DB32T3356-2018南京椴組培育苗技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.40

B61

備案號：58093-2018DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3356—2018

南京椴組培育苗技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationforpropagationofTiliamiqueliana

2018-2-10發(fā)布2018-3-10實施

江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB32/T3356—2018

南京椴組培育苗技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了南京椴組織培養(yǎng)技術(shù)中外植體選擇與處理、腋芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根培養(yǎng)、煉苗、

移栽和移栽后管理的技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于南京椴的組織培養(yǎng)快速繁殖。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB6001育苗技術(shù)規(guī)程

3外植體選擇與處理

3.1外植體母株選擇

選擇生長健壯且無病蟲害的母株。宜選擇1年生苗齡的實生容器苗，不宜選擇其他苗齡，忌用地栽

苗。

3.2外植體母株管理

于3月份，將腋芽尚未萌發(fā)的南京椴容器苗，移至玻璃溫室培養(yǎng)。使用培養(yǎng)架將容器苗底部隔離地

面50cm。每隔10d，噴灑多菌靈1次，使用40%多菌靈可濕性粉劑500～800倍液。切忌將容器苗地表放

置，以免根系扎入帶菌土壤中生長。

3.3外植體選擇

外植體母株枝條未木質(zhì)化之前，剪下枝條，去除葉片，保留1cm長葉柄，作為外植體。主干基部保

留3-4個飽滿的腋芽。

在8月初、9月初與10月初，可重復(fù)3次外植體取樣。

3.4外植體消毒

先用毛刷對枝條表面刷洗，并通過清水沖洗干凈。再用84消毒液（稀釋50倍），在搖床上振蕩消毒

15min-20min，并通過流水沖洗20min-30min。于無菌操作臺上，用75％乙醇消毒50s-60s，然后立即

倒入0.1％的升汞消毒10min，最后無菌水洗滌4次，每次振蕩3min-5min。

3.5外植體分段

將消毒后的枝條，切割成0.6cm長的莖段，每段帶1個腋芽。

4腋芽誘導(dǎo)

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DB32/T3356—2018

將莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進行初代誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為25℃，首先在黑暗中培養(yǎng)24小時，然后光

照培養(yǎng)20d：光照時間為10-16小時/天，光照強度為2000lx，所述初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基，

添加的激素水平為：6-BA0.2mg/L+KT0.1mg/L+IBA0.04mg/L+GA30.2mg/L，誘導(dǎo)培養(yǎng)基PH為5.8。

5繼代增殖

初代培養(yǎng)20d后，將10cm高的初代苗切割為1cm莖段，每莖段帶1腋芽，切除葉片，接入繼代

增殖培養(yǎng)基，進行不定芽誘導(dǎo)，繼代培養(yǎng)20d，培養(yǎng)溫度為25℃，光照時間為10-16小時/天，光照強

度為2000lx，繼代增殖培養(yǎng)基為WPM培養(yǎng)基，并添加反式玉米素0.2mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.1mg/L，

培養(yǎng)基PH為5.8。

6生根培養(yǎng)

繼代培養(yǎng)40d后，南京椴無根試管苗進行切分，每株均有2個不定芽，接入生根培養(yǎng)基中進行生

根培養(yǎng)20d，培養(yǎng)溫度為25℃，光照時間為10-16小時/天，光照強度為2000Lx，生根培養(yǎng)基1/2MS

培養(yǎng)基，并添加IBA3.0mg/L+NAA1.0mg/L，培養(yǎng)基PH為5.8。

7煉苗培養(yǎng)

當(dāng)生根苗的不定根長至4cm左右，生根數(shù)在4-8根時，將組培瓶從培養(yǎng)室取出，不打開瓶蓋，在

溫室或蔭棚馴化3d，環(huán)境遮光度為60%。馴化后打開瓶蓋，繼續(xù)馴化2d后從瓶中取出組培苗，洗凈

根部培養(yǎng)基后用40%多菌靈可濕性粉劑（500～800）倍液浸泡20min。

8移栽

8.1栽培基質(zhì)選擇

基質(zhì)成分為重量比1:3:2的黃心土、珍珠巖和草炭土。

8.2栽培容器選擇

采用50孔穴盤，圓形口、尖底的5cm×11cm穴盤。舊穴盤需消毒后才可使用。

8.3移栽方法

組培苗上方使用帶孔PVC膜覆蓋保濕，放在通風(fēng)陰涼處培養(yǎng)20d-30d，培養(yǎng)到第15d將PVC膜

移除，換用折光率75%的遮陽網(wǎng)。

9移栽后管理

9.1光照管理

初始光照強度宜在5000lx左右，15d后將光照提高至15000lx。

9.2溫度管理

移栽苗培養(yǎng)溫度為18℃～28℃，以25℃恒溫為最佳。

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DB32/T3356—2018

9.3水分管理

移栽苗初始培養(yǎng)濕度范圍為70％～85％，培養(yǎng)30d后，將濕度控制在50%～75％。

9.4消毒與施肥管理

每隔10d噴1次多菌靈1000倍液。每隔15d噴施可溶性完全肥料（N:P:K=3:1:1）1000倍液1次。

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AA

附錄A

（規(guī)范性附錄）

WPM培養(yǎng)基母液成分組成

名稱成分含量（mg/L）單位母液加入藥品（g）

①0.5L1.0L1.5L2.0L

大量K2SO49909.919.829.739.6

MgSO4?7H2O3703.77.411.114.8

KH2PO41701.73.45.16.8

NH4NO34004.081216

微量MnSO4?4H2O22.52.254.56.759

ZnSO4?7H2O8.60.861.722.583.44

H3BO36.20.621.241.862.48

CuSO4?5H2O0.250.0250.050.0750.1

Na2MoO4?2H2O0.250.0250.050.0750.1

鈣鹽Ca(NO3)2?4H2O55627.855.683.4111.2

鐵鹽②FeSO4?7H2O27.82.785.568.3411.12

Na2-EDTA37.33.737.4611.1914.92

有機物肌醇1002468

甘氨酸2.00.20.40.60.8

VB11.00.10.20.30.4

VB60.50.050.10.150.2

VB50.50.050.10.150.2

注：①此處含量為最終WPM培養(yǎng)基中的含量。②先將Na2EDTA用去離子水溶解，加熱至沸騰2-3次，再用一個瓶

子溶好鐵鹽，待Na2EDTA完全冷卻以后，再將鐵鹽倒入其中并混勻。由于鐵鹽比較容易結(jié)晶，裝鐵鹽的瓶子一定要用去

離子水清洗干凈，并放在烘干箱中烘干。

4

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BB

附錄B

（規(guī)范性附錄）

MS培養(yǎng)基母液成分組成

原配方量稱取量母液體積配制1L培養(yǎng)基應(yīng)

母液化合物擴大倍數(shù)

(mg.L-1)（mg）（mL）吸取量（mL）

大量元素NH4NO316502033000100050

KNO3190038000

CaCl2·2H2O4408800

MgSO4·7H2O3707400

KH2PO41703400

微量元素KI0.8320016610005

H3BO36.21240

MnSO4·4H2O22.34460

ZnSO4·7H2O8.61720

NaMoO4·2H2O0.2550

CuSO4·5H