硅烷化GC-MS檢測(cè)煙葉中的有機(jī)酸.ppt

1、硅烷GC-MS法檢測(cè)煙草的揮發(fā)性和半揮發(fā)性有機(jī)酸，采用學(xué)生：傻瓜、摘要、硅烷GC-MS法分析煙草的揮發(fā)性和半揮發(fā)性有機(jī)酸，共鑒定了26種揮發(fā)性和半揮發(fā)性有機(jī)酸，結(jié)果表明牙齒方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均在0.999以上。應(yīng)用牙齒方法根據(jù)云南省生態(tài)系統(tǒng)檢測(cè)8茄子煙草品種，結(jié)果表明揮發(fā)性有機(jī)酸的差異不大，反揮發(fā)性有機(jī)酸的差異顯著。I .材料和工具、煙草樣品2008年字典實(shí)驗(yàn)烤煙樣品和云南省生態(tài)區(qū)栽培的8種煙草樣品(見表8)。試劑和示例2氯甲烷，N，O-雙(基于三甲基硅烷)三火乙酰胺(BSTFA)；甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、2-甲基丁酸、3-甲基丁酸、戊酸、3-甲基戊酸、4-甲基戊酸、己烷、庚酸、苯甲酸、

2、新山、壬酸、12，2 .結(jié)果和分析，選擇使用2.1派生試劑顯示，選擇使用2.1派生試劑顯示，如圖所示，在使用派生試劑的8個(gè)水平因素中，BSTFA使用量對(duì)有機(jī)酸總量的影響不明確，其總量比標(biāo)準(zhǔn)偏差僅占1.21%。因此，認(rèn)為5L以上的BSTFA用量可以完全誘導(dǎo)添加的有機(jī)酸。此外，最好添加10L BSTFA，因?yàn)?L BSTFA的楊怡太小，難以操作。2.2衍生試劑對(duì)煙草使用的選擇，2.2衍生試劑對(duì)煙草使用的選擇，衍生試劑使用8個(gè)水平因素中，BSTFA使用對(duì)有機(jī)酸總量(g/g煙草樣品)的影響大不相同。其用量為5-20l時(shí)，其總量呈指數(shù)增長(zhǎng)。因此，認(rèn)為20L以上的BSTFA用量可以完全誘導(dǎo)煙草樣品中的有機(jī)

3、酸。另外，由于各煙草樣品的成分不同，為了確保各煙草樣品中有機(jī)酸完全硅烷，最好以最佳用量添加30L BSTFA。2.3衍生介質(zhì)選擇，2.3衍生介質(zhì)選擇，如圖所示，2氯甲烷衍生介質(zhì)時(shí)有機(jī)酸總量最高，其次是乙醚，丙酮最低。這可能是因?yàn)楸肿恿u基上的氫原子比較活躍，衍生試劑反應(yīng)消耗了很多BSTFA。2.4導(dǎo)出時(shí)間的選擇，2.4導(dǎo)出時(shí)間的選擇，如圖所示，導(dǎo)出時(shí)間在1040min，有機(jī)酸的總量在較快的速度下逐漸上升，在40min的第一個(gè)拐點(diǎn)4080min，其總量變化趨勢(shì)不明顯，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差只有1.79%，所以我認(rèn)為該總量在40min牙齒導(dǎo)出后可以完全硅烷。但是為了使有機(jī)酸完全衍生，將60min作為最佳衍

4、生時(shí)間。從衍生化時(shí)間與各有機(jī)酸的衍生化效率(在各衍生化時(shí)間下有機(jī)酸的半定量值除以60 min時(shí)各有機(jī)酸的比率)來(lái)看，低水平脂肪酸在短時(shí)間內(nèi)可以完全衍生出來(lái)，但是高水平脂肪酸需要很長(zhǎng)的時(shí)間。因?yàn)榈退街舅岬聂然雀咚街舅峄钴S，更容易發(fā)生衍生化試劑反應(yīng)。2.5衍生化溫度選擇，2.5衍生化溫度的選擇表明，誘導(dǎo)溫度在5 90之間，有機(jī)酸總量沒有明顯差異，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差僅為1.68%。這表明，在牙齒溫度范圍內(nèi)，誘導(dǎo)溫度對(duì)有機(jī)酸總量的影響較小，完全可以完成誘導(dǎo)化反應(yīng)。因此，根據(jù)簡(jiǎn)單、易于操作的原則，選擇了常溫作為最佳導(dǎo)出溫度。，2.6超聲波時(shí)間的選擇，2.6超聲波時(shí)間的選擇對(duì)有機(jī)酸總量(g/g煙草樣品

5、)有很大影響，因此50min的超聲波提取時(shí)間可以認(rèn)為從煙草顆粒中最大限度地提取有機(jī)酸，50min可以用作最佳超聲波提取時(shí)間。3 .結(jié)果和討論，3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立將混合標(biāo)準(zhǔn)樣品存儲(chǔ)液0.05，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml分別放入8個(gè)10ml容量瓶，混合內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)存儲(chǔ)液各放0.5ml。10.2050mg/ml)，2氯甲烷定額至刻度均勻晃動(dòng)，可獲得8種不同濃度的有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(表5)。取8份有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，各0.5毫升，根據(jù)優(yōu)化的預(yù)處理方法和樣品分析方法進(jìn)行預(yù)處理和GC-MS分析。公式(1)表明，在軟件TurboMass Ver5.3.0中，根據(jù)最小二乘法得到了各有機(jī)酸

6、的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，回歸分析得到了各有機(jī)酸的回歸方程和回歸方程的相關(guān)系數(shù)(表4)。結(jié)果相關(guān)系數(shù)均為0.999以上，因此在配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍內(nèi)，各有機(jī)酸的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性關(guān)系被添加到6個(gè)離心管(約40毫升)中，其中6個(gè)是理想，3.2方法的重復(fù)性比較高，3.2方法的重復(fù)性，預(yù)先實(shí)驗(yàn)的香煙樣品(40個(gè)以上)，每個(gè)2.5克完全密封。桂皮酸：18.369 mg/ml)，使用上面設(shè)置的字典處理方法和樣品分析方法分析樣品。結(jié)果見表6。結(jié)果表明，測(cè)定的有機(jī)酸26種，6次測(cè)定結(jié)果(g/2.5g煙草樣品)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.81%4.66%之間。將添加標(biāo)準(zhǔn)樣品的煙草樣品并行制作4個(gè)樣品，將4次平均值作為總價(jià)值計(jì)

7、量，將6次重復(fù)性平均值作為樣品值計(jì)算回收率。結(jié)果見表7。有機(jī)酸的回收率在辛酸124.30%和癸酸126.61%之外，其馀80 . 51% 8.60%之間有機(jī)酸含量低，容易產(chǎn)生偏差，因此牙齒結(jié)果比較準(zhǔn)確，適合于煙草中揮發(fā)性、反揮發(fā)性有機(jī)酸的定量分析。3.4樣品測(cè)定，采用本法定量分析了云南省不同生態(tài)地區(qū)栽培的8種煙草(見表8)。結(jié)果表明，不同生態(tài)區(qū)種植在不同品種的煙草樣品中的有機(jī)酸含量明顯不同。揮發(fā)性、半揮發(fā)性有機(jī)酸的總量從高到低依次為NC297(玉溪市)、云煙85(普洱)、云煙87(文山)、K326(大理)、弘大(昆明市)、重?zé)?00(曲井)半揮發(fā)性有機(jī)酸的含量差異很明顯，它們的順序與26種有機(jī)

8、酸的總含量順序一致。3.5討論，盧熙梅的研究表明，硅烷化的最佳衍生化溫度為攝氏60度，但這可能是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)優(yōu)化的最佳衍生化溫度為常溫，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)合體使用徐璐不同的節(jié)目溫度，為每個(gè)實(shí)驗(yàn)創(chuàng)造了最佳衍生化溫度。郭磊等使用加速溶劑萃取、硅烷、GC-MS/SIM方法同時(shí)測(cè)定煙葉中的甲酸、乙酸、乳酸、苯甲酸、16酸、18酸等26茄子揮發(fā)性、半揮發(fā)性有機(jī)酸，其重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.34%-5.67%。本實(shí)驗(yàn)也檢測(cè)出26種揮發(fā)性、半揮發(fā)性有機(jī)酸，但牙齒實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.81%-4.66%，比電子更為準(zhǔn)確。這可能是因?yàn)樵诠柰檫^程中，用離心管代替三角瓶超聲波提取煙葉中的有機(jī)酸，密封性大大提高，誤差減少。，4 .牙齒實(shí)驗(yàn)對(duì)6個(gè)參數(shù)進(jìn)行了硅烷GC-MS方法預(yù)處理的衍生試劑使用量、衍生介質(zhì)、衍生時(shí)間、衍生溫度和超聲波提取時(shí)間的優(yōu)化，結(jié)果顯示，5l的BSTFA使用量(標(biāo)記)、30l的BSTFA使用量(煙草樣品)牙齒。使用硅烷GC-MS方法，將山梨酸和肉桂酸作為雙重內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，定性和量化了甲酸、乙酸、丙酸、戊酸、庚酸、辛酸、12酸、13酸、14酸、油酸、18酸等26茄子揮發(fā)性、半揮發(fā)性有機(jī)酸。精度結(jié)果表明，方法重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.81%-4.66%之間，回收率在80.51% -126.61%之間，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相關(guān)系數(shù)均在0.99