第八章-凝集反應(yīng)

第八章凝集反應(yīng)第一節(jié)凝集反應(yīng)的特點(diǎn)凝集反應(yīng)的發(fā)生分兩個(gè)階段：①抗原抗體的特異結(jié)合；②出現(xiàn)可見(jiàn)的顆粒凝聚。通常，細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆?？乖趹乙褐袔踟?fù)電荷，周?chē)粚优c之牢固結(jié)合的正離子，外面又排列一層松散的負(fù)離子層，構(gòu)成一個(gè)雙層離子云。在松散層內(nèi)界和外界之間的電位差形成Ζ電位。溶液中的離子強(qiáng)度愈大，Ζ電位也就愈厚。Ζ電位使顆粒相互排斥。當(dāng)特異抗體與相應(yīng)抗原顆?；パa(bǔ)結(jié)合時(shí)，抗體的交聯(lián)作用克服了抗原顆粒表面的Ζ電位，而使顆粒聚集在一起。但當(dāng)抗體分子太少，不足以克服相當(dāng)厚度的離子云層時(shí)，則不能使顆粒聚集。因此在凝集反應(yīng)中，IgM類(lèi)抗體的作用比IgG類(lèi)抗體要大數(shù)百倍，所以IgG類(lèi)抗體常出現(xiàn)不完全反應(yīng)，即不可見(jiàn)的抗原抗體反應(yīng)。這種抗體有時(shí)又稱(chēng)不完全抗體。不完全的含義是，可與抗原牢固結(jié)合，但因其分子量較小，不能起到由橋聯(lián)作用而形成的可見(jiàn)凝集現(xiàn)象。在試驗(yàn)過(guò)程中，為促使凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)，可采取以下措施：增加蛋白質(zhì)或電解質(zhì)，降低溶液中離子強(qiáng)度以縮短顆粒間的距離；增加試液的粘滯度，如加入右旋糖酐或葡聚糖等；用胰酶或神經(jīng)氨酸酶處理，改變細(xì)胞的表面化學(xué)結(jié)構(gòu)；以離心方法克服顆粒間的排斥力等。凝集試驗(yàn)是一個(gè)定性的檢測(cè)方法，即根據(jù)凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)與否判定結(jié)果陽(yáng)性或陰性；也可以進(jìn)行半定量檢測(cè)，即將標(biāo)本作一系列對(duì)倍稀釋后進(jìn)行反應(yīng)，以出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋度作為滴度。由于凝集反應(yīng)方法簡(jiǎn)便，敏感度較高，因而在臨床檢驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用。在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)兩大類(lèi)。自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)和抗球蛋白參與的凝集試驗(yàn)是兩種特殊的凝集反應(yīng)。這些方法在以下幾節(jié)中作詳細(xì)介紹。第二節(jié)直接凝集反應(yīng)細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆?？乖?，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱(chēng)為直接凝集反應(yīng)(directagglutination)。凝集反應(yīng)中的抗原稱(chēng)為凝集原（agglutinogen），抗體稱(chēng)為凝集素（agglutinin）。常用的凝集試驗(yàn)有玻片法和試管法兩種。（一）玻片凝集試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn)為定性試驗(yàn)方法，一般用已知抗體作為診斷血清，與受檢顆?？乖缇夯蚣t細(xì)胞懸液各加一滴在玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)顆粒凝集的為陽(yáng)性反應(yīng)。此法簡(jiǎn)便、快速，適用于從病人標(biāo)本中分離得到的菌種的診斷或分型。玻片法還用于紅細(xì)胞ABO血型的鑒定。（二）試管凝集試驗(yàn)試管凝集試驗(yàn)為半定量試驗(yàn)方法，在微生物學(xué)檢驗(yàn)中常用已知細(xì)菌作為抗原液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常以產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋度作為血清中抗體的效價(jià)，亦稱(chēng)為滴度。在試驗(yàn)中，由于電解質(zhì)濃度和pH不適當(dāng)?shù)仍颍梢鹂乖姆翘禺愋阅?，出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)，因此必須設(shè)不加抗體的稀釋液作對(duì)照組。臨床上常用的直接試管凝集試驗(yàn)為肥達(dá)試驗(yàn)（Widaltest）和外斐試驗(yàn)（Weil-Felixtest）。在輸血時(shí)也常用于受體和供體兩者的紅細(xì)胞和血清的交互配血試驗(yàn)。第三節(jié)間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱(chēng)間接凝集反應(yīng)（indirectagglutination）或被動(dòng)凝集反應(yīng)（passiveagglutination）。這種反應(yīng)適用于各種抗體和可溶性抗原的檢測(cè)，其敏感度高于沉淀反應(yīng)，因此被廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。一、間接凝集反應(yīng)的類(lèi)型根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應(yīng)的方式，間接凝集反應(yīng)可分為四類(lèi)：1.（正向）間接凝集反應(yīng)用抗原致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體（圖8-1）。圖8-1（正向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖2.反向間接凝集反應(yīng)用特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原（圖8-2）。圖8-2反向間接凝集反應(yīng)原理示意圖3.間接凝集抑制反應(yīng)診斷試劑為抗原致敏的顆粒載體及相應(yīng)的抗體，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。檢測(cè)方法為將標(biāo)本先與抗體試劑作用，然后再加入致敏的載體，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，說(shuō)明標(biāo)本中不存在相同抗原，抗體試劑未被結(jié)合，因此仍與載體上的抗原起作用。如標(biāo)本中存在相同抗原，則凝