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PAGE4-課時(shí)作業(yè)37微生物的培育與應(yīng)用1.(15分)(臨川模擬)牛奶中富含蛋白質(zhì),長(zhǎng)期飲用有助于增加體質(zhì),但牛奶同時(shí)也是多種疾病的傳播載體。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)是每毫升牛奶中細(xì)菌數(shù)小于30000個(gè)。以下是牛奶消毒及細(xì)菌檢測(cè)試驗(yàn)。分析回答:(1)圖中步驟①稱為巴氏消毒法。步驟②是梯度稀釋。(2)培育基中的蛋白胨可以為微生物供應(yīng)碳源、氮源和維生素。進(jìn)行步驟③操作時(shí),應(yīng)選用下列中的哪種工具?B。為了避開(kāi)雜菌污染,此步驟應(yīng)在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行。(3)為了推斷牛肉膏蛋白胨培育基制作是否合格,應(yīng)當(dāng)將一個(gè)未接種的培育基與接種后的培育基共同培育。解析:(1)題圖中步驟①對(duì)牛奶進(jìn)行消毒采納了80℃、15min恒溫水浴加熱,這種消毒法稱為巴氏消毒法。依據(jù)題圖供應(yīng)的信息可知,步驟②是系列稀釋或梯度稀釋。(2)微生物的養(yǎng)分物質(zhì)主要有碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等,有的微生物還須要特別的養(yǎng)分物質(zhì),如生長(zhǎng)因子和維生素等,蛋白胨主要為微生物供應(yīng)碳源、氮源和維生素。進(jìn)行步驟③操作后需培育計(jì)數(shù),因此該接種操作的方法是稀釋涂布平板法,應(yīng)選用B(涂布器)作為接種工具。為了避開(kāi)雜菌污染,步驟③2.(15分)(深圳模擬)一種廣泛運(yùn)用的除草劑(含氮有機(jī)物)在土壤中不易被降解,長(zhǎng)期運(yùn)用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤,可按下面程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌(已知該除草劑在水中溶解度低,含肯定量該除草劑的培育基不透亮)。(1)制備土壤浸出液時(shí),為避開(kāi)菌體濃度過(guò)高,需將浸出液進(jìn)行稀釋處理?,F(xiàn)有1L土壤浸出液,用無(wú)菌吸管吸取1mL至盛有9mL無(wú)菌水的試管中,依次稀釋至103倍。各取0.1mL已稀釋103倍的水樣分別接種到三個(gè)培育基上培育,記錄的菌落數(shù)分別為55、56、57,則每升原土壤浸出液中菌體數(shù)為5.6×108。(2)要從長(zhǎng)期運(yùn)用該除草劑的土壤中分別出目的菌,上述培育基的特點(diǎn)是在無(wú)氮培育基中添加了該除草劑。(3)接種技術(shù)的核心是防止雜菌污染,保證培育物的純度。接種時(shí),連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基的表面,培育時(shí),只有很少菌落出現(xiàn),大部分細(xì)菌在此培育基上不能生長(zhǎng)的主要緣由是培育基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。(4)在培育基上形成的菌落中,無(wú)透亮圈菌落利用的氮源主要是氮?dú)?,有透亮圈菌落利用的氮源主要是該除草劑,?jù)此可篩選出目的菌。試驗(yàn)結(jié)果如圖顯示的A~E五種菌株中,E是最志向菌株。解析:(1)依據(jù)稀釋涂布平板法對(duì)微生物計(jì)數(shù)的計(jì)算公式:每毫升原土壤浸出液中菌體數(shù)=(C÷V)×M=56÷0.1×103=5.6×105,則每升原土壤浸出液中菌體數(shù)為5.6×108。(2)該除草劑是含氮元素的有機(jī)物,可以為微生物供應(yīng)氮源,因此選育能降解該除草劑的細(xì)菌應(yīng)運(yùn)用以該除草劑為唯一氮源(無(wú)氮培育基中添加了該除草劑)的培育基作為選擇培育基。(3)微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌污染,保證培育物的純度。平板劃線法接種是通過(guò)連續(xù)劃線將微生物稀釋分散到培育基的表面,以獲得單細(xì)胞菌落。由于培育基以該除草劑為唯一氮源,因此不能降解該除草劑的微生物將不能生長(zhǎng)。(4)有些自生固氮微生物可以利用大氣中的氮?dú)庾鳛榈?,因此可以在該培育基上生長(zhǎng),但不能降解該除草劑,因此菌落四周不出現(xiàn)透亮圈。四周有透亮圈的菌落能夠降解該除草劑,并且降解該除草劑的實(shí)力越強(qiáng),菌落四周出現(xiàn)的透亮圈就越大。3.(15分)大腸桿菌是與我們?nèi)粘I盥?lián)系特別親密的細(xì)菌,請(qǐng)回答有關(guān)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的問(wèn)題:(1)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的含量時(shí),通常將樣品進(jìn)行一系列的梯度稀釋,將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培育基的表面進(jìn)行培育,然后記錄菌落數(shù)量,這種方法稱為稀釋涂布平板法。推斷下面所示的4個(gè)菌落分布圖中,不行能是用該方法得到的是D。(2)用上述方法統(tǒng)計(jì)樣本中菌落數(shù)時(shí)是否須要設(shè)置比照組?須要(填“須要”或“不須要”),其緣由是須要推斷培育基是否被雜菌污染(滅菌是否合格),對(duì)于固體培育基應(yīng)采納的檢測(cè)方法是將未接種的培育基在相宜的溫度下放置一段時(shí)間,視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生。(3)在微生物培育操作過(guò)程中,為防止雜菌污染,需對(duì)培育基和培育器皿進(jìn)行滅菌(填“消毒”或“滅菌”)處理;操作者的雙手須要進(jìn)行清洗和消毒;靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅,其緣由是紫外線能使其內(nèi)蛋白質(zhì)變性,還能破壞它的DNA的結(jié)構(gòu)。(4)檢測(cè)大腸桿菌試驗(yàn)結(jié)束后,運(yùn)用過(guò)的培育基及其培育物必需經(jīng)過(guò)滅菌處理才能丟棄,以防止培育物的擴(kuò)散。解析:(1)D中菌落的分布狀況為平板劃線法所得。(2)為推斷培育基滅菌是否合格,本試驗(yàn)須要設(shè)置比照。要推斷固體培育基是否被污染,可將未接種的培育基在相宜的溫度下放置一段時(shí)間,若發(fā)覺(jué)有菌落產(chǎn)生,則說(shuō)明培育基已被污染。(3)消毒是指運(yùn)用較溫柔的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指運(yùn)用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物,包括芽孢和孢子。對(duì)培育基和培育器皿進(jìn)行滅菌處理,操作者的雙手須要進(jìn)行清洗和用酒精消毒。(4)為防止培育物的擴(kuò)散,對(duì)于運(yùn)用過(guò)的培育基及其培育物必需經(jīng)過(guò)滅菌處理才能丟棄。4.(15分)(桂林調(diào)研)有機(jī)磷農(nóng)藥是用于防治植物病蟲(chóng)害的含磷有機(jī)化合物,廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,有時(shí)會(huì)造成瓜果蔬菜等食品農(nóng)藥殘留超標(biāo),不少品種對(duì)人、畜的毒性很強(qiáng),人誤食后如不剛好醫(yī)治就會(huì)危及生命,某班同學(xué)欲從土壤中分別高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)為了獲得能降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物菌種,可在被有機(jī)磷農(nóng)藥污染的土壤中取樣,并在含有碳源、氮源及水和無(wú)機(jī)鹽等的選擇培育基上添加有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行選擇培育。(2)將獲得的3種待選微生物菌種甲、乙、丙分別接種在1L含20mg有機(jī)磷農(nóng)藥的相同培育液中培育(培育液中其他養(yǎng)分物質(zhì)充裕、條件相宜),視察試驗(yàn)起先到微生物停止生長(zhǎng)所用的時(shí)間,甲、乙、丙分別為32小時(shí)、45小時(shí)、16小時(shí),則應(yīng)選擇微生物丙(填“甲”“乙”或“丙”)作為菌種進(jìn)行后續(xù)培育,理由是微生物丙分解有機(jī)磷農(nóng)藥的實(shí)力比甲、乙強(qiáng)。(3)制備固體培育基的基本步驟是計(jì)算→稱量→溶化→分裝→加棉塞→包扎→高壓蒸汽滅菌→倒平板。(4)若要測(cè)定培育液中選定菌種的菌體數(shù),既可在顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板干脆計(jì)數(shù),也可選用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目。解析:(1)微生物生長(zhǎng)所須要的養(yǎng)分一般包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源。因篩選能降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物,故培育基中需添加適量的有機(jī)磷農(nóng)藥。
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