基于深度測(cè)序技術(shù)的非侵入性胎兒染色體非整倍體檢測(cè)

中南大學(xué)湘雅醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心

湖南家輝遺傳?？崎T診部

鄔玲仟

染色體非整倍體定義：體細(xì)胞染色體數(shù)目增加或減少一條或數(shù)條的個(gè)體類型：a.單體型：2n-1；X，21，22號(hào)丟失常見。b.三體型：2n+1；常染色體13、18、21三體常見，性染色體三體型有XXX、XXY、XYY。c.多體型：僅見于性染色體；如48，XXXX49，XXXYY。21三體綜合征唐氏綜合征（Down’sSyndrome，DS）先天愚型足月新生兒最常見的染色體疾病，發(fā)病率1/700至今沒有根治方法我國(guó)每年約2000萬新生兒,每年約有26600個(gè)DS兒出生。我國(guó)有大約60萬以上的DS患者。特殊面容：面部扁平、鼻梁低平、眼距寬、外眥上斜、內(nèi)眥贅皮、張口吐舌等智力障礙：患者智商（IQ）通常為30～60。生長(zhǎng)發(fā)育遲緩和肌張力減退：出生體重偏低，肌張力低下，身材矮小，短頸，頸背皮膚松垂，手短而寬、通貫掌、小指彎曲等。至少1/3的患者伴發(fā)先天性心臟病。十二指腸閉鎖和氣管食管瘺等伴發(fā)癥也較其它疾病常見?；及籽〉娘L(fēng)險(xiǎn)為正常人群的15倍。臨床表現(xiàn)18三體綜合征18三體綜合征是次于先天愚型的第二種常見染色體三體征。新生兒發(fā)生率約為1/7500。主要臨床表現(xiàn):智力障礙、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、胸骨短、嚴(yán)重的心臟畸形以及肌張力亢進(jìn)等。顱面部的畸形包括小頜畸形、枕部突出、小耳以及低位耳等。雙手呈特征性的握拳狀，搖椅足。13三體綜合征發(fā)病率為1/20000～25000。主要臨床表現(xiàn)：嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形，內(nèi)臟畸形，顱面部的畸形，手足畸形等；13三體綜合征21三體綜合征二級(jí)預(yù)防模式早孕期篩查：NT+PAPP-A中孕期篩查：二聯(lián)、三聯(lián)或四聯(lián)得到最終的風(fēng)險(xiǎn)值產(chǎn)前診斷母親血清標(biāo)記物和超聲篩查的可信度結(jié)合母親年齡的三聯(lián)篩查，唐氏綜合癥檢出率:~65%，假陽性率:4.5-5.0%增加抑制素A，可以將檢出率增加到75%結(jié)合母親年齡的NT測(cè)量，21三體檢出率：77%，假陽性率：5%.結(jié)合生化分析和頸透明度的唐氏綜合癥的檢測(cè)檢出率可以達(dá)到89%，假陽性率：5%.WapnerR,etal.(2003)First-trimesterscreeningfortrisomies21and18.NEnglJMed349:1405–1413血清學(xué)篩查存在的問題染色體綜合征侵入性產(chǎn)前診斷侵入性產(chǎn)前診斷的利與弊47,XY,+21利：目前金標(biāo)準(zhǔn)弊：a）一定的流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)：1%b）報(bào)告周期長(zhǎng)：1個(gè)月c）孕婦和家屬承受較大思想壓力

主要參考文獻(xiàn)：TaborA,etal.RCTofamniocentesisin4606lowriskwomen.Lancet1986;1:1287-93全國(guó)婦幼衛(wèi)生檢測(cè)辦公室的調(diào)查顯示2007-2009年全國(guó)產(chǎn)篩4097801人，21三體高風(fēng)險(xiǎn)176130人，產(chǎn)前診斷的93504人，確診為21三體胎兒6679例。產(chǎn)前診斷服務(wù)量不能滿足需求基于FISH的產(chǎn)前診斷優(yōu)點(diǎn)：所需樣本量少，檢測(cè)周期短（24h-48h）。缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴，通量小。基于定量PCR的產(chǎn)前診斷優(yōu)點(diǎn)：①所需樣本量少，檢測(cè)周期短（24h）。②價(jià)格便宜，通量大。缺點(diǎn)：對(duì)于嵌合型21三體，定理PCR可能會(huì)出現(xiàn)假陰性，樣本中母血的污染也會(huì)影響結(jié)果的判斷。目前快速產(chǎn)前診斷方法的利弊主要參考文獻(xiàn)：Fetalcf-DNAdetectedviaYchromosome。LoYMetal.,Lancet1997母體血漿DNA的存在形式分娩后母體cffDNA快速降解Loetal.AmJHumGenet1998;62:768cffDNA半衰期16.3min，2h后檢測(cè)不到VS

母血胎兒細(xì)胞持續(xù)存在數(shù)年血漿DNA的高母體DNA背景血漿母體DNA母體DNA高背景帶來的檢測(cè)難度血漿101121染色體3體帶來的微量DNA變化采集母體血漿提取血漿DNA制備測(cè)序文庫在第二代測(cè)序儀上測(cè)序測(cè)得的序列與人的參考基因組比對(duì)并作統(tǒng)計(jì)分析抽取外周血分離血漿文庫制備生物信息分析新一代測(cè)序研究結(jié)果檢測(cè)結(jié)果總結(jié)假陰性：0/28=0%假陽性：0/373=0%47,XY,+21[26]/46,XY[24]：Z=4.7746,XX,der(21;21)+21:Z=9.59T21檢測(cè)結(jié)果假陰性：0/3=0%假陽性：0/398=0%假陰性：0/12=0%假陽性：0/389=0%T13檢測(cè)結(jié)果T18檢測(cè)結(jié)果X/Y染色體檢測(cè)結(jié)果非侵入性，避免流產(chǎn)，