DB51T 3065-2023 克氏原螯蝦斑綜合征診斷和防控技術(shù)規(guī)程

CCSB52DB512023-06-19發(fā)布I 4 4 4 5本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。1克氏原螯蝦白斑綜合征診斷和防控技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了由白斑綜合征病毒(whitespotsyndromevirus，WSSV)引起的克氏原螯蝦本文件適用于克氏原螯蝦白斑綜合征的診斷以及四川行政區(qū)域內(nèi)稻田和池塘養(yǎng)殖克氏原螯蝦白斑GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格GB/T28630.2-2012白斑綜合NY/T5361無公害農(nóng)產(chǎn)品淡水養(yǎng)殖產(chǎn)地環(huán)境條件克氏原螯蝦白斑綜合征whitespotsyndromeofProtocrayfishclarkii4.1試劑和材料4.1.1試劑檢驗(yàn)中所需試劑的配制按照GB/T28630.2-2012和SC/T7014.1.2水2用來從第一步PCR擴(kuò)增的1447bp產(chǎn)物中再擴(kuò)增出941bp的產(chǎn)擴(kuò)增十足類動(dòng)物DNA中848bp的片段產(chǎn)物，-4.2設(shè)備與器械設(shè)備和器械應(yīng)當(dāng)符合GB/T28630.2患病克氏原螯蝦主要臨床癥狀為體色變暗、攝食4.3.2剖檢4.4實(shí)驗(yàn)室樣品采集4.5.1樣品準(zhǔn)備制的75%酒精中5min，無菌水充分清洗兩次后，方4.5.3微量分光光度計(jì)測(cè)定核酸濃度和純度4.5.3.1在上樣孔處點(diǎn)入1.5μL無菌水，點(diǎn)樣時(shí)不要有氣泡殘留，對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。使用內(nèi)參引物F3和R3，按照GB/T28630.2-2012中6.4的規(guī)定進(jìn)行樣品提取質(zhì)量及反應(yīng)34.8.1瓊脂糖凝膠制作4.8.3PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化、測(cè)序及序列比對(duì)4.8.3.2按每0.1g瓊脂糖凝膠加0.1mL酚，將酚加入4.8.3.1含有目的條帶膠塊的離心管中，漩渦震蕩4.8.3.337℃水浴將凍結(jié)的凝膠融化后，在漩渦震蕩儀上震蕩1min～2min；14000r/min離心5min，取上層水相轉(zhuǎn)入另一個(gè)離心管中，加入等體積的酚-三氯甲烷-異戊醇(25:24:1)，混勻，12000r/min4.8.3.614000r/min離心10m4.9.1提取質(zhì)量及體系監(jiān)控DNA提取質(zhì)量和體系監(jiān)控中，所有樣品在848bp處應(yīng)有一條特定4.9.2各對(duì)照組空白對(duì)照無任何條帶；第二步PCR，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，陽性對(duì)照在941bp處有條帶，陰性4.9.3被檢測(cè)樣品后在1447bp處無條帶且第二步PCR后在941bp處電泳條帶的亮暗表示PCR產(chǎn)物數(shù)量的多少，但并不對(duì)4.10綜合判定4——臨床癥狀與4.3相符；——套氏PCR擴(kuò)增結(jié)果與4.9相符；5.1養(yǎng)殖環(huán)境前，應(yīng)用1%～3%氯化鈉對(duì)苗種進(jìn)行浸泡，浸泡時(shí)間為7min～10mi稻田每畝放養(yǎng)規(guī)格為150尾/kg～200尾/kg的苗種30kg～40kg，池塘約5.4免疫增強(qiáng)劑防控每年4月至7月，在飼料中添加β-葡聚糖、殼聚糖、多種維生素等免疫增強(qiáng)劑，每間隔15天連續(xù)投5.5微生態(tài)防控在疾病流行季節(jié)或發(fā)病時(shí)，用聚維酮碘對(duì)養(yǎng)殖水體潑灑消毒，隔天1次，連續(xù)潑在疾病流行季節(jié)或發(fā)病時(shí)，按飼料質(zhì)量1.5%等比添加板藍(lán)根、大蒜素，連續(xù)投喂75(資料性)白斑綜合征病毒基因參考序列1ACTACTAACTTCAGCCTATCTAGTAAAAC61CTTCCCTGCCGCCCTCACCTGCGCTTCTCACCTCATGCTTTCTTCCATGGATTCCCATAC121AAAGTCATCTTTCATGGACAACATCAAA181GAACATTGAACGATTTGAGAAATTCTTGGGAAGATATGGGGACGAATACGCCATGTC241CAAGCAAAATTGTAACTGccCcTTCCATCTCCACCACACTTTTACTC301GCATCTGGTATCCTCTTTCGCATTCGCCCGCCCAGAAGTCTC361CACACCCTATCAGGCCAACAAGCTTATTAGTGACAAACATTACGTGATGAACATGTCCAA421GATCGATTCTAGAGTAACAGGATCTTCCCTCCTTAAGAAGGTTAGCGAATGGACTGAAAT481GAGAATGAACTCCAACTTTAATGGAACATTTGAACCATCAAGACTCGCCC541TGGCATGACAACGGCAGGAGTCAACCTCGACGTTATTGTCAAACCAAATAATGCAAGAAG601TGTACTAGGAATATTGGAATGTCATCGCCAGCACGTGTGCACCGCCGACGC661TGTCGCTTCAGCCATGCCAGCCGTCTTCCAGGCAACCGATGGAAACGGTAACGAATCTGA721ACTGATCCAGAATGCTCTGCCAAGGAACAGATACATCCAAAAGAG781AACTGTCGTGTTTGCTAATGTTTTGGAACAACTTATCGCCGATCT841GAACGAACTGGCCGGCACCATCGCTGAATCTGTACCAGAAAGCGTATATGAA901GGAAATGATTGATAGACTAGGCTCTGACGACCTCTTCAAATCTAATAATAATGGAGGAGT961AGAATCAATGGATTATGAAGATAGCGAAACAACATCCAACAATG1021AGAAGCCATGAAGAATGCCGTCTATCACACACTAATTTCCGGCAAGGCAGCTCGCC1081AAATGTACCATTCGCCTCATGCGCCAGCGGCCCTCTCGCCTTTGATTTCCTTCTGTCAAA1141GGGAGATACATTCGAAGAAAAGAACGCGAACAAGGTGC1201CTATTCTTCCTCTTCTAACACTACTCTTCGTAAGCATTTGGCTCGAGTTTTCGAAGC1261CTCTAAGCAA