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文檔簡介
1、,第十二章 微生物的進(jìn)化、系統(tǒng)發(fā)育和 分類鑒定,序:進(jìn)化的概念: 兩種分類原則: 第一節(jié) 進(jìn)化的測(cè)量指征 一,進(jìn)化指征的選擇 二,rRNA作為進(jìn)化指征 16SrRNA 特點(diǎn),2020/8/3,4,16S rRNA特點(diǎn): 1、16SrRNA存在于所有生物中并執(zhí)行相同的功能合成蛋白質(zhì)。 2、 進(jìn)化相對(duì)保守,分子序列變化緩慢; 3、相對(duì)分子質(zhì)量適中; 4、16S rRNA普遍存在(真核生物為18SrRNA); 5、微生物的16S rRNA可從樣品中直接提取,分析、比較其序列,進(jìn)而確定其家族樹中位置,全生命系統(tǒng)樹 (Olsen & Woese 1993) 三,三界生物的主要特征,微生物分類學(xué),微生物分
2、類學(xué),一門按微生物的親緣關(guān)系把他們分門別類的排成各種分類單元或分類群的學(xué)科,分類學(xué)任務(wù),分類、鑒定、命名,微生物分類學(xué)的發(fā)展,經(jīng)典分類學(xué),微生物系統(tǒng)學(xué),一,分類單元及等級(jí) 界 Kingdom 原核生物界 門 phylum 細(xì)菌門 綱 class 真細(xì)菌綱 目 order 放線菌目 科 family 分支桿菌科 屬 genus 分支桿菌屬 種 species 結(jié)核分支桿菌,第二節(jié) 細(xì) 菌 分 類,種的概念,種:最基本的分類單位,是一群表型特征高度相似、親緣關(guān)系極其接近、與同屬內(nèi)其他種有著明顯差異的菌株的總稱,菌株,某條件、地區(qū)分離得到的具體菌株。它是由一獨(dú)立分離的單細(xì)胞繁殖而成的純遺傳型群體及其
3、一切后代,典型菌株、模式株,微生物的學(xué)名,俗名,結(jié)核桿菌:結(jié)核分歧桿菌,學(xué)名,菌種的科學(xué)名稱,是按照“國際命名法則”進(jìn)行命名并受國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的通用正式名稱,由拉丁詞或拉丁化的詞構(gòu)成,林奈的“雙名法”,三名法,雙名法,學(xué)名,屬名:首字母大寫,斜體字 種名加詞:小寫,斜體字 (首次定名人):正體字,用括號(hào) 現(xiàn)在定名人:正體字 定名年份,雙名法的實(shí)例,大腸埃希氏菌,枯草芽孢桿菌,Escherichia coli ( Migula) Castellani et Chalmers 1919,Bacillus subtilis ( Ehrrnbeg) Cohn 1872,三名法,屬名+種名加詞+(sub
4、sp.或var.)+亞種(變種)加詞,實(shí)例,蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種,Bacillus thuringiensis subsp. galleria,釀酒酵母橢圓變種,Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus,有關(guān)學(xué)名的其他知識(shí),屬名:表示該微生物主要特征的名詞或用作名詞的形容詞,單數(shù) 常代表微生物的主要特征,如形態(tài)(芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬)、生理(乳桿菌屬) 更多學(xué)名連在一起,若屬名相同,屬名可縮寫,有關(guān)學(xué)名的其他知識(shí),種名加詞:代表一個(gè)種的次要特征,補(bǔ)充說明微生物的顏色、形狀、用途等次要特征。也可以從人名(巴斯德酵母)、地名(華根霉)衍生而來,有關(guān)學(xué)
5、名的其他知識(shí),未完成鑒定的菌種:種名加詞可用sp.或spp.表示 學(xué)名的發(fā)音:拉丁字母規(guī)則發(fā)音,歐美學(xué)者按自己語種發(fā)音,亞種以下的幾個(gè)分類名詞,不受國際命名法規(guī)限制 亞種:進(jìn)一步細(xì)分種時(shí)所用的單元,一般指除某一明顯而穩(wěn)定的特征外,其余鑒定特征都與模式種相同的種。 命名方法按照三名法處理 變種:與亞種是同義詞,現(xiàn)在很少使用,菌型:曾用作菌株的同義詞,現(xiàn)已廢除,僅作若干變異型的后綴 菌群:兩種微生物介于他們之間的一些過渡類型的菌種,具有某些共同性狀。 如:大腸菌群包括大腸桿菌、產(chǎn)氣腸細(xì)菌及他們之間的過渡類型,菌株(品系),菌株名稱屬名+種的加詞+菌株代號(hào),菌株代號(hào)可隨意用字母、符號(hào)、編號(hào)或字母加編
6、號(hào)等自行決定,大腸桿菌K12菌株 E.coli K12 E.coli O157:H7:致病性,抗原特征,模式菌株:菌落、菌株、菌苔、斜面、菌種、培養(yǎng)物、,分類依據(jù): 一、形態(tài)特征(個(gè)體和群體)細(xì)胞形態(tài):形狀、大小、排列、染色反應(yīng)等。培養(yǎng):固體 菌落,半固體 穿刺,液體。 二、生理生化反應(yīng)營養(yǎng)要求:碳源、氮源、營養(yǎng)類型代謝產(chǎn)物:種類、產(chǎn)量、顯色反應(yīng)酶:產(chǎn)酶種類、反應(yīng)特性,第三節(jié) 微生物分類鑒定的特征和技術(shù),三、其他 血清學(xué)反應(yīng) 血清學(xué)試驗(yàn)與噬菌體分型 近年又發(fā)展了紅外光譜,gc含量,dna雜交等。 生態(tài)學(xué)特征相互關(guān)系、宿主種類、與氧關(guān)系等。 四、氨基酸和蛋白質(zhì)分析,五、核酸的堿基組成和分子雜交,
7、某一特定種的DNA堿基組成是恒定的。GC含量以堿基全部克分子中G和C的摩爾百分?jǐn)?shù)表示: G + C G +C +A +T,100%,=(G +C)mol%,所得數(shù)值范圍從2375,1. DNA的堿基組成(G+Cmol%),每個(gè)生物種都有特定的GC%范圍,因此 可以作為分類鑒定的指標(biāo)。細(xì)菌的GC%范圍為25-75%,變化范圍最大,因此更適合于細(xì)菌的分類鑒定。,GC%測(cè)定主要用于對(duì)表型特征難區(qū)分的細(xì)菌 作出鑒定,,G+C含量的比較主要用于分類鑒定中的否定,但具有相似G+C含量的生物并不一定表明它們 之間具有近的親緣關(guān)系。,同一個(gè)種內(nèi)的不同菌株G+C含量差別應(yīng)在45%以下;同屬不同種的差別應(yīng)低于10
8、15%;,若二個(gè)在形態(tài)及生理生化特性方面及其相似的菌株,如果其G+C含量的差別大于5%,則肯定不是同一個(gè)種,大于15%則肯定不是同一個(gè)屬。,2. 核酸的分子雜交,核酸分子雜交(hybridization)間接比較 不同微生物DNA堿基排列順序的相似性,原理:根據(jù)DNA解鏈的可逆性和堿基配對(duì)的專一性。 若同源性70%以上為種的水平,20%以上可能是屬的水平。,DNA雜交法:,1)DNA-DNA雜交;,(親緣關(guān)系相對(duì)近的微生物之間的親緣關(guān)系比較),2)DNA-rRNA雜交;,(親緣關(guān)系相對(duì)遠(yuǎn)的微生物之間的親緣關(guān)系比較),3)核酸探針;,(利用特異性的探針,用于細(xì)菌等的快速鑒定),第四節(jié) 微生物的快
9、速鑒定和 自動(dòng)化分析技術(shù),一、微量多項(xiàng)試驗(yàn)鑒定系統(tǒng),1、 API 細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng) 2、 Enterotube 系統(tǒng) 3、 Biolog 全自動(dòng)或手動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng),微型、簡便、快速或自動(dòng)化鑒定技術(shù),1、 API 細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng),菌種,基本培養(yǎng)基 (液體),菌懸液,檢測(cè)、編碼、查表、鑒定,適用于API鑒定細(xì)菌有700多種,Analytica Products INC的簡稱。法國生物- 梅里埃公司生產(chǎn)的細(xì)菌數(shù)值分類分析鑒定系統(tǒng)。約有1 000 種生化反應(yīng),可鑒定的細(xì)菌大于550 種。目前中國各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中比較多地應(yīng)用了此項(xiàng)技術(shù),API細(xì)菌鑒定系統(tǒng),2、Enterotube 系
10、統(tǒng),不同培養(yǎng)基分裝不同小槽中,同步接種,培養(yǎng)后檢測(cè)、查表、鑒定。,3、Biolog全自動(dòng)或手動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng),在96孔的細(xì)菌培養(yǎng)板上檢測(cè)微生物對(duì)不同發(fā)酵性碳源利用情況進(jìn)行的分類鑒定。,自動(dòng)化、快速,可鑒定細(xì)菌有1140多種、酵母菌267種、目前已經(jīng)可用于絲狀真菌。,每個(gè)孔中含有不同的底物,菌懸液或無菌水,(一)經(jīng)典分類法,將形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征作為初步特征,再比較生理、生化特征,采用雙歧法整理結(jié)果,進(jìn)行分類。,是通過廣泛比較分類單位的性狀特征,然后計(jì)算它們的相似性,再根據(jù)相似性的數(shù)值劃分類群的一種分類方法。 至少5060個(gè)性狀以上 同等重要 只能劃分到類群,(二)數(shù)值分類法,方法步驟 根據(jù)較多特征分類
11、,每一特征地位相同。1、每一菌株為一操作單位,確定很多特征(5060 個(gè)) 2、比較菌株間的最大相似性陽性和陰性符合的總和- 100%總的測(cè)定數(shù) - 無效測(cè)定數(shù)85%為同種,65%為同屬 3、據(jù)數(shù)值繪出矩陣圖并轉(zhuǎn)換成樹狀譜。,(三)分子與遺傳方法,1、DNA堿基組成:G+C%相同不能說明是同種,但不同則肯定不是同種。差別10%不是同種,10%可能是同種。 2、核酸分子雜交比較堿基順序的同源性,3、16s rRNA寡核苷酸編目分析 水解rRNA產(chǎn)生一系列寡核苷酸片段,順序分析。近年來,采用紅外、核磁、電鏡等新技術(shù)越來越廣泛。,四、分類系統(tǒng),原核生物:伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)第1版, 19841989,重要的G-細(xì)菌 111組,G+細(xì)菌 1217組,光合菌、藍(lán)細(xì)菌、古細(xì)菌等 1825組,放線菌 2633 組,伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)第2版, 分為5卷 古生菌域 泉古生菌門 廣古生菌門 2門8綱208個(gè)種 細(xì)菌域 23門31綱4727個(gè)種 (沈萍) (周德慶),最新資料(沈萍第四版微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)),已記載描述: 古生菌 520種;細(xì)菌 19858種; 真核生物 120336種 國際承認(rèn):古生菌、細(xì)菌、放線菌 為7329種,442個(gè)亞種 分屬58綱,81目,1399屬,
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