DB36T-糧食中黃曲霉毒素B1,玉米赤霉烯酮嘔吐毒素的檢測(cè) 量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法

ICS?FORMTEXT點(diǎn)擊此處添加ICS號(hào)FORMTEXT點(diǎn)擊此處添加中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)分類號(hào)FORMTEXT?????DBFORMTEXT??DBFORMTEXTXX/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????FORMTEXT糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的檢測(cè)量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法FORMTEXTDeterminationofaflatoxinB1,zearalenoneanddeoxynivalenolingrainQuantumdotmicrospherelateralflowimmunoassayFORMTEXT點(diǎn)擊此處添加與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識(shí)FORMDROPDOWNFORMTEXT?????FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施FORMTEXT????????發(fā)布DBXX/XXXXX—XXXX前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設(shè)備 27試樣制備 28檢測(cè)步驟 39結(jié)果表述 310其他 4前??言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出并歸口。本文件起草單位：南昌大學(xué)、江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局、江西省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證總院、江西維邦生物科技有限公司本文件主要起草人：糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的檢測(cè)量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法范圍本文件規(guī)定了糧食中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的量子點(diǎn)微球熒光免疫層析檢測(cè)方法。本文件適用于大米、糙米、玉米、小麥等糧食及其制品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的快速檢測(cè)。本方法檢測(cè)黃曲霉毒素B1的檢出限為1μg/kg，定量限為2μg/kg；檢測(cè)玉米赤霉烯酮的檢出限為10μg/kg，定量限為20μg/kg；檢測(cè)嘔吐毒素的檢出限為50μg/kg，定量限為150μg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2761食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量GB/T5491糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T27417合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理本方法以量子點(diǎn)微球?yàn)闊晒鈽?biāo)記物，基于競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析技術(shù)原理，通過(guò)熒光信號(hào)讀取儀進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量，對(duì)黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素進(jìn)行半定量或定量檢測(cè)。試劑和材料除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純水：應(yīng)符合GB/T6682，二級(jí)水。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99％，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。乙腈（C2H3N）。氯化鈉（NaCl）。氯化鉀（KCl）。磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。樣品提取液（84％乙腈-水溶液）：吸取84mL乙腈（5.3），用水（5.1）定容至100mL，混勻。樣品稀釋液：分別稱取氯化鈉（5.4）8g、氯化鉀（5.5）0.2g、磷酸氫二鈉（5.6）1.44g、磷酸二氫鉀（5.7）0.2g于1000mL燒杯中，加水（5.1）充分?jǐn)嚢枞芙夂蠖ㄈ葜?000mL。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存液（1g/L）：準(zhǔn)確稱取真菌毒素（5.2）0.01g（精確至0.0001g），用甲醇（5.3）溶解定容至10mL。-20℃冷凍避光保存，有效期12個(gè)月。儀器和設(shè)備分析天平：感量分別為0.01g和0.01mg。微量移液器：量程為20～200μL、100～1000μL和1～10mL。旋渦混合器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。恒溫孵育器：設(shè)定溫度誤差不超過(guò)±1度。熒光免疫分析儀：激發(fā)波長(zhǎng)為360±5nm，發(fā)射波長(zhǎng)為610±5nm。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。離心管：1.5mL和50mL。分樣篩：20目。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素量子點(diǎn)微球熒光免疫層析快速檢測(cè)卡（含ID卡，內(nèi)設(shè)對(duì)應(yīng)批次標(biāo)準(zhǔn)曲線）。試樣制備分樣和粉碎將原始樣品充分混勻，按照GB/T5491方法中的四分樣方法進(jìn)行分樣，用粉碎機(jī)粉碎后過(guò)20目分樣篩。試樣前處理稱取5±0.05g粉碎樣品于50mL離心管中，加入25mL樣品提取液（5.8），漩渦震蕩混勻2min，4000rpm離心2min或靜置2分鐘（無(wú)離心機(jī)情況下）。檢測(cè)黃曲霉毒素B1：取50μL離心后上清液加入950μL樣品稀釋液（5.9）混勻后用于檢測(cè)。檢測(cè)玉米赤霉烯酮：取50μL離心后上清液加入700μL樣品稀釋液（5.9）混勻后用于檢測(cè)。檢測(cè)嘔吐毒素：取50μL離心后上清液加入700μL樣品稀釋液（5.9）混勻后用于檢測(cè)。注：不同廠家檢測(cè)卡所用的樣品前處理方法可能不同，應(yīng)按照產(chǎn)品使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)行操作。檢測(cè)步驟測(cè)試前打開(kāi)熒光免疫分析儀（6.5），確認(rèn)試劑盒中的ID卡與試劑盒的批號(hào)是否匹配后插入ID卡，在儀器測(cè)試界面點(diǎn)擊“讀ID卡/讀項(xiàng)目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點(diǎn)擊“確認(rèn)”即可使用。將恒溫孵育器（6.4）開(kāi)機(jī)，待溫度升至37℃即可使用。從包裝鋁箔袋中取出檢測(cè)卡，在半小時(shí)內(nèi)使用。將檢測(cè)卡平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測(cè)液于檢測(cè)卡的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應(yīng)10min。反應(yīng)時(shí)間結(jié)束后立即將檢測(cè)卡插入讀取儀中，點(diǎn)擊儀器界面的“測(cè)試”，儀器會(huì)自動(dòng)給出定量測(cè)試結(jié)果，15min后測(cè)試無(wú)效。注：不同廠家讀卡儀所用儀器界面設(shè)置可能不同，應(yīng)按照儀器使用說(shuō)明中規(guī)定方法進(jìn)行。結(jié)果表述樣品中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的含量由熒光分析儀自動(dòng)計(jì)算并顯示，單位為微克/千克（μg/kg）。其他本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB5009.209《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定》和GB5009.111《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?；苌锏臏y(cè)定》。注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)附錄A。附錄A（資料性）產(chǎn)品性能指標(biāo)計(jì)算A.1檢出限和定量限通過(guò)對(duì)20個(gè)獨(dú)立的空白樣品進(jìn)行測(cè)定，檢出限以空白樣品20次測(cè)定結(jié)果的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算；定量限以空白樣品20次測(cè)定結(jié)果的均值加10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算。A.2準(zhǔn)確度綜合考慮目標(biāo)分析物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量值或禁用目標(biāo)分析物的參比方法定量限，制備低、中、高三個(gè)濃度水平的盲樣，每個(gè)濃度水平進(jìn)行至少6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。三個(gè)濃度水平的平均加標(biāo)回收率均應(yīng)在70-130%（需討論確定）。A.3重復(fù)性采用三批驗(yàn)證產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，每批至少6次重復(fù)測(cè)定中等濃度水平的樣品，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于15%。A.4特異性目標(biāo)分析物及其結(jié)構(gòu)類似物的標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液配制成系列梯度濃度，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出IC5