天然藥物化學(xué)第五章 黃酮類化合物

1、,第五章 黃酮類化合物 (flanonoids),（一）提取 黃酮苷類以及極性稍大的苷元（如羥基黃酮等），一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇提取。一些多糖苷類可用沸水提取。在提取花青素類化合物時，可加入少量酸（0.1%鹽酸，應(yīng)當(dāng)慎用，避免發(fā)生水解）。 大多數(shù)黃酮苷元宜用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等中極性溶劑提取，而對多甲氧基黃酮類游離苷元，甚至可用苯等低極性溶劑進(jìn)行提取。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,對得到的粗提物可進(jìn)行下列精制處理，常用方法有： （一）溶劑萃取法 利用黃酮類化合物與混入的雜質(zhì)極性不同，選用不同溶劑進(jìn)行地萃取可達(dá)到精制純化目的。例如植物葉子的醇浸液，可用石油醚處理，以便除去葉綠素、胡蘿

2、卜素等脂溶性色素。而某些藥料水溶液則可加入多倍量濃醇，以沉淀除去蛋白質(zhì)、多糖類等水溶性雜質(zhì)。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,有時溶劑萃取過程也可以用逆流分配法連續(xù)進(jìn)行。常用的溶劑系統(tǒng)有：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚等。 溶劑萃取過程在除去雜質(zhì)的同時，往往還可以收到分離苷和苷元或極性苷元與非極性苷元的效果。 （二）堿提取酸沉淀法 黃酮苷類雖有一定極性，可溶于水，但卻難溶于酸性水，易溶于堿性水，故可用堿性水提取，再于堿水提取液中加入酸，黃酮苷類即可沉淀析出。此法簡便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷的提取都應(yīng)用了這個方法。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,茲以從槐米中提取蘆丁為例說明該法的操作過程。

3、槐米（槐樹Sophora japonica L. 花蕾）加約6倍量水，煮沸，在攪拌下緩緩加入石灰乳至pH8-9，在此pH條件下微沸20-30分鐘，趁熱抽濾，殘渣同上再加4倍水煎1次，趁熱抽濾。合并濾液在60-70下，用濃鹽酸調(diào)至pH為5，攪勻，靜置24小時，抽濾。沉淀物水洗至中性，60干燥得蘆丁粗品，于水中重結(jié)晶，70-80干燥得蘆丁純品。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,在用堿酸法進(jìn)行提取純化時，應(yīng)當(dāng)注意所用堿液濃度不宜過高，以免在強堿性下，尤其加熱破壞黃酮母核。在加酸酸化時，酸性也不宜過強，以免生成（金羊）鹽，致使析出的黃酮類化合物又重新溶解，降低產(chǎn)品收率。 當(dāng)藥料中含有大量果膠、粘液等不

4、溶性雜質(zhì)時，如花、果類藥材，宜用石灰乳或石灰水代替其它堿性水溶液進(jìn)行提取，以使上述含羥基的雜質(zhì)生成鈣鹽沉淀，不致溶出。這也有利于黃酮類化合物的純化處理。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,（三）碳粉吸附法 主要適于苷類的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至定性檢查上清液無黃酮反應(yīng)時為止。過濾，收集吸收炭末，依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液進(jìn)行洗脫，各部分洗脫液進(jìn)行定性檢查（或用PPC鑒定）。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,二、分離 現(xiàn)將較常用的方法介紹如下： （一）柱層析法 分離黃酮類化合物常用的吸附劑或載體有硅膠、聚酰胺及纖維素粉等。此外，

5、也有用氧化鋁、氧化鎂及硅藻土等。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,1. 硅膠柱層析：此法應(yīng)用范圍最廣，主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化（或乙?；┑狞S酮及黃酮醇類。少數(shù)情況下，在加水去活化后也可用于分離極性較大的化合物，如多羥基黃酮醇及其苷類等。 吸附規(guī)律：極性大吸附牢。 如：A 苷元 B 單糖苷 C 二糖苷 Rf :ABC,2. 聚酰胺柱層析：其吸附強度主要取決于黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目與位置及溶劑與黃酮類化合物或與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。 聚酰胺柱層析可用于分離各種類型的黃酮類化合物，包括苷及苷元、查耳酮與二氫黃酮等黃酮類化合物從聚酰胺柱上洗脫時大體有下列

6、規(guī)律： （以下規(guī)律也適用于黃酮類化合物在聚酰胺薄層上的行為。 ）,三、 黃酮類化合物的提取與分離,（1）苷元相同，洗脫先后順序一般是： 三糖苷雙糖苷單糖苷苷元 （2）母核上增加羥基，洗脫速度即相應(yīng)減緩 （3）不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是： 異黃酮二氫黃酮醇黃酮黃酮醇 （4）分子中芳香核、共軛雙鍵多者則吸附力強，故查耳酮往往比相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。,三、用聚酰胺柱色譜分離下述化合物, 以不同濃度的甲醇進(jìn)行洗脫, 其出柱先后順序為(C )(A )(D )( B ),下列黃酮化合物 （1）用聚酰胺柱色譜，含水甲醇梯度洗 （2）用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，分別寫出洗脫順序。,洗脫

7、順序： 聚酰胺：DECBA 硅膠：ABCDE,影響因素：a、溶質(zhì)的影響,3. 葡聚糖疑膠(Sephadex gel)柱層析： 對于黃酮類化合物的分離，主要用兩種型號的凝膠：Sephadex-G型及Sephadex LH-20型。 Sephadex G 適用于水系統(tǒng) Sephadex LH-20 適用于水及有機溶劑系統(tǒng),三、 黃酮類化合物的提取與分離,葡聚糖凝膠分離黃酮類化合物的機理是： 分離游離黃酮時，主要靠吸附作用。凝膠對黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目。 分離黃酮苷時，則分子篩的屬性起主導(dǎo)作用。在洗脫時，黃酮苷類大體上是按分子量由大到小的順序流出柱體， 葡聚糖凝膠柱層析中常用的

8、洗脫劑有： (1) 堿性水溶液（如0.1mol/L NH4OH），含鹽水溶液(0.5mol/L NaCl等)。 (2) 醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例）、正-丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等。 (3) 其它溶劑：如含水丙酮、甲醇-氯仿等。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,（二）梯度pH萃取法：與酚羥基酸性有關(guān) 梯度pH萃取法適合于酸性強弱不同的黃酮苷元的分離。根據(jù)黃酮類苷元酚羥基數(shù)目及位置不同其酸性強弱也不同的性質(zhì)，可以將混合物溶于有機溶劑（如乙醚）后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH及4%NaOH水溶液萃取，來達(dá)到分離的目的。 酸性： 7，4-二OH 7-或4-

9、OH （溶于）： 5%NaHCO3液 5%Na2CO3液 一般OH 5-OH 0.2%NaOH液 4%NaOH液）,三、 黃酮類化合物的提取與分離,（三）根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離 在黃酮類成分的混合物中，具有鄰二酚羥基成分與無此結(jié)構(gòu)的成分，可用鉛鹽法分離。不具有鄰二酚羥基的成分可被堿式醋酸鉛沉淀，達(dá)到分離的目的。 與黃酮類成分混存的其它雜質(zhì)，如分子中有羧基（如樹膠、粘液、果膠、有機酸、蛋白質(zhì)、氨基酸等）或鄰二酚羥基（如鞣質(zhì)等）時，也可為醋酸鉛沉淀達(dá)到去雜目的。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,具黃酮類化合物與鉛鹽生成的沉淀，濾集后按常法懸浮在乙醇中，通入H2S進(jìn)行復(fù)分解，濾除硫化鉛沉淀

10、，濾液中可得到黃酮類化合物。但初生態(tài)的PbS沉淀具有較高的吸附性，因此現(xiàn)多不主張用H2S脫鉛，而用硫酸鹽或磷酸鹽，或用陽離子交換樹脂脫鉛。有鄰二酚羥基的黃酮可與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水，借此也可與不具上述結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物相互分離。 在實際工作中，常將上述柱層析法與各種經(jīng)典方法相互配合應(yīng)用，以達(dá)到較好的分離效果。,三、 黃酮類化合物的提取與分離,四、黃酮類化合物的波譜,色譜法的應(yīng)用 硅膠TLC 聚酰胺TLC 雙向紙色譜法,一次,二次,雙向紙色譜法,第一向展開劑：醇性溶劑，如n-BuOH-HAc-H2O (BAW, 4:1:5上層)，分配作用。 Rf：苷元單糖苷雙糖苷，一般 苷元0.7，苷0.5, 糖鏈越長，Rf越大； (2)苷元：黃酮(醇)，查耳酮 (RfBD 極性 DCBA Rf ：ABCD DBCA,1. 下列黃酮類酸性最強的是（B） A 3,4-二OH黃酮 B 7,4-二OH黃酮 C 6,8-二OH黃酮 D 4-OH黃酮 2. 色原酮環(huán)C2、C3間為單鍵