五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究課件

五倍子體外抑菌實(shí)驗(yàn)研究五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究

前言

儀器與材料

實(shí)驗(yàn)方法技術(shù)路線步驟結(jié)果與結(jié)論討論目錄五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究五倍子(Gallachinensis),別名文蛤、百蟲倉、木附子等,五倍子為漆樹科植物鹽膚木、青麩楊或紅麩楊葉上的蟲癭，主要由五倍子蚜寄生而形成。秋季采摘，置沸水中略煮或蒸至表面呈灰色，殺死蚜蟲，取出，干燥。按外形不同，分為肚倍和角倍。作為傳統(tǒng)中藥,始載于《開寶本草》,具有斂肺降火、澀腸止瀉、固精縮尿、止汗、止血、解毒、斂瘡等多種臨床功效。五倍子主產(chǎn)于四川、貴州、云南、陜西、甘肅、湖北、廣西、湖南、河北、山西、廣東、安徽、福建、浙江、江西等地?，F(xiàn)選擇云南、陜西、湖南、河北、浙江五省五倍子進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)研究，旨在觀察不同地區(qū)五倍子抑菌效果。前言:五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究儀器與材料：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、綠膿桿菌均來源于寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院；MH培養(yǎng)基培養(yǎng)基及瓊脂購于杭州天和微生物試劑有限公司。恒溫?fù)u床（HS-200B，上海和呈）無菌操作臺(tái)（蘇凈集團(tuán)）超控超聲波清洗器（KQ-500DA型;昆山市超聲儀器有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9075A型;上海-恒科學(xué)儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R206;上海申升科技有限公司）；立式壓力蒸汽滅菌器（LDZX-50KBS;上海申安醫(yī)療器械廠）；冰箱五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究方法:2.1實(shí)驗(yàn)藥液的制備分別稱取各產(chǎn)地五倍子粉末25g（過10目篩）于相應(yīng)燒杯中，各量取70%的乙醇溶液250ml加入燒杯，超聲提取30min后分別用兩層紗布初步過濾后將濾液再次抽濾，濾渣再次提取合并兩次濾液，最后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后將濃縮后的藥液用25ml容量瓶定容放于冰箱保存?zhèn)溆谩?.2抑菌實(shí)驗(yàn)2.2.1菌液培養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)前所有試管培養(yǎng)皿錐形瓶等在高壓蒸汽滅菌鍋（121℃，0.12MP）內(nèi)經(jīng)過高溫消毒。取4支高溫滅菌好的試管貼好標(biāo)簽，分別加入3ml雙料MH培養(yǎng)液后各刮取一個(gè)菌落至相應(yīng)試管中，放于37℃恒溫?fù)u床（60w/min）培養(yǎng)16~18h使這些菌種進(jìn)行活化使細(xì)菌有較強(qiáng)的活力。取4支試管各加入6ml單料培養(yǎng)基貼好標(biāo)簽加2.2.2入60ul上述培養(yǎng)好的菌液于相應(yīng)試管中放入37℃恒溫?fù)u床（60w/min）培養(yǎng)4~6h將菌液保存于冰箱內(nèi)備用。五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究方法:2.2.2不同濃度藥液培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)菌：取202支在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅過菌的試管貼好標(biāo)簽，加入相應(yīng)倍半稀釋法稀釋好的藥液各1ml，加入相應(yīng)菌液100ul，放入恒溫?fù)u床培養(yǎng)16~18h。2.2.3瓊脂平板制備：

按說明書配置足量營養(yǎng)瓊脂，配好后經(jīng)高壓滅菌，待溫度稍降低在無菌操作臺(tái)內(nèi)將營養(yǎng)瓊脂倒入滅好菌的培養(yǎng)皿制備瓊脂平板備用。2.2.4抑菌效果檢測(cè)：

由于藥液本身有一定的渾濁度無法準(zhǔn)確觀察細(xì)菌生長狀況所以將菌液涂瓊脂平板內(nèi)培養(yǎng)取52個(gè)高壓滅菌好的瓊脂平板，在瓊脂平板上劃線將瓊脂平板平均劃分為四個(gè)區(qū)編號(hào)，將三中各試管藥液用接種環(huán)接種支瓊脂平板，放入搖床培養(yǎng)16~18h，最后觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果并記錄最小抑菌濃度。五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究技術(shù)路線：倍半稀釋法配成不同濃度五倍子粉末70%乙醇超聲提取培養(yǎng)液濾液含不同濃度藥物的培養(yǎng)液稀釋100倍搖床培養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)最小抑菌濃度細(xì)菌培養(yǎng)冷藏備用五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究步驟：

（一）提取：分別稱取個(gè)產(chǎn)地五倍子粉末25g（過10目篩）于相應(yīng)燒杯中各量取70%的乙醇溶液200ml加入燒杯超聲提取30min分別用兩層紗布初步過濾后將濾液再次抽濾的濾液重復(fù)2-4部操作合并兩次濾液后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮放于冰箱保存?zhèn)溆脤饪s后的藥液用25ml容量瓶定容備用（二）抑菌實(shí)驗(yàn)：（Ⅰ）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：按個(gè)培養(yǎng)基說明配置適量營養(yǎng)液將營養(yǎng)液、試管、培養(yǎng)皿、錐形瓶等試劑儀器高壓滅菌備用（Ⅱ）菌液培養(yǎng)：取4支試管貼好標(biāo)簽后分別加入3ml培養(yǎng)液各刮取一個(gè)菌落至相應(yīng)試管放于搖床培養(yǎng)16~18h五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究取4支試管各加入6ML單聊培養(yǎng)基貼好標(biāo)簽加入60ul培養(yǎng)好的菌液于相應(yīng)試管中放入搖床培養(yǎng)4~6h將菌液保存于冰箱內(nèi)備用（Ⅲ）不同濃度藥液培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)菌：a.取202支滅過菌的試管貼好標(biāo)簽b．加入相應(yīng)稀釋好的藥液c.加入相應(yīng)菌液100uld.放入搖床培養(yǎng)16~18h（Ⅳ）瓊脂平板制備：a.按說明書配置一定量營養(yǎng)瓊脂b.高壓滅菌c.待溫度稍降低將營養(yǎng)瓊脂倒入滅過菌的培養(yǎng)皿注意正規(guī)操作（Ⅴ）抑菌效果檢測(cè)：a.取52個(gè)四中制好的瓊脂平板平均分為四個(gè)區(qū)編號(hào)b.將三中各試管藥液用接種環(huán)接種支瓊脂平板c.放入搖床培養(yǎng)16~18hd.觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果并記錄五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究為測(cè)定不同產(chǎn)地五倍子抑菌效果選取云南、陜西、河南、湖南、浙江五個(gè)產(chǎn)地。將所提取藥液用倍半稀釋法配置成250ug/ml、125ug/ml、62.5ug/ml、31.25ug/ml、15.625ug/ml七種濃度。不同產(chǎn)地五倍子提取物對(duì)四種細(xì)菌的最小抑菌濃度如下表：結(jié)果與結(jié)論五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究

金黃色葡萄球菌大腸桿菌綠膿桿菌白色念珠菌河北A15.62531.250125.00062.500B15.62531.250125.00062.500浙江A15.62562.500125.00062.500B15.62562.50062.50015.625湖南A15.62562.500125.00031.250B15.62562.50062.50062.500陜西A31.25062.50062.50031.250B31.25062.500125.00015.625云南A<15.62562.50031.2531.250B<15.62531.250125.00031.250結(jié)果與結(jié)論五倍子體外抑菌試驗(yàn)研究五倍子中的主要有效成分為鞣質(zhì),我國藥典上收載的五倍子鞣質(zhì),稱為鞣酸(tannicacid),又叫單寧酸。它是倍酰葡萄糖的混合物,即葡萄糖上的羥基與沒食子酸所形成的酯類化合物的混