BJS 202413 食品中大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚的測(cè)定

食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法BJS202413四氫大麻酚的測(cè)定2024-12-22發(fā)布國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布1BJS202413四氫大麻酚的測(cè)定1范圍本方法描述了食品中大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。大麻酚的測(cè)定。2原理試樣中添加同位素內(nèi)標(biāo),用乙腈提取,經(jīng)固相萃取柱凈化,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè),多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè),以保留時(shí)間和定性離子的豐度比定性,以內(nèi)標(biāo)法定量。3試劑和材料除另有規(guī)定外,所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1試劑3.1.1甲醇(CH4O):色譜純。3.1.2乙腈(C2H3N):色譜純。3.1.3乙酸銨(C2H7NO2):色譜純。3.1.4氯化鈉(NaCl)。3.2試劑配制3.2.1乙酸銨溶液(5mmol/L):稱取0.385g乙酸銨(3.1.3),用水溶解并稀釋至1000mL。3.2.25%甲醇溶液:量取5mL甲醇(3.1.1),加水稀釋至100mL。3.3標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1大麻酚(C21H26O2,CAS號(hào):521-35-7):純度≥98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品,相關(guān)信息見附錄A。3.3.2大麻二酚(C21H30O2,CAS號(hào):13956-29-1):純度≥98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。3.3.3四氫大麻酚(C21H30O2,CAS號(hào):1972-08-3):純度≥98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。3.3.4大麻酚-D3(C21H23D3O2,CAS號(hào):1435934-54-5):純度≥98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。3.3.5大麻二酚-D3(C21H27D3O2,CAS號(hào):1435783-16-6):純度≥98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。2BJS2024133.3.6四氫大麻酚-D3(C21H27D3O2,CAS號(hào):81586-39-2):純度≥98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)品。3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液分別稱取大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚標(biāo)準(zhǔn)品(3.3)各約10mg(精確至0.0001g),用乙腈(3.1.2)溶解,轉(zhuǎn)移至不同的10mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)分別定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為1000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,并轉(zhuǎn)移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個(gè)月。3.4.2內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液分別稱取大麻酚-D3、大麻二酚-D3、四氫大麻酚-D3標(biāo)準(zhǔn)品(3.3)5mg(精確至0.0001g),用乙腈(3.1.2)溶解,轉(zhuǎn)移至不同的10mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)分別定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為500μg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液,并轉(zhuǎn)移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個(gè)月。3.4.3混合標(biāo)準(zhǔn)中間液分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(3.4.1)1mL,置于同一100mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液,并轉(zhuǎn)移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個(gè)月。3.4.4混合內(nèi)標(biāo)中間液分別準(zhǔn)確移取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液(3.4.2)1mL,置于同一50mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為10μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)中間液,并轉(zhuǎn)移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個(gè)月。3.4.5工作溶液3.4.5.1混合標(biāo)準(zhǔn)工作液A:準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.4.3)1mL,置于5mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為2μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液A,并轉(zhuǎn)移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期1個(gè)月。3.4.5.2混合標(biāo)準(zhǔn)工作液B:準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液A(3.4.5.1)1mL,置于20mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為0.1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液B?，F(xiàn)用現(xiàn)配。3.4.5.3混合內(nèi)標(biāo)工作液(1μg/mL):準(zhǔn)確移取混合內(nèi)標(biāo)中間液(3.4.4)1mL,置于10mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為1μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作液,并轉(zhuǎn)移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期1個(gè)月。3.4.6系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別精密移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液B(3.4.5.2)50μL、100μL,混合標(biāo)準(zhǔn)工作液A(3.4.5.1)25μL、50μL、100μL,混合內(nèi)標(biāo)工作液(3.4.5.3)20μL,置于一組1mL的棕色容量瓶中,分別用甲醇定容至刻度,搖勻,制得質(zhì)量濃度依次為5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL且內(nèi)標(biāo)濃度均為20ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,或依需要配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。3.5材料3.5.1基質(zhì)增強(qiáng)脂肪去除固相萃取柱(300mg/3mL)或其他等效柱。3BJS2024133.5.2官能化聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取柱(200mg/6mL)或其他等效柱。3.5.3聚四氟乙烯濾膜:0.22μm。4儀器和設(shè)備4.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配電噴霧離子源。4.2天平:感量分別為0.01g和0.00001g。4.3渦旋混合器:轉(zhuǎn)速應(yīng)不低于1500r/min。4.4冷凍離心機(jī):轉(zhuǎn)速應(yīng)不低于10000r/min,可0℃~4℃控溫。4.5固相萃取裝置。4.6氮吹儀。4.7勻漿機(jī)。4.8組織搗碎機(jī)。4.9超聲儀:≥40KHz。5分析步驟5.1試樣制備和保存5.1.1液體試樣和粉狀固體試樣(食用植物油、液體飲料、固體飲料等)取多個(gè)包裝試樣,充分搖勻(含二氧化碳的試樣,超聲除去氣泡后搖勻),并在一個(gè)容器中攪拌均勻,裝入潔凈容器中密封并標(biāo)記,于0℃~4℃避光保存。5.1.2糖果試樣取多個(gè)包裝試樣,于—18℃以下冷凍過(guò)夜,取出后立即用組織搗碎機(jī)搗碎,攪拌均勻(膠基糖果樣品需剪小塊后置于組織搗碎機(jī)搗碎均勻),裝入潔凈容器中密封并標(biāo)記,于0℃~4℃避光保存。5.1.3巧克力試樣取多個(gè)包裝的試樣,50℃~60℃加熱熔融后,用勻漿機(jī)趁熱充分?jǐn)嚢杈鶆?裝入潔凈容器中密封并標(biāo)記,于0℃~4℃避光保存。5.1.4其他半固體或固體試樣取多個(gè)包裝試樣,用組織搗碎機(jī)搗碎,攪拌均勻,裝入潔凈容器中密封并標(biāo)記,于0℃~4℃避光保存。5.2樣品前處理5.2.1提取5.2.1.1食用植物油稱取試樣1g(精確至0.01g)于10mL聚丙烯離心管中,加入40μL混合內(nèi)標(biāo)工作液(3.4.5.3),再加入5mL乙腈(3.1.2),渦旋混勻1min,常溫條件下超聲提取10min,于0℃~4℃條件下10000r/min離心5min,上清液轉(zhuǎn)移至另一10mL聚丙烯離心管中,殘?jiān)性偌尤?mL乙腈(3.1.2)重復(fù)提取一次,合并上清液,于40℃下氮吹至近干,再加入乙腈(3.1.2)至2mL,搖勻,待凈化。4BJS2024135.2.1.2其他試樣稱取試樣1g(精確至0.01g)于50mL聚丙烯離心管中,加入200μL混合內(nèi)標(biāo)工作液(3.4.5.3),加入1g氯化鈉(3.1.4),再加入5mL乙腈(3.1.2),渦旋混勻1min,超聲提取10min,于0℃~4℃條件下10000r/min離心5min,上清液轉(zhuǎn)移至另一個(gè)50mL聚丙烯離心管中,殘?jiān)性偌尤?mL乙腈(3.1.2),重復(fù)提取一次,合并上清液,加入10mL水,搖勻,—18℃及以下放置過(guò)夜(糖果、糕點(diǎn)、餅干、飲料無(wú)需冷凍過(guò)夜),取出后于4℃條件下10000r/min離心5min,取上清液待凈化。5.2.2凈化5.2.2.1食用植物油將提取液(5.2.1.1)加載至固相萃取柱(3.5.1)上,收集流出液于接收管中,搖勻,過(guò)0.22μm聚四氟乙烯濾膜(3.5.3),供測(cè)定。5.2.2.2其他試樣將提取液(5.2.1.2)加載至固相萃取柱(3.5.2)上[使用前依次用10mL甲醇(3.1.1)及10mL水活化],棄去流出液,用5%甲醇溶液(3.2.2)5mL淋洗,棄去淋洗液,吹干柱體,用10.0mL甲醇(3.1.1)洗脫,收集洗脫液于接收管中,搖勻,過(guò)0.22μm聚四氟乙烯濾膜(3.5.3),供測(cè)定。5.3儀器參考條件5.3.1液相色譜參考條件5.3.1.1色譜柱:苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱(2.1mm×150mm,5μm),或性能相當(dāng)者。5.3.1.3進(jìn)樣量:5μL。5.3.1.4流速:0.4mL/min。5.3.1.5流動(dòng)相:A為5mmol/L乙酸銨溶液(3.2.1),B為甲醇(3.1.1),梯度洗脫條件見表1。表1液相色譜梯度洗脫條件時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%0653565957.45957.565351065355.3.2質(zhì)譜參考條件5.3.2.1離子源:電噴霧離子源(ESI源)。5.3.2.2掃描方式:負(fù)離子掃描。5.3.2.3監(jiān)測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。5.3.2.4霧化氣(GS1)、氣簾氣(CUR)、輔助氣(GS2)、碰撞氣(CAD)均為高純氮?dú)饣蚱渌线m氣體,使用前應(yīng)調(diào)節(jié)至質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測(cè)要求,參考條件詳見附錄B。5.3.2.5電噴霧電壓(IS)、離子源溫度(TEM)、碰撞能量(CE)、去簇電壓(DP)等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈5BJS202413敏度,監(jiān)測(cè)離子對(duì)和定量離子對(duì)等信息見附錄B。5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(3.4.6)分別注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積的響應(yīng)值,以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液中目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo),以目標(biāo)化合物峰面積的響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)峰面積的響應(yīng)值的比值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚及其內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖見附錄C。5.5試樣溶液的測(cè)定5.5.1定性測(cè)定在相同試驗(yàn)條件下,試樣中待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi),將試樣中被測(cè)組分定性離子的相對(duì)豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度進(jìn)行比較,若偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍,則可判定為試樣中檢出對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度/%>50>20~50>10~20≤10最大允許偏差/%±20±25±30±505.5.2定量測(cè)定將試樣溶液(5.2)注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中,得到相應(yīng)的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)物的濃度。用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)試樣進(jìn)行定量,應(yīng)使試樣溶液被測(cè)物質(zhì)的響應(yīng)值在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi),若被測(cè)物質(zhì)含量超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定范圍,則應(yīng)重新處理試樣,適量減少稱樣量并相應(yīng)增大內(nèi)標(biāo)添加量,用稀釋的方式使最終上樣溶液中內(nèi)標(biāo)濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)濃度保持一致,使其上機(jī)濃度在線性范圍內(nèi)再進(jìn)行定量。6結(jié)果計(jì)算試樣中被測(cè)組分的含量按式(1)計(jì)算:m×1000X=c×V×f×1000(m×1000式中:X—試樣中被測(cè)組分的含量,單位為微克每千克(μg/kg);c—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中被測(cè)組分的質(zhì)量濃度,單位為納克每毫升(ng/mL);V—溶劑的定容體積,單位為毫升(mL);f—稀釋倍數(shù);m—試樣稱取的質(zhì)量,單位為克(g);1000—換算系數(shù)。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的15%。6BJS2024138其他當(dāng)取樣量為1g時(shí),大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚的檢出限為20μg/kg,定量限為50μg/kg。9結(jié)果表述如樣品配料表中含火麻仁或火麻仁加工品,使用本方法可測(cè)得試樣中大麻酚、大麻二酚或四氫大麻酚的含量。其余情況,檢出值超過(guò)50μg/kg時(shí)應(yīng)結(jié)合執(zhí)法證據(jù)綜合研判。7BJS202413附錄A(資料性)標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式和相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式和相對(duì)分子質(zhì)量見表A.1。表A.1標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式和相對(duì)分子質(zhì)量序號(hào)中文名稱英文名稱CAS號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量1大麻酚Cannabinol521-35-7C21H26O2310.42大麻二酚Cannabidiol13956-29-1C21H30O2314.53四氫大麻酚Tetrahydrocannabinol1972-08-3C21H30O2314.54大麻酚-D3Cannabinol-D31435934-54-5C21H23D3O2313.45大麻二酚-D3Cannabidiol-D31435783-16-6C21H27D3O2317.56四氫大麻酚-D3Tetrahydrocannabinol-D381586-39-2C21H27D3O2317.58BJS202413附錄B(資料性)質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下。a)離子源:電噴霧離子源(ESI源)。b)掃描方式:負(fù)離子掃描。c)檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。d)電噴霧電壓(IS):—4500V(ESI—)。e)氣簾氣(CUR):68.95kpa。f)霧化氣(GS1):310.26kpa。g)輔助氣(GS2):310.26kpa。h)離子源溫度(TEM):600℃。注:本附錄所列質(zhì)譜條件僅供參考,當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí),儀器參數(shù)可能存在差異,測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚標(biāo)準(zhǔn)品及其內(nèi)標(biāo)的監(jiān)測(cè)離子對(duì)及質(zhì)譜分析參數(shù)見表B.1。表B.1大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚標(biāo)準(zhǔn)品及其內(nèi)標(biāo)的監(jiān)測(cè)離子對(duì)及質(zhì)譜分析參數(shù)化合物名稱保留時(shí)間/min母離子(m/≈)子離子(m/≈)去簇電壓Dp/V碰撞能量CE/eV大麻酚—130—39—60大麻二酚4.91—120—32—26四氫大麻酚5.23—140—37—36大麻酚-D3—130—44大麻二酚-D34.91—100—31四氫大麻酚-D35.23—130—37*定量離子對(duì)。大麻二酚與四氫大麻酚為一對(duì)同分異構(gòu)體,需注意兩者的色譜分離,在該色譜條件下,大麻二酚、四氫大麻酚的保留時(shí)間分別為4.91min、5.23min。9BJS