生物制藥過(guò)程中的細(xì)胞系構(gòu)建與優(yōu)化考核試卷

生物制藥過(guò)程中的細(xì)胞系構(gòu)建與優(yōu)化考核試卷考生姓名：答題日期：得分：判卷人：

本次考核旨在考察考生在生物制藥過(guò)程中，對(duì)細(xì)胞系構(gòu)建與優(yōu)化的掌握程度，包括細(xì)胞系的篩選、培養(yǎng)、鑒定、保存及在生物制藥中的應(yīng)用等方面，以評(píng)估考生是否具備相關(guān)理論知識(shí)和實(shí)踐操作能力。

一、單項(xiàng)選擇題（本題共30小題，每小題0.5分，共15分，在每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是符合題目要求的）

1.細(xì)胞系構(gòu)建過(guò)程中，以下哪項(xiàng)不是常見(jiàn)的篩選方法？（）

A.抗藥性篩選

B.限制性內(nèi)切酶酶切

C.流式細(xì)胞術(shù)篩選

D.磁珠分離

2.在細(xì)胞培養(yǎng)中，以下哪種物質(zhì)不是維持細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的？（）

A.葡萄糖

B.胰蛋白胨

C.氨基酸

D.氧氣

3.細(xì)胞凍存時(shí)，以下哪種保護(hù)劑最為常用？（）

A.DMSO

B.甘油

C.乙醇

D.丙酮

4.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪項(xiàng)不是細(xì)胞污染的常見(jiàn)原因？（）

A.培養(yǎng)基污染

B.儀器污染

C.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境

D.培養(yǎng)基配比不當(dāng)

5.以下哪種細(xì)胞培養(yǎng)方法適用于大規(guī)模生產(chǎn)？（）

A.微生物培養(yǎng)

B.組織培養(yǎng)

C.細(xì)胞株培養(yǎng)

D.細(xì)胞懸浮培養(yǎng)

6.以下哪種細(xì)胞株在生物制藥中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

7.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪種方法可用于篩選具有特定表型的細(xì)胞？（）

A.熒光素酶報(bào)告基因

B.抗體檢測(cè)

C.RT-PCR

D.Westernblot

8.在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞活力？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

9.細(xì)胞凍存時(shí)，以下哪個(gè)溫度最為適宜？（）

A.-20℃

B.-80℃

C.-196℃

D.4℃

10.以下哪種細(xì)胞死亡方式與細(xì)胞凋亡無(wú)關(guān)？（）

A.凋亡

B.壞死

C.自噬

D.線粒體途徑

11.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種物質(zhì)不是細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子？（）

A.金屬離子

B.糖類

C.氨基酸

D.有機(jī)酸

12.以下哪種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可用于基因編輯？（）

A.CRISPR/Cas9

B.TALEN

C.ZFN

D.重組DNA技術(shù)

13.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞周期？（）

A.流式細(xì)胞術(shù)

B.細(xì)胞計(jì)數(shù)

C.染色體分析

D.熒光顯微鏡觀察

14.以下哪種細(xì)胞株在腫瘤研究中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

15.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種物質(zhì)不是細(xì)胞生長(zhǎng)因子？（）

A.EGF

B.bFGF

C.HGF

D.TNF-α

16.以下哪種細(xì)胞株在病毒疫苗生產(chǎn)中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

17.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的染色體穩(wěn)定性？（）

A.流式細(xì)胞術(shù)

B.Southernblot

C.G-banding

D.RT-PCR

18.以下哪種細(xì)胞死亡方式與細(xì)胞自噬無(wú)關(guān)？（）

A.凋亡

B.壞死

C.自噬

D.線粒體途徑

19.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

20.以下哪種細(xì)胞株在免疫學(xué)研究應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

21.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種物質(zhì)不是細(xì)胞外基質(zhì)成分？（）

A.纖維連接蛋白

B.膠原蛋白

C.纖維蛋白

D.透明質(zhì)酸

22.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的基因表達(dá)？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

23.以下哪種細(xì)胞株在神經(jīng)科學(xué)研究中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

24.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

25.以下哪種細(xì)胞株在免疫治療中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

26.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的藥物敏感性？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

27.以下哪種細(xì)胞株在干細(xì)胞研究中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

28.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞因子受體的表達(dá)？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

29.以下哪種細(xì)胞株在基因治療中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

30.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪種方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的代謝活性？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

二、多選題（本題共20小題，每小題1分，共20分，在每小題給出的選項(xiàng)中，至少有一項(xiàng)是符合題目要求的）

1.細(xì)胞系構(gòu)建過(guò)程中，以下哪些是常見(jiàn)的細(xì)胞篩選方法？（）

A.抗藥性篩選

B.限制性內(nèi)切酶酶切

C.流式細(xì)胞術(shù)篩選

D.磁珠分離

2.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，以下哪些因素會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)？（）

A.培養(yǎng)基成分

B.溫度

C.氧氣濃度

D.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境

3.細(xì)胞凍存時(shí)，以下哪些措施有助于保護(hù)細(xì)胞？（）

A.使用合適的保護(hù)劑

B.控制凍存溫度

C.使用無(wú)菌技術(shù)

D.短時(shí)間內(nèi)完成凍存過(guò)程

4.細(xì)胞培養(yǎng)中，以下哪些是常見(jiàn)的細(xì)胞污染？（）

A.細(xì)菌污染

B.真菌污染

C.病毒污染

D.螨蟲(chóng)污染

5.以下哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞活力？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.細(xì)胞計(jì)數(shù)

D.熒光顯微鏡觀察

6.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，以下哪些是細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子？（）

A.金屬離子

B.糖類

C.氨基酸

D.有機(jī)酸

7.以下哪些細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可用于基因編輯？（）

A.CRISPR/Cas9

B.TALEN

C.ZFN

D.重組DNA技術(shù)

8.細(xì)胞培養(yǎng)中，以下哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞周期？（）

A.流式細(xì)胞術(shù)

B.細(xì)胞計(jì)數(shù)

C.染色體分析

D.熒光顯微鏡觀察

9.以下哪些細(xì)胞株在腫瘤研究中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

10.細(xì)胞培養(yǎng)中，以下哪些是細(xì)胞外基質(zhì)成分？（）

A.纖維連接蛋白

B.膠原蛋白

C.纖維蛋白

D.透明質(zhì)酸

11.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的基因表達(dá)？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

12.以下哪些細(xì)胞株在神經(jīng)科學(xué)研究中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

13.細(xì)胞培養(yǎng)中，以下哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

14.以下哪些細(xì)胞株在免疫治療中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

15.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的藥物敏感性？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

16.以下哪些細(xì)胞株在干細(xì)胞研究中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

17.細(xì)胞培養(yǎng)中，以下哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞因子受體的表達(dá)？（）

A.Westernblot

B.Northernblot

C.RT-PCR

D.Southernblot

18.以下哪些細(xì)胞株在基因治療中應(yīng)用最為廣泛？（）

A.293細(xì)胞

B.HeLa細(xì)胞

C.HUVEC細(xì)胞

D.3T3細(xì)胞

19.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，以下哪些方法可用于檢測(cè)細(xì)胞的代謝活性？（）

A.比色法

B.流式細(xì)胞術(shù)

C.電鏡觀察

D.Southernblot

20.以下哪些是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的質(zhì)量控制措施？（）

A.定期檢測(cè)細(xì)胞活力

B.定期進(jìn)行細(xì)胞污染檢測(cè)

C.定期進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)

D.定期更換培養(yǎng)基

三、填空題（本題共25小題，每小題1分，共25分，請(qǐng)將正確答案填到題目空白處）

1.細(xì)胞系構(gòu)建的第一步通常是______。

2.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，維持細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的培養(yǎng)基通常含有______、______和______。

3.細(xì)胞凍存時(shí)，常用的保護(hù)劑有______和______。

4.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞污染的主要途徑包括______、______和______。

5.細(xì)胞培養(yǎng)的適宜溫度通常為_(kāi)_____℃。

6.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，pH值的理想范圍是______。

7.細(xì)胞培養(yǎng)的氧氣需求通常較高，因?yàn)榧?xì)胞需要______。

8.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，常用的篩選方法包括______和______。

9.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞周期分為_(kāi)_____、______、______和______四個(gè)階段。

10.細(xì)胞凋亡過(guò)程中，細(xì)胞膜會(huì)形成______。

11.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，常見(jiàn)的細(xì)胞死亡方式包括______、______和______。

12.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞活力檢測(cè)常用的方法有______和______。

13.細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中，維生素和激素的作用是______。

14.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要包括______、______、______和______。

15.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞密度達(dá)到______時(shí)，需要傳代。

16.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，為了防止污染，通常需要______。

17.細(xì)胞凍存時(shí)，凍存管應(yīng)置于______溫度保存。

18.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，無(wú)菌操作是防止______的關(guān)鍵。

19.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，常用的抗生素有______、______和______。

20.細(xì)胞培養(yǎng)中，常用的抗生素抑菌濃度為_(kāi)_____。

21.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞層稱為_(kāi)_____。

22.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞密度達(dá)到______時(shí)，稱為單層細(xì)胞。

23.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞傳代是指將______。

24.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞凍存時(shí)，解凍后的細(xì)胞需要______。

25.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇時(shí)間一般為_(kāi)_____。

四、判斷題（本題共20小題，每題0.5分，共10分，正確的請(qǐng)?jiān)诖痤}括號(hào)中畫(huà)√，錯(cuò)誤的畫(huà)×）

1.細(xì)胞系構(gòu)建過(guò)程中，所有細(xì)胞都會(huì)發(fā)生突變。（）

2.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基的pH值對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有影響。（）

3.細(xì)胞凍存時(shí)，DMSO比甘油更適合作為保護(hù)劑。（）

4.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞污染可以通過(guò)肉眼觀察發(fā)現(xiàn)。（）

5.細(xì)胞培養(yǎng)的適宜溫度范圍通常為25-37℃。（）

6.細(xì)胞培養(yǎng)中，氧氣濃度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有影響。（）

7.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，抗藥性篩選是唯一的方法。（）

8.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞活力可以通過(guò)MTT法檢測(cè)。（）

9.細(xì)胞凋亡是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過(guò)程，與壞死不同。（）

10.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞密度達(dá)到90%時(shí)，需要傳代。（）

11.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，無(wú)菌操作是防止細(xì)胞污染的唯一方法。（）

12.細(xì)胞凍存時(shí)，凍存管應(yīng)置于室溫保存。（）

13.細(xì)胞培養(yǎng)中，抗生素的添加可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。（）

14.細(xì)胞系構(gòu)建時(shí)，常用的抗生素有青霉素和鏈霉素。（）

15.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞層稱為懸浮細(xì)胞層。（）

16.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞傳代是指將培養(yǎng)的細(xì)胞分裝到新的培養(yǎng)瓶中。（）

17.細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞活力越低。（）

18.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇時(shí)間一般為30分鐘。（）

19.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇應(yīng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。（）

20.細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇后，細(xì)胞通常需要24小時(shí)恢復(fù)期。（）

五、主觀題（本題共4小題，每題5分，共20分）

1.請(qǐng)簡(jiǎn)述細(xì)胞系構(gòu)建的基本步驟，并說(shuō)明每個(gè)步驟的關(guān)鍵點(diǎn)。

2.在生物制藥過(guò)程中，為什么需要對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行優(yōu)化？請(qǐng)列舉至少三種優(yōu)化方法及其目的。

3.請(qǐng)解釋細(xì)胞系構(gòu)建過(guò)程中可能遇到的常見(jiàn)問(wèn)題及其解決方法。

4.結(jié)合實(shí)際案例，說(shuō)明細(xì)胞系構(gòu)建與優(yōu)化在生物制藥中的應(yīng)用及其重要性。

六、案例題（本題共2小題，每題5分，共10分）

1.案例題：某生物制藥公司正在進(jìn)行一種新型疫苗的研發(fā)，需要構(gòu)建一個(gè)能夠高效表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞系。請(qǐng)根據(jù)以下信息，回答以下問(wèn)題：

-該公司選擇了HEK293細(xì)胞作為構(gòu)建細(xì)胞系的起始細(xì)胞。

-研究人員將含有目標(biāo)抗原基因的重組質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)導(dǎo)入HEK293細(xì)胞。

-轉(zhuǎn)染后，研究人員通過(guò)篩選方法篩選出穩(wěn)定表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞克隆。

問(wèn)題：

a.請(qǐng)簡(jiǎn)述HEK293細(xì)胞作為構(gòu)建細(xì)胞系的起始細(xì)胞的原因。

b.在篩選穩(wěn)定表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞克隆時(shí)，研究人員可能會(huì)采用哪些方法？請(qǐng)至少列舉兩種方法并簡(jiǎn)述其原理。

2.案例題：某研究團(tuán)隊(duì)正在進(jìn)行一種抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)，該藥物需要通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行活性篩選。請(qǐng)根據(jù)以下信息，回答以下問(wèn)題：

-研究團(tuán)隊(duì)從腫瘤組織中分離出原代腫瘤細(xì)胞，并成功建立了原代細(xì)胞系。

-為了篩選出對(duì)腫瘤細(xì)胞具有抑制作用的化合物，研究團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了一種基于細(xì)胞增殖抑制的篩選方法。

問(wèn)題：

a.請(qǐng)簡(jiǎn)述從腫瘤組織中分離原代腫瘤細(xì)胞的過(guò)程。

b.在基于細(xì)胞增殖抑制的篩選方法中，研究人員可能會(huì)如何評(píng)估化合物的活性？請(qǐng)簡(jiǎn)述評(píng)估方法及其依據(jù)。

標(biāo)準(zhǔn)答案

一、單項(xiàng)選擇題

1.B

2.D

3.A

4.D

5.D

6.B

7.A

8.A

9.C

10.B

11.B

12.A

13.A

14.B

15.B

16.A

17.C

18.C

19.A

20.B

21.A

22.A

23.D

24.A

25.B

26.A

27.D

28.A

29.B

30.A

二、多選題

1.A,C,D

2.A,B,C,D

3.A,B,C

4.A,B,C

5.A,B,C

6.A,D

7.A,B,C

8.A,C

9.A,B

10.A,B,C,D

11.A,B,C

12.A,B,C

13.A,B,C

14.A,B,C,D

15.A,B,C

16.A,B,C,D

17.A,B,C

18.A,B,C

19.A,B,C

20.A,B,C

三、填空題

1.細(xì)胞分離

2.氨基酸、維生素、激素

3.DMSO,甘油

4.培養(yǎng)基污染,儀器污染,實(shí)驗(yàn)室環(huán)境

5.37

6.6.5-7.5

7.有氧呼吸

8.抗藥性篩選,限制性內(nèi)切酶酶切

9.G1期,S期,G2期,M期

10.空泡

11.凋亡,壞死,自噬

12.比色法,流式細(xì)胞術(shù)

13.促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖

14.糖類,脂類,氨基酸,