DB51I 3 3 3 3 8 9 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的3家畜螨病診斷與防控技術(shù)規(guī)范GB/T36195-2018畜禽糞便無害化處理NY/T5030-2016無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則由綿羊癢螨（Psoroptesovis）寄生于家4.1疥螨病、癢螨病和足螨病的臨床癥狀4.1.1疥螨病44.1.2癢螨病4.1.3足螨病4.2疥螨病、癢螨病和足螨病的顯微鏡鏡檢4.2.1病料的采集疥螨病病料的采集癢螨病病料的采集足螨病病料的采集4.2.2顯微鏡鏡檢熱源法將4.2.1采集的病料放入平皿內(nèi)，將平皿放入25℃~37℃的恒溫箱中0.5h～1h后，將平皿置于顯直接涂片法濃集法當(dāng)螨蟲數(shù)量較少或病料采自死亡家畜時，可采用濃集法收集螨蟲鏡檢。將4.2.4.2.3鏡檢結(jié)果判定病料中鏡檢到疥螨蟲體或蟲卵（見附錄D.1），判定病料中鏡檢到綿羊癢螨蟲體或蟲卵（見附錄D.2），判定病料中鏡檢到足螨蟲體或蟲卵（見附錄D.3），判定為顯微鏡5試劑2M硫酸（2MH2SO4）、LB液體培養(yǎng)基辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗：HRP-羊抗牛IgG，用于檢測牛血清；HRP-兔抗羊測羊血清；HRP-羊抗豬IgG，用于檢測豬血清；HRP-羊抗兔Ig陽性血清和陰性血清對照樣品重組抗原制備4.3.2操作步驟抗原包被用碳酸鹽緩沖液將抗原稀釋到最佳濃度（rSar-Eno14.5μg/mL，rPsoc2746.0μg/mL）后加入96孔聚乙烯板，每孔100μL，4℃包被過夜。次日，棄孔內(nèi)液體，每孔加入PBST緩沖液300μL，洗板3次，每加封閉液加血清樣品加酶標(biāo)二抗加底物顯色終止反應(yīng)6ELISA檢測結(jié)果判定以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀測定450nm的吸光值（OD450值），若陽性對照OD450值/陰性對照OD450值的比值大于2.1,則實驗結(jié)果成立。P為待檢血清孔OD450值，N為陰性對照孔OD450值，以P/N≥2.1判為陽性，4.4.1材料的準(zhǔn)備4.4.2試劑對照樣品和待檢樣品書方法提取疥螨蟲體的基因組DNA，從而獲得疥螨D試劑盒的說明書方法提取DNA，獲得的DNA立即進(jìn)行后續(xù)PCR擴(kuò)增或放入-20℃pmol/μL,引物序列5’-GTGTGGAACTGGTAGAGG-3’，5’-CAGATCAAGCAAAAAGAGTTAAG-3’），滅菌蒸餾水加至25.0μL。同時設(shè)置疥螨DNA的陽性對照組和設(shè)置滅菌蒸餾水的陰性對照組。擴(kuò)增條件如下：94°C預(yù)變性3min；94°C變性30s,54°C復(fù)性20s，72°C延伸20s，制板將1.6g瓊脂糖放入8mL1×TAE緩沖液中，加熱融化，待溫度降至56℃左右，加入GoldViewII核酸染料8μL，倒入預(yù)先放置好的制膠臺，插上梳子，厚加樣與電泳經(jīng)5V/cm電泳，電泳30min，于紫外凝膠成像儀或凝膠成像系統(tǒng)中觀察結(jié)果，并拍照在實驗結(jié)果成立的情況下，待檢樣品出現(xiàn)212bp的條帶，則判定為疥螨核酸陽性（見附錄F74.5綜合判定4.5.1疑似患病動物4.5.2確診患病動物5.1.1保持畜舍清潔干燥、通風(fēng)、透光、不擁擠。5.1.3螨病常發(fā)地區(qū)，定期對家畜采用本文件中“4診斷立即隔離治療，并使用外用殺蟲藥物對圈舍進(jìn)行殺螨5.1.4養(yǎng)殖場嚴(yán)格使用藥物進(jìn)行定期驅(qū)蟲?？蛇x用伊維菌素、多拉菌素等藥物，按藥物生產(chǎn)廠家5.1.5放牧家畜螨病的預(yù)防可在每年春、秋兩季選用氰戊菊酯、雙甲脒和二嗪農(nóng)等外用殺蟲藥物進(jìn)行藥浴或噴淋，按藥物生產(chǎn)廠家推薦的用量與用按藥物生產(chǎn)廠家推薦的用量與用法規(guī)范使用。對小型籠舍還可采用火焰噴燒進(jìn)行殺5.1.7肉用或乳用家畜使用殺螨藥物進(jìn)行預(yù)防時要嚴(yán)格注意其休藥期。5.1.8圈舍墊料、毛發(fā)等廢棄物進(jìn)行集中堆積發(fā)酵等方式殺滅螨蟲或蟲卵處理，具體按照GB/T5.2.1確診患螨病的動物可采用化學(xué)藥物進(jìn)行治療，藥物的選擇應(yīng)符合《中華人民共和國獸藥典》規(guī)5.2.2可選用伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素等進(jìn)行治療，按藥物生產(chǎn)廠家推薦的用量與用法規(guī)5.2.3可選用氰戊菊酯、雙甲脒和二嗪農(nóng)等外用殺蟲藥物進(jìn)行噴淋或藥浴治療，按藥物生產(chǎn)廠家推薦8現(xiàn)癥狀最明顯。病變部可形成堅硬的灰白色痂皮，故俗稱“A.3豬各種年齡和品種的豬均可感染，臨床癥狀主要表現(xiàn)為A.4兔皮膚病變始發(fā)于頭部、體側(cè)、軀干及頸部，后蔓延至肩部、9物體上摩擦，或用舌舔吮患部，皮膚損傷，脫毛，滲出液剝離；鄰近的皮膚亦迅速脫毛；乘馬及挽馬常發(fā)生于裝置鞍具、頸套、鞍褥(資料性)分類上屬于疥螨科(Sarcoptidae)的疥螨屬(Sarcoptes),為雌雄異體，蟲體可分為假頭和軀體角形鱗片、棒狀刺。蟲體腹面有4對粗短、呈圓錐形的足；前2對位于蟲體前1/3;后2對足伸向后方，短，從背面不能見到，位于蟲體后1/3(見圖D.1)。雄螨：蟲體大小為200微米~300微米×150微米~200微米，第1、2、4對足上有吸盤，第3對足上僅雌螨：蟲體大小為300微米~500微米×250微米~400微米。第1、2對足上有吸盤，第3、4對足上各有一根長剛毛；生殖孔(產(chǎn)卵孔)位于蟲體腹面中央，近末端有一陰道。圖D.1疥螨(左：成螨背面觀；右：成年雌螨腹面觀)分類上屬于癢螨科(Psoroptidae)的癢螨屬(Psoroptes)的螨蟲，其成螨蟲體大小500微米~900微米×200微米~520微米，肉眼可見，蟲體可分為假頭和軀體兩部份。假頭位于端有兩個大結(jié)節(jié)，上有長剛毛數(shù)根；腹面后部有兩個吸盤；生殖器居于第4基節(jié)之間。雄螨有性吸盤和尾突(見圖D.2)。雌螨：第1、2、4對足上有吸盤，第3對足上各有兩根長剛毛后端有縱裂的陰道；軀體末端為肛門(見圖D.2)。圖D.2綿羊癢螨(左：雄螨腹面觀；右：雌螨背面觀)D.3足螨(Chorioptes)分類上屬于癢螨科(Psoroptidae)的足螨屬(Chorioptes)的螨蟲，其成螨體長300微米~500微米，蟲體分為假頭和軀體兩個部分。假頭由背面的1對螯肢、1對須肢和1個口下板組成。蟲體體表有細(xì)紋；口器較短，呈錐形；足長，跗節(jié)吸盤的柄短而不分節(jié)；肛門位于蟲體末端(見圖D.3)。4對足之間。體末端有2個結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)的前方腹面有1對環(huán)狀性圖D.3足螨(雌螨)背面觀ELISA檢測試劑配制和重組抗原制備E.1.2PBST緩沖液（0.01MPBS+0.05%Tween-2KH2PO40.2g，Na2HPO4·12H2O2.Trypton5g，YeastExtract10g，NaCl5g，5’-CGGATCCATGTCCATCAAAAAGATCTACGC-3’；R：5’-CGAGCTCTCAAACTGGGTGGCGGA-3’），將目的片段連接），E.2.2癢螨絲氨酸蛋白酶抑制劑重組抗原（rPsoc27）的制備GCTCATGTTGGTCAACATC-3’誘導(dǎo)8h后，采用SDS電泳驗證表達(dá)情況（rPsoc27約75kDa）。進(jìn)一步將正確表達(dá)的菌株擴(kuò)大培），(規(guī)范性)PCR檢測試劑配制與PCR擴(kuò)增結(jié)果參考F.1PCR檢測試劑配制F.2疥螨病的PCR檢測結(jié)果判定參考圖注：M.DL2000標(biāo)準(zhǔn)分子量(TakaRa);1.標(biāo)準(zhǔn)陽性擴(kuò)增結(jié)果；2.陰性對照GTGTGGAACTGGTAGAGGAACTGGCTGAACTATTTATCCTCCTTTATCTAGAATCACTTATCATTCAAATAACAATTGTAAGATTACATATTGCTGGAATTTCTTCTATTTTAAGTTCTATCAATTTTATTGTAACTATTTATAATATAAAATAAGATGATCAAACTTAACTCTTTTTGCTT[1]郝桂英,楊光友,賴松家,等.兔螨凈等3種殺蟲藥物對離體兔癢螨的殺滅試驗.中國獸醫(yī)雜志,[3]古小彬,楊光友,郝桂英.三種殺螨藥對離體兔疥螨的殺滅試驗.黑龍江畜牧獸[4]賈小勇,楊光友,趙小平,等.水牛癢螨和兔癢螨的形態(tài)學(xué)觀察.寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)[5]古小彬,楊光友,賴松家,等.不同溫度和pH對離體兔疥螨存活力的影響.中國獸醫(yī)雜志[8]古小彬,張曉謙,楊光友,等.11株螨蟲分離株的ITS-