丙型肝炎病毒(HCV)核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光法）（CSZ2400241）

3 3 3 3 4 4 5 9 9 11.一、申請(qǐng)人名稱蘇州天隆生物科技有限公司二、申請(qǐng)人住所中國(guó)（江蘇）自由貿(mào)易試驗(yàn)區(qū)蘇州片區(qū)蘇州工業(yè)園區(qū)金雞湖大道99號(hào)蘇州納米城東北區(qū)NE-33棟三、生產(chǎn)地址蘇州工業(yè)園區(qū)金雞湖大道99號(hào)蘇州納米城東北區(qū)NE-33棟，蘇州工業(yè)園區(qū)金雞湖大道99號(hào)蘇州納米城西北區(qū)07棟(NW-07)501室、蘇州工業(yè)園區(qū)金雞湖大道99號(hào)蘇州納米城西北區(qū)06棟(NW-06)504室一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分定量標(biāo)準(zhǔn)品2、HCV定量標(biāo)準(zhǔn)品3、HCV定量標(biāo)準(zhǔn)品4，主要組成成分見表表1試劑盒主要組成成分Tris-HCl、MgCl2、引物、探針、dATP、dCTP、dUTP、0.79mL×11.58mL×11.6mL×11.6mL×1>1.0×105IU/mL含HCV片段假病毒，濃度范1.6mL×11.6mL×10.6mL×11.6mL×11.6mL×11.2mL×11.6mL×11.6mL×1含HCV片段假病毒，濃度范1.6mL×11.6mL×1含HCV片段假病毒，濃度范1.6mL×11.6mL×1含HCV片段假病毒，濃度范1.6mL×11.6mL×1（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本產(chǎn)品用于定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的丙型肝炎病毒核酸（RNA）。本產(chǎn)品主要通過監(jiān)測(cè)丙型肝炎病毒的復(fù)制水平，用于評(píng)估丙型肝炎患者抗病毒治療的應(yīng)答和治療效果，能檢測(cè)1-6基因型。本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果不得作為患者病情評(píng)價(jià)的唯一標(biāo)準(zhǔn)，必須結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他檢測(cè)方法對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。本產(chǎn)品不得用于HCV的血源篩查。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格48測(cè)試/盒、96測(cè)試/盒。（四）產(chǎn)品檢驗(yàn)原理本試劑盒選用丙型肝炎病毒保守基因片段設(shè)計(jì)特異引物及特異Taqman探針，在逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶配以PCR反應(yīng)混合液的作用下，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上，通過檢測(cè)熒光信號(hào)的變化實(shí)現(xiàn)丙型肝炎病毒本試劑盒設(shè)置了dUTP+UNG酶防污染措施，利用UNG酶將可能存在的PCR產(chǎn)物污染充分降解，以排除由此可能引起的假陽性結(jié)果。本試劑盒設(shè)置了內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)，內(nèi)標(biāo)參與核酸提取與檢測(cè)的整個(gè)過程，通過監(jiān)控內(nèi)標(biāo)檢測(cè)結(jié)果是否正常，實(shí)現(xiàn)在全封閉反應(yīng)體系中對(duì)檢測(cè)過程的監(jiān)控，可有效監(jiān)控假陰性的發(fā)生。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產(chǎn)品在制備過程中主要原材料包括：引物、探針、Taq酶混合液、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、假病毒等。主要原材料均為外購(gòu)。其中引物、探針由申請(qǐng)人自行設(shè)計(jì)后委托專業(yè)公司合成，其他主要原材料由申請(qǐng)人選擇有資質(zhì)的供應(yīng)商提供的原料，通過功能性試驗(yàn)，篩選出最佳原材料和供應(yīng)商。申請(qǐng)人制定了各主要原材料質(zhì)量要求并經(jīng)檢驗(yàn)合格。2.企業(yè)參考品和質(zhì)控品的設(shè)置情況該產(chǎn)品企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、線性參考品、準(zhǔn)確度參考品、精密度參考品和檢測(cè)限參考品。企業(yè)參考品由臨床樣本和假病毒制備而成。本試劑盒設(shè)置了由臨床樣本制備的不同水平的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品，用于檢測(cè)過程中試劑盒和儀器的質(zhì)量控制。此外本產(chǎn)品設(shè)置了內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)，內(nèi)標(biāo)參與核酸提取與檢測(cè)的整個(gè)過程，通過監(jiān)控內(nèi)標(biāo)檢測(cè)結(jié)果是否正常，監(jiān)控假陰性的發(fā)生。（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請(qǐng)人通過使用初步確定的配方進(jìn)行反應(yīng)體系配制，以企業(yè)參考品/質(zhì)控品，對(duì)反應(yīng)體系中的HCV引物/探針濃度、內(nèi)標(biāo)引物/探針濃度、酶混合液用量、鎂離子濃度、dNTPs濃度、PCR擴(kuò)增參數(shù)、樣本用量、核酸提取等分別進(jìn)行了篩選或優(yōu)化，最終確定了最佳的生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系。（三）分析性能評(píng)估本產(chǎn)品分析性能評(píng)估內(nèi)容主要包括：正確度、精密度、檢出限、定量限、分析特異性、線性范圍、包容性等。正確度研究中，申請(qǐng)人采用HCV陰性血清和血漿樣本，將丙型肝炎病毒W(wǎng)HO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品、丙型肝炎病毒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和丙型肝炎病毒基因分型國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至一系列濃度水平，各水平檢測(cè)濃度對(duì)數(shù)值與理論濃度對(duì)數(shù)值偏差，符合正確度性能要求；與同類試劑對(duì)臨床樣本定性檢測(cè)及定量檢測(cè)結(jié)果一致性，均滿足正確度要求。精密度研究中，申請(qǐng)人選擇包含不同型別HCV中陽性、HCV弱陽性、HCV臨界陽性和HCV陰性的臨床樣本作為待測(cè)樣本，進(jìn)行為期20天的檢測(cè)。分別對(duì)批次內(nèi)/間、試驗(yàn)日內(nèi)/間、操作者間、儀器間、實(shí)驗(yàn)室間的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果表明精密度滿足性能要求。檢出限和定量限研究中，申請(qǐng)人通過將丙型肝炎病毒W(wǎng)HO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品及丙型肝炎病毒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋，對(duì)系列濃度樣本進(jìn)行20次重復(fù)檢測(cè)，以陽性檢出率≥95%的最低稀釋濃度作為檢出限，以符合試劑盒準(zhǔn)確度要求的最低濃度作為定量限。申請(qǐng)人進(jìn)一步通過臨床HCV陽性樣本及商業(yè)化血漿盤樣本（包含HCV1~6型）對(duì)檢出限和定量限水平進(jìn)行驗(yàn)證。最終確定試劑盒的檢出限為12IU/mL，定量限為20IU/mL。交叉反應(yīng)研究中，申請(qǐng)人對(duì)腺病毒5型、人巨細(xì)胞病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒1型、人類免疫缺水痘帶狀皰疹病毒、人類皰疹病毒4型、梅毒螺旋體、西尼羅病毒、登革熱病毒、甲型流感病毒、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌、人類基因組DNA進(jìn)行交叉反應(yīng)評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示上述樣本與本產(chǎn)品均不產(chǎn)生交叉反應(yīng)。在干擾試驗(yàn)中，申請(qǐng)人對(duì)60mg/mL的甘油三酯、0.6mg/mL的膽紅素、30mg/mL的血紅蛋白、60IU/mL的類風(fēng)濕因子、48g/L的免疫球蛋白（IgG）及30mg/mL的抗核抗體及系統(tǒng)性紅斑狼瘡血，4μg/mL的利巴韋林、18ng/mL的聚乙二醇干擾素α-2a、18ng/mL的聚乙二醇干擾素α-2b、6.06ng/mL的干擾素α1b、6.擾素α2b、6.06ng/mL的復(fù)合干擾素（C-IFN）、15μg/kg的重組人粒細(xì)胞刺激因子（GMCSF）、7.62mg/mL的索磷布韋、17μg/mL的奈韋拉平，在HCV臨界濃度水平和低濃度水平進(jìn)行干擾試驗(yàn)，結(jié)果顯示無干擾。線性范圍研究中，申請(qǐng)人對(duì)HCV高值臨床樣本、商業(yè)化血漿分型盤及假病毒（包含HCV1~6型）進(jìn)行系列稀釋，用于線性范圍的建立研究，然后對(duì)包含HCV不同型別的樣本、商業(yè)化血漿分型盤進(jìn)行線性范圍驗(yàn)證。結(jié)果均符合線性范圍的性能要求。本產(chǎn)品線性范圍為：20IU/mL~1.0×108IU/mL。包容性研究中，申請(qǐng)人采用包含HCV不同型別的血清和血漿樣本，分別制備低濃度和檢出限濃度水平的包容性研究樣本進(jìn)行包容性研究，結(jié)果顯示包容性滿足性能要求。申請(qǐng)人采用臨床樣本進(jìn)行了核酸提取試劑盒的性能研究，研究包括核酸提取濃度、純度及提取效率和重復(fù)性等，研究結(jié)果表明本試劑盒選擇的核酸提取方法在核酸提取純度、濃度、提取效率、重復(fù)性及抗干擾性能指標(biāo)均滿足設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)，符合對(duì)提取試劑的檢測(cè)需求。申請(qǐng)人對(duì)血清、血漿各233例臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，采用ROC曲線以及百分位數(shù)法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，確定本試劑盒靶標(biāo)陽性判斷值為Ct=36，內(nèi)標(biāo)陽性判斷值為Ct<40。申請(qǐng)人進(jìn)一步采用臨床樣本進(jìn)行陽性判斷值的驗(yàn)證，驗(yàn)證本試劑盒陽性判斷值合理。（五）穩(wěn)定性研究申請(qǐng)人對(duì)本產(chǎn)品實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，確定了在各種條件下本產(chǎn)品及樣本的有效保存時(shí)間。實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究：將試劑盒儲(chǔ)存于-20℃±5℃條件下，連續(xù)13個(gè)月對(duì)試劑盒外觀、陰性符合率、陽性符合率、線性、準(zhǔn)確度、檢出限、精密度等指標(biāo)進(jìn)行考察，各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，確定產(chǎn)品在-20℃±5℃條件下可穩(wěn)此外，申請(qǐng)人對(duì)產(chǎn)品的運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性分別進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，產(chǎn)品性能均能滿足產(chǎn)品說明書聲稱。三、臨床評(píng)價(jià)概述申請(qǐng)人在南京市第二醫(yī)院、天津市第二人民醫(yī)院、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院、上海市公共衛(wèi)生臨床中心共4家機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗(yàn)。采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，確認(rèn)本產(chǎn)品的臨床性能。共納入病例612例，入組病例均為患有丙型肝炎或其他肝臟疾病的受試者，樣本類型為血清和血漿。試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽性符合率99.58%（95%CI：98.47%，99.88%陰性符合率99.29%（95%CI：96.09%，99.88%）。465例樣本納入定量統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)體外診斷試劑與對(duì)比試劑定量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)為0.9939，檢測(cè)結(jié)果Log值擬合方程為：Y=-0.0876+1.0071x。以上結(jié)果顯示兩者檢測(cè)結(jié)果之間具有良好的一致性。申請(qǐng)人在三家臨床機(jī)構(gòu)共進(jìn)行了219例的血漿和血清樣本的同源比對(duì)，結(jié)果顯示，陽性符合率為99.39%，陰性符合率為98.18%；定量分析，相關(guān)系數(shù)為0.9785，檢測(cè)結(jié)果Log值擬合方程為：Y=0.0855+0.9935x。綜上所述，試驗(yàn)體外診斷試劑的臨床試驗(yàn)資料符合技術(shù)審評(píng)要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險(xiǎn)判定本產(chǎn)品適用于定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的丙型肝炎病毒核酸（RNA）。用于評(píng)估丙型肝炎患者抗病毒治療的應(yīng)答和治療效果，能檢測(cè)（二）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估申請(qǐng)人對(duì)已知危險(xiǎn)(源)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)，按照風(fēng)險(xiǎn)可接受準(zhǔn)則判斷每個(gè)危險(xiǎn)(源)的風(fēng)險(xiǎn)是否達(dá)到可接受水平，對(duì)合理可行降低的風(fēng)險(xiǎn)、不經(jīng)過風(fēng)險(xiǎn)/收益分析既判定為不可接受的風(fēng)險(xiǎn)采取控制措施，并對(duì)具體措施進(jìn)行實(shí)施驗(yàn)證，同時(shí)重新對(duì)采取措施后的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行估計(jì)，確認(rèn)其風(fēng)險(xiǎn)水平是否可接受。但為保證用械安全，基于對(duì)主要剩余風(fēng)險(xiǎn)的規(guī)避,需要在說明書中提示以下信息：1.預(yù)期用途本產(chǎn)品用于定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的丙型肝炎病毒核酸（RNA）。本產(chǎn)品主要通過監(jiān)測(cè)丙型肝炎病毒的復(fù)制水平，用于評(píng)估丙型肝炎患者抗病毒治療的應(yīng)答和治療效果，能檢測(cè)1-6基因型。本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果不得作為患者病情評(píng)價(jià)的唯一標(biāo)準(zhǔn)，必須結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他檢測(cè)方法對(duì)病情進(jìn)行綜合分析。本產(chǎn)品不得用于HCV的血源篩查。2.警示及注意事項(xiàng)產(chǎn)品說明書中介紹了該產(chǎn)品檢驗(yàn)方法的局限性及使用中的注意事項(xiàng)。本申報(bào)項(xiàng)目為境內(nèi)第三類體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)，屬于優(yōu)先審批項(xiàng)目。依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例》（國(guó)務(wù)院令第739號(hào)）、《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》（國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)對(duì)申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià),申報(bào)產(chǎn)品符合安全性、有效性的要求，符合現(xiàn)有認(rèn)知水平，建議準(zhǔn)予注冊(cè)。附件：產(chǎn)品說明書本產(chǎn)品用于定量檢測(cè)人血清或血漿樣本中的丙型肝本試劑盒選用丙型肝炎病毒保守基因片段設(shè)計(jì)特本試劑盒設(shè)置了dUTP+UNG酶防污染措施，利用UNG酶將可能存本試劑盒設(shè)置了內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)，內(nèi)標(biāo)參與核酸提取與檢測(cè)的整個(gè)過程，通過監(jiān)控內(nèi)標(biāo)檢測(cè)結(jié)果是否正常，實(shí)現(xiàn)在HCV反應(yīng)混合液滅活人源陽性血清，濃度范圍：100IU/mL滅活人源陽性血清，濃度為1.0×105IU/mLHCV定量標(biāo)準(zhǔn)品2HCV定量標(biāo)準(zhǔn)品4需要但未提供的物品：1）核酸提取儀器及試劑：西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀（陜西械備20150054號(hào)），西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（陜西械備20140007號(hào)）。2）自備試驗(yàn)器材：真空采血管或含有EDTA抗凝劑的真空釆血管、無DNA酶、RNA酶的1.5mL離心管、PCR反應(yīng)管、移液器槍頭。注：定量標(biāo)準(zhǔn)品具體標(biāo)值參見試劑盒內(nèi)指示，不同批號(hào)試劑盒中各組分不可以互換。試劑盒濃度可溯源至WHOInternationalStandardforHCVNATNIBSCcode:14/150。未使用完的試劑繼續(xù)冷凍保存不影響其穩(wěn)定性，但試劑反復(fù)凍融不得超過三擴(kuò)增檢測(cè)儀器為具有FAM和HEX/VIC熒光通道的西安天隆科技有限公司的Gentier和AppliedBiosystems7500R固，或2000~4000rpm離心20分鐘，吸取分離出的血清，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管中備用。血漿樣本采集：采用EDTA抗凝（EDTA-K2、EDTA-K3、EDTA-Na2）的真空采血管或用一次性的無菌注射器抽取受檢者靜脈血2~4mL，注入含EDTA抗凝劑的無菌抗凝管中，2000~4000rpm離心20分鐘，吸取分離出的血漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心3.樣本保存：經(jīng)上述處理后的待測(cè)血清或血漿，可立即用于檢測(cè)，或-20℃±5℃保存不超過3個(gè)月，-70℃以下保存不超過2應(yīng)避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融不超過5次。（樣本核酸提取研究采用的是西安天隆科技有限公司的全自動(dòng)核酸提取儀（陜西械備從檢測(cè)試劑盒中取出HCV反應(yīng)混合液和HCV酶混合HCV反應(yīng)混合液HCV酶混合液總體積按n人份計(jì)算上述各試劑的用量，加入一適當(dāng)?shù)碾x心管中，混勻和樣品的洗脫液，蓋緊反應(yīng)管，轉(zhuǎn)移至PCR擴(kuò)增區(qū)。1121354），HCV強(qiáng)陽性質(zhì)控品Ct值應(yīng)小于20；HCV1.陰性樣本目標(biāo)基因（FAM）未檢出Ct值，且內(nèi)標(biāo)Ct值＜40。2.檢測(cè)樣本結(jié)果HCVRNA≥12IU/mL，且內(nèi)標(biāo)Ct值＜40，則報(bào)告為陽性，其中：a.若檢測(cè)樣本測(cè)定值在20IU/mL≤HCVRNA≤1.0×108IU/mL范圍內(nèi)，可直接報(bào)告定量結(jié)果。b.若檢測(cè)樣本HCVRNA＞1.0×108IU/mL，且擴(kuò)增曲線呈現(xiàn)S型，可直接報(bào)告為HCVRNA＞1.0×108IU/mL，若需要精確定量，可根據(jù)結(jié)果對(duì)樣本適當(dāng)稀釋，使其落入有效范圍內(nèi)，再重新檢測(cè)。c.若檢測(cè)樣本測(cè)定值介于12IU/mL≤HCVRNA＜20IU/mL之間，檢測(cè)值僅作定性判定。3.檢測(cè)樣本結(jié)果HCVRNA＜12IU/mL，且內(nèi)標(biāo)Ct值＜40，低于本試劑盒檢測(cè)下限，建議重復(fù)檢測(cè)該樣本；如果重復(fù)測(cè)定值HCVRNA≥12IU/mL，可報(bào)告陽性結(jié)果；如果重復(fù)測(cè)定值HCVRNA＜12IU/mL，則報(bào)告結(jié)果為低于試劑盒檢測(cè)下限，結(jié)果僅供參考；若內(nèi)標(biāo)測(cè)定無數(shù)值，則該樣本的檢測(cè)結(jié)果無效，應(yīng)當(dāng)排查原因，重復(fù)對(duì)該樣本檢測(cè)。1.本試劑盒檢測(cè)結(jié)果不能作為臨床確診的依據(jù)。對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。2.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送及保存質(zhì)量有關(guān)，其中任何失誤都將會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。3.因樣本量有限