《煙用添加劑中硫脲的測定 高效液相色譜法編制說明》

《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目編制說明1工作簡況1.1任務(wù)來源根據(jù)國家煙草專賣局國煙科[2011]165號計劃下達(dá)的工作計劃，制訂《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》行業(yè)檢測標(biāo)準(zhǔn)。1.2項(xiàng)目承擔(dān)單位、協(xié)作單位及主要分工根據(jù)國家煙草專賣局標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目專項(xiàng)合同（合同號：2011B060），該項(xiàng)工作由云南煙草科學(xué)研究院牽頭和湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司共同承擔(dān)，主要負(fù)責(zé)本標(biāo)準(zhǔn)的研究、組織以及起草工作。云南省煙草質(zhì)量監(jiān)督檢測站、上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司、紅塔煙草（集團(tuán)）有限責(zé)任公司、紅云紅河煙草（集團(tuán)）有限責(zé)任公司等四家單位作為共同實(shí)驗(yàn)方也參與了該標(biāo)準(zhǔn)的共同實(shí)驗(yàn)相關(guān)工作。1.3主要工作過程該項(xiàng)工作主要分四個階段。第一階段前期調(diào)研階段項(xiàng)目組成立后，首先進(jìn)行了國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)資料調(diào)研。調(diào)研結(jié)果表明：國際標(biāo)準(zhǔn)化組織未制定煙用添加劑中硫脲的檢測標(biāo)準(zhǔn)，有關(guān)硫脲的檢測技術(shù)的報道也較少。目前能檢索到的飲料中硫脲測定的權(quán)威相關(guān)文獻(xiàn)主要有：1999年，AOAC公布了一系列關(guān)于硫脲的官方檢測方法，這些方法包括：AOAC948.18（橙汁中的硫脲定性測試程序）、AOAC948.19（橙汁中硫脲的迅速氧化方法）、AOAC948.20（冰凍桃子中硫脲的測定分光光度法）、AOAC961.10（桔子皮中硫脲的測定比色法）。1981年，HKobayashi等采用反相高效液相色譜和紫外檢測器(RP-HPLC-UV)建立了血漿中硫脲的檢測方法，該方法采用甲醇和水作為流動相，檢測波長設(shè)置為240nm,田鼠血漿樣品經(jīng)過乙醇提取、蒸發(fā)富集、硅膠純化等步驟，最后采用反相液相色譜檢測樣品中的硫脲。1995年，BUA等采用HPLC建立了測定水中硫脲的高效液相色譜方法，方法檢出限為0.1μg/ml，方法回收率100-112%。1997年，AndreaRaffaelli等采用大氣壓化學(xué)電離源選擇反應(yīng)監(jiān)測模式建立了水中硫脲的液相色譜質(zhì)譜（LC-MS）快速檢測方法。2009年，黃曉蘭等建立了測定面條和米粉中硫脲的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測方法，方法的檢出限0.5μg/g，平均回收率83-90%。所報道的色譜方法主要是液相色譜法，涉及到的檢測器有紫外檢測器、質(zhì)譜檢測器等。從以上列舉的方法可以看出，現(xiàn)有硫脲的分析檢測方法主要是針對工業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)品、環(huán)境樣品和飲料等而建立的。其中AOAC方法針對固定對象—橙汁、柑桔皮，采用比色法和分光光度法分別對樣品中的硫脲進(jìn)行了定性和定量測定，這些方法對于煙草類添加劑中硫脲的測定具有借鑒意義。在梳理種類龐雜檢測方法的基礎(chǔ)上，項(xiàng)目組從本標(biāo)準(zhǔn)制訂的適用范圍（香精及料液）、普適性（煙草行業(yè)內(nèi)儀器配置情況）出發(fā)，根據(jù)上述文獻(xiàn)，對煙用添加劑中硫脲進(jìn)行高效液相色譜法的研究，以此法作為煙用添加劑中硫脲的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法，力求使標(biāo)準(zhǔn)既具有科學(xué)性、先進(jìn)性，又具有適用性和可操作性。同時也充分考慮到在實(shí)際工作中，如果需要對色譜峰進(jìn)行定性確認(rèn)時，可以將所建立的高效液相色譜法移置到高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）檢測方法中，解決實(shí)際樣品中硫脲定性判斷問題。第二階段試驗(yàn)研究階段項(xiàng)目組根據(jù)選定的檢測方法，按預(yù)定實(shí)驗(yàn)方案，對檢測方法中涉及的煙用添加劑樣品稱樣量、萃取溶劑選擇、溶劑用量、萃取條件和體積的選擇、高效液相色譜條件選擇等方面進(jìn)行了嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的試驗(yàn)和優(yōu)化，確定了檢測方法的相關(guān)實(shí)驗(yàn)條件，并對方法回收率、精密度、檢出限等指標(biāo)進(jìn)行了方法評價實(shí)驗(yàn)。第三階段補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)階段2011年9月，項(xiàng)目組召開了《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)研討會，與會的有關(guān)專家對項(xiàng)目組初期建立《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行了初步研討，根據(jù)研討意見，項(xiàng)目組于2011年10月-2011年12月期間進(jìn)行了補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)，基本完成檢測方法標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)研究。第四階段方法比對實(shí)驗(yàn)階段為了考察方法在不同實(shí)驗(yàn)室之間的再現(xiàn)性，取3個煙用添加劑樣品（表香、料液、浸膏），于2011年11月，分別在云南煙草科學(xué)研究院、湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司、云南省煙草質(zhì)量監(jiān)督檢測站、紅塔煙草（集團(tuán)）有限責(zé)任公司、紅云紅河煙草（集團(tuán)）有限責(zé)任公司、上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司等6家實(shí)驗(yàn)室，采用項(xiàng)目組確定方法對選定樣本進(jìn)行了重復(fù)檢測，驗(yàn)證結(jié)果表明：相同樣品在不同實(shí)驗(yàn)室的測試結(jié)果具有良好的再現(xiàn)性。1.4標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做的工作張承明、庹蘇行：方法文獻(xiàn)查閱、試驗(yàn)方案設(shè)計與研究、方法比對實(shí)驗(yàn)；陳永寬、楊華武、繆明明：試驗(yàn)方案設(shè)計與技術(shù)指導(dǎo)；譚建林、李勁竹、孫文梁、朱麗、王素娟、李雪梅、王璐、賀兵：方法研究與比對實(shí)驗(yàn)。2相關(guān)領(lǐng)域的國、內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)研究和制修訂情況2.1相關(guān)領(lǐng)域的國、內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)研究情況國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）未制定煙用添加劑中硫脲的檢測標(biāo)準(zhǔn)。2.2標(biāo)準(zhǔn)編制原則及主要內(nèi)容確定的依據(jù)2.2本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了煙用添加劑中硫脲的高效液相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于煙用香精及料液中硫脲的測定。2.2根據(jù)國家煙草專賣局國煙科[2011]165下達(dá)的工作計劃，進(jìn)行《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的制訂。項(xiàng)目組充分考慮行業(yè)內(nèi)各卷煙企業(yè)的現(xiàn)有設(shè)備以及文獻(xiàn)檢測方法所涉及的儀器設(shè)備兩方面情況的前提下，采用高效液相色譜法作為煙用添加劑中硫脲的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法。并遵照科學(xué)性、先進(jìn)性、適用性和可操作性標(biāo)準(zhǔn)制訂常規(guī)原則，進(jìn)行了本檢測標(biāo)準(zhǔn)的研究制訂工作。2.2項(xiàng)目組根據(jù)選定的檢測方法，按預(yù)定實(shí)驗(yàn)方案，對檢測方法中涉及的相關(guān)條件實(shí)驗(yàn)及方法回收率、精密度、檢出限等指標(biāo)進(jìn)行了嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的試驗(yàn)，主要內(nèi)容如下：稱取1g（精確至0.1mg）試樣于50mL具塞的錐形瓶中，加入15mL水（4.2.1），在150r/min條件下振蕩萃取10min，將振蕩萃取液移入25mL具塞容量瓶中，用5mL水（4.2.1）清洗錐形瓶，將清洗溶液注入容量瓶中，并用水（4.2.1）定容至刻度，搖勻。移取10mL定容萃取液于10mL帶塞的離心試管中，在5000r/min條件下離心10min，準(zhǔn)確移取3mL上清液至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2.2）定容，搖勻。取適量溶液過0.45μm濾膜（4.1.5），濾液用高效液相色譜儀分析。對于水不能分散的試樣，按照以下方法處理。稱取1g（精確至0.1mg）試樣于50mL具塞的錐形瓶中，加入5mL二氯甲烷（4.2.4）將試樣分散均勻，再準(zhǔn)確加入25mL水（4.2.1），在150r/min條件下振蕩萃取10min，靜置分層，準(zhǔn)確移取3mL上層水萃取溶液至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2.2）定容，搖勻。取適量溶液過0.45μm濾膜（4.1.5），濾液用高效液相色譜儀分析。本方法中硫脲的檢出限為0.43mg/kg，定量限為1.42mg/kg，回收率在90.85%～94.78%之間（具體內(nèi)容見試驗(yàn)報告）。3標(biāo)準(zhǔn)預(yù)期產(chǎn)生的社會、經(jīng)濟(jì)效益硫脲（thiourea），別名：硫代尿素，主要用于有機(jī)合成，醫(yī)藥上用作生產(chǎn)藥物的中間體,橡膠工業(yè)上用作硫化促進(jìn)劑,采礦上用作浮選劑，還用作紡織品化學(xué)漂白劑、紙張?zhí)幚韯?，印染助劑，石油化工助?在冶金、電鍍、農(nóng)藥等行業(yè)也有應(yīng)用。早期曾一度作為防腐劑，廣泛用于各類需要漂白、保鮮防腐的食品。向食品中加入硫脲可阻止褐變，表觀光亮，略帶半透明。據(jù)報導(dǎo)，國內(nèi)東南沿海有用硫脲增白、增筋面條，這種面條表觀光亮、略帶半透明，煮熟后爽滑有彈性，口感不錯。但是，硫脲一旦被人體攝入后，會導(dǎo)致多種危害，這些危害包括：抑制甲狀腺和造血器官的機(jī)能，引起中樞神經(jīng)麻痹及呼吸和心臟功能降低等，甚至導(dǎo)致死亡。IARC致癌性評價：動物陽性反應(yīng)?；谏鲜鰧θ梭w的危害性，我國已不允許其作為食品添加劑使用。2008年國家局為了加強(qiáng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)控體系建設(shè)，擬定了煙用添加劑中16種禁用成分名單，硫脲是十六種成分之一。對于我國煙草行業(yè)，建立準(zhǔn)確可靠的煙用添加劑中硫脲的定量檢測方法是非常有必要的。由于煙用添加劑種類繁多，成分復(fù)雜，因此建立一種能夠準(zhǔn)確測定煙用添加劑中的硫脲含量的方法，都是一項(xiàng)十分困難的工作。本標(biāo)準(zhǔn)的目標(biāo)是建立煙用添加劑中硫脲的檢測標(biāo)準(zhǔn)，為卷煙產(chǎn)品安全監(jiān)控體系的構(gòu)建提供技術(shù)支持,為低危害成分卷煙產(chǎn)品開發(fā)奠定技術(shù)基礎(chǔ)，具有一定的社會效益及潛在經(jīng)濟(jì)效益。4采用國際標(biāo)準(zhǔn)和國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的情況目前沒有關(guān)于煙用添加劑中硫脲測定的相關(guān)國際標(biāo)準(zhǔn)和國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)，因此沒有進(jìn)行采用。5與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)按照有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)規(guī)定，無任何違背。6作為強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的建議及主要依據(jù)介于目前煙草行業(yè)內(nèi)煙用添加劑中硫脲的定量檢測手段、儀器設(shè)備以及相關(guān)技術(shù)的現(xiàn)實(shí)情況，建議將《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》可作為推薦性檢測標(biāo)準(zhǔn)，提供給各卷煙企業(yè)、質(zhì)檢中心以及相關(guān)研究中心等檢測部門。7標(biāo)準(zhǔn)宣貫的要求和措施建議《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布后，由國家煙草專賣局