隱球菌臨床推廣課件

隱球菌抗原檢測的臨床意義一瑞生物

隱球菌病感染診斷現狀一

產品介紹二

適用科室及臨床意義三

相關標準四流行病學38個ICUsof27個意大利醫(yī)院384例真菌感染(318例侵襲性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隱球菌感染)TortoranoAMetal.Mycoses.2011,55:73–79.流行病學隨著AIDS患者的增多，各種機會性感染的發(fā)病率也隨之上升，新型隱球菌成為繼白色念珠菌之后最常見的機會性感染真菌，其在HIV中的感染率已達8.5%。隱球菌性腦膜炎發(fā)生率和死亡率在發(fā)達國家達到10-30%，

在發(fā)展中國家可達到50-100%。早期隱球菌感染臨床表現缺乏特異性，腦脊液變化不典型，但是當發(fā)展為隱球菌性腦膜炎時，死亡率可達到20%。早期、快速、準確地診斷很有必要現有檢測手段墨汁染色（菌體）真菌培養(yǎng)（活菌）ELISA（莢膜多糖抗原）乳膠凝集法（莢膜多糖抗原）膠體金法（莢膜多糖抗原）1.印度墨汁染色：

敏感性差，陽性檢出率很低2.腦脊液或血液培養(yǎng)（金標準）：

陽性檢出率低，培養(yǎng)（2-10天）及鑒定時間長，易誤診3.抗原檢測試驗：

腦脊液和血清樣本抗原檢測的敏感性可達到97%和87%*，能實現早期快速診斷*TylerWarkentien,MD.IntJSTDAIDS.2010October;21(10):679–684.現有檢測手段隱球菌莢膜多糖抗原

由3種不同的單糖聚合而成是引起病理變化的主要毒性因子在菌體生長和繁殖過程中，GXM不斷分泌到胞外通過發(fā)揮免疫抑制作用和免疫調理作用影響宿主免疫系統OscarZaragoza,etc..AdvApplMicrobiol.2009,68:133–216隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，可以作為隱球菌感染的診斷依據隱球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）原理隱球菌抗原檢測試劑盒（膠體金免疫層析法）試劑盒組成隱球菌抗原檢測試紙條50條樣本稀釋液滴定液陽性對照穩(wěn)定性/儲存方法2年有效期室溫儲存特點無需樣本預處理10分鐘得到結果定性或半定量測定結果客觀血清，腦脊液，血漿樣本收集及制備按照無菌操作收集腦脊液、血漿和血清樣本。樣本最多可以在2-8℃放置72小時。不反復凍融的情況下，樣本可以在-20℃以下保存更長時間。樣本在運輸過程中應保持在2-8℃或者-20℃以下。定性檢測操作步驟簡單5步，10分鐘得到結果半定量檢測操作步驟1、以1:5作為初始稀釋濃度，依次1:2稀釋至1:2560。分別放置于10個微離心管中并編號1-10。2、向1號試管中加入4滴樣本稀釋液。3、分別向標號2-10的試管中加入2滴滴定液。4、將40μL樣本加入1號試管并混勻。5、從1號試管中吸取80μL樣本混合液轉移至2號試管并混勻，依次進行稀釋直至10號試管。6、10號試管中吸取80μL樣本混合液并丟棄以保證試管內最終體積為80μL。7、將試紙條的白端分別沒入試管中。8、等待10分鐘，讀取并記錄實驗結果。半定量檢測操作步驟半定量檢測操作步驟-2半定量檢測(滴度)結果對于半定量滴定檢測，患者的滴度應報告為產生陽性結果的最高稀釋度。質量控制陽性對照：將1滴樣本稀釋液加入試管中，再加入1滴隱球菌抗原陽性對照。陰性對照為：將2滴樣本稀釋液加入試管中。分別插入試紙條，10分鐘后讀取結果。依據本地、國家的法規(guī)及認證機構的指導方針或要求，可能需要做額外的質控檢測。膠體金法和培養(yǎng)/墨汁染色對比CrAgLFApackageinsert(IMMY)靈敏度特異性膠體金法試劑盒95.83%99.84%墨汁染色86.39%100.00%真菌培養(yǎng)60.72%100.00%隱球菌抗原分布時間感染血液腦脊液肺部腦膜炎肺以外無癥狀癥狀膠體金法隱球菌抗原檢測的其他方法AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.Med.Diagn.(2012)6:245膠體金法和乳膠凝集法對比

膠體金法乳膠凝集法檢測時間10分鐘長達60分鐘樣品預處理無需需要(蛋白酶處理血清)樣品類型血清,腦脊液,血漿血清和腦脊液儲存室溫冷藏適用科室及臨床意義新型隱球菌感染可發(fā)生于全身多個部位，最常見的感染主要發(fā)生在中樞神經系統、肺部、皮膚等。中樞神經系統隱球菌病-神經內科隱球菌侵犯中樞神經系統最常見，包括腦膜炎或亞急性腦膜炎、散播型腦膜炎等。

臨床癥狀：首發(fā)癥狀間歇性頭痛、惡心及嘔吐，伴低熱、周身不適、精神不振等非特異性癥狀。隨病情發(fā)展，頭痛漸加重轉為持續(xù)性、精神異常、躁動不安，嚴重者出現不同程度意識障礙。肺隱球菌病-呼吸科肺部是隱球菌侵入的門戶適用科室及臨床意義臨床意義在撒哈拉以南的非洲地區(qū)，隱球菌腦膜炎是造成艾滋患者死亡的一種重要疾病，隱球菌抗原可以在病癥發(fā)生的幾周前被檢測到。隱球菌抗原的檢測對于隱球菌腦膜炎的預防有非常積極的作用。臨床意義莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，是隱球菌感染確診的依據。在感染的初期，莢膜多糖抗原就被檢測到，因此是隱球菌病早期診斷的標志物。隨著病情的發(fā)展，莢膜多糖抗原的含量會隨之發(fā)生變化，還可作為病情監(jiān)測的指標。G實驗：檢測真菌細胞壁特有成分1,3-β-D-葡聚糖吞噬細胞將菌吞噬消化后釋放1,3-β-D-葡聚糖到血液不能檢測到的真菌：隱球菌和接合菌（包括毛霉菌、 根霉菌等）G實驗檢測隱球菌為陰性結果的原因：隱球菌含1,3-β-D-葡聚糖的量少莢膜很厚，不易被吞噬細胞消化聯合檢測的意義