基本知識與技能

第1講

生物檢測技術(shù)

基本知識和基本技能黃雅琴

2基本內(nèi)容6.實(shí)驗(yàn)記錄與實(shí)驗(yàn)報(bào)告5.試劑配制與保存1.人員防護(hù)(重點(diǎn))2.安全用水、用電、用氣7.課堂總結(jié)3.實(shí)驗(yàn)室廢液處理4.器材的清洗與使用3生物檢測涉及到生物化學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等技術(shù)，這些技術(shù)大都用到很多有毒的、易爆的、高溫的及放射性的等化學(xué)試劑，而且操作過程也十分嚴(yán)格學(xué)習(xí)的必要性為了保證實(shí)驗(yàn)過程中人身安全、儀器安全及實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確4

一、人員防護(hù)567一、人員防護(hù)1在實(shí)驗(yàn)室工作時，任何時候都必須穿著連體衣、隔離服或工作服。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。2在進(jìn)行可能直接或意外接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。3在處理完感染性實(shí)驗(yàn)材料和動物后，以及在離開實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域前，都必須洗手。8一、人員防護(hù)4為了防止眼睛或面部受到潑濺物、碰撞物或人工紫外線輻射的傷害，必須戴安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護(hù)設(shè)備。5嚴(yán)禁穿著實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服離開實(shí)驗(yàn)室，（如去餐廳、咖啡廳、辦公室、圖書館、員工休息室和衛(wèi)生間）。6不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋子。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域儲存食品和飲料。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過的防護(hù)服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。97、實(shí)驗(yàn)時，皮膚如果被玻璃或利器割傷，先檢查傷口是否有玻璃碎片，若有玻璃碎片，需小心地拔出，然后用碘伏或生理鹽水消毒，貼上創(chuàng)可貼或進(jìn)行包扎，傷口深的要接受醫(yī)生的檢查處理。8、發(fā)生燒燙傷，宜盡早進(jìn)行，要以冷水沖洗15-30min或用冰塊冷敷，散熱止痛，傷處的衣褲襪之類應(yīng)剪開取下，不可剝脫。在傷口上涂以碘伏，小面積可自行包扎，大面積盡快送至醫(yī)院。

一、人員防護(hù)10119、除了高溫以外，液氮、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑、苯酚等物質(zhì)都會灼傷皮膚，應(yīng)注意不要接觸，尤其防止濺入眼中。酸5%NaHCO3甘油堿大量水沖洗飽和硼酸或3%醋酸

大量水沖洗

酚用浸了甘油和酒精混合液（7：3）的棉花除去污物

一、人員防護(hù)飽和硫酸鈉溶液濕敷1210、如果有毒物濺入口中，而沒有下咽，應(yīng)立即吐出，用大量清水沖洗口腔。如吞下毒物應(yīng)立即送醫(yī)院。如吸入有毒氣體，應(yīng)立即移至室外空氣新鮮的地方，解開衣領(lǐng)，不能進(jìn)行人工呼吸。有毒試劑，如溴化乙錠，聚丙烯酰胺，具有致癌危險(xiǎn)，要戴手套和口罩操作。

一、人員防護(hù)1311、實(shí)驗(yàn)室的輻射，主要是紫外線、X射線、放射性同位素等。其中，紫外線常用于實(shí)驗(yàn)室和超凈工作臺的滅菌，但人體長期反復(fù)接受紫外線照射，會導(dǎo)致皮膚灼傷，視力下降，甚至誘發(fā)皮膚癌和白內(nèi)障。特別是8-15周齡的發(fā)育期嬰兒，受到了強(qiáng)輻射，會增加先天性畸形的概率。

一、人員防護(hù)1412、如果發(fā)生觸電，迅速切斷電源，如果觸電是由斷裂、掉下的電線或漏電的電器造成的,可以用干燥的物品,如木棒、扁擔(dān)等,把電線挑開,或把電器推開。切斷電源之前千萬不能用手去拉傷者,否則救護(hù)者自己也會觸電。切斷電源后,要一面通知醫(yī)生前來救治,一面立即查看觸電者的情況。在等待醫(yī)生到來的時間里,應(yīng)進(jìn)行胸外心臟按壓和口對口人工呼吸。心肺復(fù)蘇搶救要爭分奪秒,不能猶豫遲疑,不能坐等,也應(yīng)避免不必要的搬運(yùn)病人,在醫(yī)生到來之前就應(yīng)開始搶救措施。

一、人員防護(hù)1516二、安全用水、用電、用氣

------------------用水1、實(shí)驗(yàn)過程中注意蒸餾水和雙蒸水的制備過程及儲存，防止水被污染，同時保持儀器的正常運(yùn)轉(zhuǎn)和安全。2、用水完畢關(guān)閉水龍頭。若實(shí)驗(yàn)室停水，一定要關(guān)閉水龍頭。3、用水要遠(yuǎn)離電源開關(guān)以及用電設(shè)備，以防漏電。17181、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的電氣設(shè)備的安裝和使用管理，必須符合安全用電管理規(guī)定。2、手上有水或潮濕，請勿接觸電器用品或設(shè)備，嚴(yán)禁使用水槽旁的電器插座，防止漏電或觸電。3、必須掌握實(shí)驗(yàn)室的儀器，設(shè)備的性能和操作方法，嚴(yán)格按操作規(guī)程操作。設(shè)備用畢，一定要關(guān)閉電源開關(guān)，拔掉電源插座。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電194、電器插座請勿接太多插頭，以免電流負(fù)荷過大，引起火災(zāi)。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電201、使用氣瓶時，嚴(yán)格按照說明書上的正確順序打開，開啟氣門時應(yīng)站在氣壓表的一側(cè)，不能對準(zhǔn)總閥，以防閥門沖出，使用完畢，按順序關(guān)閉閥門。2、氣瓶內(nèi)氣體不可用盡，以防倒灌。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電213、高壓滅菌鍋使用注意事項(xiàng)：⊙應(yīng)由受過良好培訓(xùn)的人員負(fù)責(zé)高壓滅菌器的操作和日常維護(hù)。⊙每次使用前，檢查水位，加入蒸餾水到正常水位線?！言诖蜷_蓋子前，確認(rèn)壓力已歸于“0/npa”以下?！阉幸邏簻缇奈锲范紤?yīng)放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中；滅菌器柜腔裝載要松散，以便蒸汽可以均勻作用于裝載物?！迅邏簻缇后w時，由于取出液體時可能因過熱而沸騰，一定要選擇慢排氣，且要小心，以防被燙傷?！褢?yīng)當(dāng)注意保證高壓滅菌器的安全閥沒有被高壓滅菌物品中的紙等堵塞。二、安全用水、用電、用氣

------------------用電22三、實(shí)驗(yàn)室廢液處理化學(xué)性污染生物性污染放射性污染：同位素標(biāo)記探針有機(jī)物污染無機(jī)物污染：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿的污染，重金屬污染，氰化物污染等。其中汞、砷、鉛、鎘、鉻等重金屬的毒性不僅強(qiáng)，且有在人體中有蓄積性。有機(jī)試劑污染：有機(jī)溶劑有機(jī)樣品污染：如農(nóng)藥、黃曲霉毒素、亞硝胺等。生物廢棄物污染：檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本，如血液、尿、糞便、痰液和嘔吐物等；檢驗(yàn)用品，如實(shí)驗(yàn)器材、細(xì)菌培養(yǎng)基和細(xì)菌陽性標(biāo)本等。生物細(xì)菌毒素污染：生物實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)設(shè)備設(shè)計(jì)不完善或?qū)嶒?yàn)過程個人安全保護(hù)漏洞，會使生物細(xì)菌毒素?cái)U(kuò)散傳播，帶來污染，甚至帶來嚴(yán)重不良后果。23化學(xué)類廢物：一般的有毒氣體可通過通風(fēng)櫥或通風(fēng)管道，經(jīng)空氣稀釋排出。大量的有毒氣體必須通過與氧充分燃燒或吸收處理后才能排放。

廢液應(yīng)根據(jù)其化學(xué)特性選擇合適的容器和存放地點(diǎn)，通過密閉容器存放，不可混合貯存，容器標(biāo)簽必須標(biāo)明廢物種類、貯存時間，定期處理。一般廢液可通過酸堿中和、混凝沉淀、次氯酸鈉氧化處理后排放，有機(jī)溶劑廢液應(yīng)根據(jù)性質(zhì)進(jìn)行回收。三、實(shí)驗(yàn)室廢液處理24生物類廢物：液體廢物一般可加漂白粉進(jìn)行氯化消毒處理。固體可燃性廢物分類收集、處理、一律及時焚燒。固體非可燃性廢物分類收集，可加漂白粉進(jìn)行氯化消毒處理。滿足消毒條件后作最終處置。

1.一次性使用的制品如手套、帽子、工作物、口罩等使用后放入污物袋內(nèi)集中燒毀。

2.可重復(fù)利用的玻璃器材如玻片、吸管、玻瓶等可以用1000-3000mg/L有效氯溶液浸泡2-6h．然后清洗重新使用，或者廢棄。

3.盛標(biāo)本的玻璃、塑料、搪瓷容器可煮沸15min.或者用1000mg/L有效氯漂白粉澄清液浸泡2-6h，消毒后用洗滌劑及流水刷洗、瀝干；用于微生物培養(yǎng)的，用壓力蒸汽滅菌壓力滅菌30min，趁熱將瓊脂倒棄處理。

5.尿、唾液、血液等生物樣品，加漂白粉攪拌后作用2-4h，倒入化糞池或廁所?；蛘哌M(jìn)行焚燒處理。三、實(shí)驗(yàn)室廢液處理25放射性廢棄物：

一般實(shí)驗(yàn)室的放射性廢棄物為中低水平放射性廢棄物，將實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的放射性廢物收集在專門的污物桶內(nèi)，桶的外部標(biāo)明醒目的標(biāo)志半衰期短(如：碘131、磷32等)的廢棄物，用專門的容器密閉后，放置于專門的貯存室，放置十個半衰期后排放或者焚燒處理。半衰期較長(如：鐵59、鈷60等)的廢棄物，液體可用蒸發(fā)、離子交換、混凝劑共沉淀等方法濃縮，裝入容器集中埋于放射性廢物坑內(nèi)。三、實(shí)驗(yàn)室廢液處理26四、器材的清洗與使用1清洗①玻璃器材：初次使用：新的玻璃儀器表面常附著有游離的堿性物質(zhì)，可先用肥皂水洗刷再用自來水洗凈，然后浸泡在1%-2%鹽酸溶液中過夜（不少于4h），再用自來水沖洗，最后用蒸餾水沖洗3次，在烘箱內(nèi)烘干備用。已使用過：先用自來水洗刷附著的試劑、蛋白質(zhì)等物質(zhì)，再選用大小合適的毛刷蘸取洗衣粉，將器材內(nèi)外（特別是內(nèi)壁）細(xì)心刷洗，用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗3次，烘箱內(nèi)烘干備用。需要滅菌的器材，用牛皮紙或報(bào)紙包裝好，于121℃高壓蒸汽滅菌21min，取出于烘箱內(nèi)烘干備用。27②塑料器材：多為一次性使用的，也有反復(fù)使用的。自來水浸泡沖洗→晾干→3%HCl或2%NaOH溶液浸泡過夜→自來水沖洗→雙蒸水沖洗3次→晾干→紫外線照射滅菌四、器材的清洗與使用28四、器材的清洗與使用③橡皮器材：自來水浸泡沖洗→洗衣粉加熱煮沸10min→蒸餾水煮沸2次（每次15min）→單蒸水沖洗3次→晾干→紫外線照射滅菌29四、器材的清洗與使用④金屬器材：

用自來水沖洗干凈，蒸餾水沖洗3次，烘干后用牛皮紙或報(bào)紙包裝好，于121℃高壓蒸汽滅菌21min，取出于烘箱內(nèi)烘干備用。

常見的有：接種針，鑷子，解剖刀等30四、器材的清洗與使用2、使用常見的有：量筒、燒杯、試管、容量瓶、培養(yǎng)皿、移液管、移液器、干燥箱、離心機(jī)、天平、酶標(biāo)儀、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、電泳儀、PCR儀、光學(xué)顯微鏡等。31觀看視頻學(xué)習(xí)移液器的使用四、器材的清洗與使用32五、試劑配制與保存1、稱量

固體試劑用玻璃紙，在托盤天平和電子天平上稱取。

液體試劑或母液根據(jù)需求量的大小，用移液器、移液管或量筒量取。觀看視頻學(xué)習(xí)電子天平的使用33五、試劑配制與保存2、配制試劑配制中的溶劑一般為蒸餾水，特殊試劑或非水為溶劑的試劑要注明清楚。蒸餾水的水質(zhì)必須符合規(guī)定，無污染。將水加入試劑，用玻璃棒或磁力攪拌，耐高溫穩(wěn)定的試劑也可以加熱助溶。343、滅菌一般的化學(xué)試劑、培養(yǎng)基或其它試劑，要用高壓滅菌鍋濕熱滅菌20-30min?；钚晕镔|(zhì)，如酶液、細(xì)胞培養(yǎng)液、維生素及抗生素等的配制需要通過在超凈臺上過濾滅菌。五、試劑配制與保存354、試劑的保管①所有藥品都有明顯標(biāo)簽，標(biāo)明藥品名稱、質(zhì)量規(guī)格及配制日期；最好還有危險(xiǎn)性質(zhì)的明顯標(biāo)志。標(biāo)簽日久會受腐蝕氣體損壞，甚至全部剝落，如果不及時換新標(biāo)簽，就會變成無名物，有誤用的危險(xiǎn)。注上生產(chǎn)日期或配制日期，對于易變質(zhì)物可以正確判定應(yīng)否銷毀。②分類存放，互相作用藥品不能混放，必須隔離存放。易燃物、易爆物及強(qiáng)氧化劑只能少量存放。③貯存室或藥柜必須保持整齊清潔。④經(jīng)常檢查藥品瓶子或其他包裝完整情況，標(biāo)簽是否完整，有無其他危險(xiǎn)潛伏。⑤無名物、變質(zhì)物要及時清理銷毀。⑥分子生物學(xué)試劑一般要低溫冰箱保存，必要時要冷凍保存，為了避免反復(fù)凍融，一般分裝成小管儲存。五、試劑配制與保存36危險(xiǎn)藥物分類存放的原則及存放要求：①易揮發(fā)藥品：遠(yuǎn)離熱源火源，于避光陰涼處保存，通風(fēng)良好，不能裝滿。②腐蝕性液體：放于底下，以免不慎跌下，灑出發(fā)生燙傷事故。③發(fā)生有毒氣體或煙霧的藥品：存于通風(fēng)櫥中，并在其中量取。④劇毒藥品：鎖上。⑤致癌藥品：有致癌藥品的明顯標(biāo)志，鎖上。⑥互相作用的藥品：隔離存放。⑦特別保存的物品：金屬鈉、鉀等堿金屬，貯于煤油中。黃磷，貯于水中。吸潮物、易水解物，貯于干燥處，封口應(yīng)嚴(yán)密。易氧化易分解物，存于陰涼暗處，用棕色瓶或瓶外包黑紙盛裝。但雙氧水不要用棕色瓶（有鐵質(zhì)促使分解）裝，最好用塑膠瓶裝外包黑紙。⑧放射性物品未經(jīng)幅射物質(zhì)管理部門批準(zhǔn)，不得存放使用！五、試劑配制與保存37六、實(shí)驗(yàn)記錄與實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)記錄：