化學發(fā)光免疫分析技術(shù).ppt

1、化學發(fā)光免疫分析,陳倉醫(yī)院檢驗科：,一、化學發(fā)光免疫技術(shù)的概念 二、化學發(fā)光免疫分析基本原理 三、化學發(fā)光免疫分析的類型 四、臨床應用 五、發(fā)展與展望,一、化學發(fā)光免疫技術(shù)的概念,化學發(fā)光免疫技術(shù)：化學發(fā)光分析是根據(jù)化學反應產(chǎn)生的輻射光的強度來確定物質(zhì)含量的分析方法?；瘜W發(fā)光免疫分析是將化學發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應相結(jié)合，用化學發(fā)光相關(guān)的物質(zhì)標記抗體或抗原，與待測的抗原或抗體反應后，經(jīng)過分離游離態(tài)的化學發(fā)光標記物，加入化學發(fā)光系統(tǒng)的其它相關(guān)物產(chǎn)生化學發(fā)光，進行抗原或抗體的定量或定性檢測。,化學發(fā)光免疫分析 （Chemiluminescence Immunoassay，CLIA） 是近十年來在世界范圍

2、內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高靈敏度、檢測范圍寬、操作簡便快速、標記物穩(wěn)定性好、無污染、儀器簡單經(jīng)濟等優(yōu)點。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發(fā)展方向。CLIA發(fā)展迅猛，已占各種免疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析最佳的取代者。,是目前世界公認先進的標記免疫測定技術(shù)，化學發(fā)光免疫分析技術(shù)具有高度的準確性和特異性，成為檢驗方法中最為重要的技術(shù)之一?；瘜W發(fā)光免疫分析技術(shù)作為疾病診斷的主要手段已被廣泛用于機體免疫功能、傳染性疾病、內(nèi)分泌功能、腫瘤標志物、性激素、甲狀腺功能等方面的體外診斷實驗中。,化學發(fā)光免疫分析的優(yōu)勢,靈敏度高 靈敏度高是化學發(fā)光免

3、疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達 10-22 mol/L （ RIA 為 10 -12 mol/L ）。化學發(fā)光免疫分析能夠檢出放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì)，對疾病的早期診斷具有十分重要的意義。 發(fā)光強度在 4 6 個量級之間與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）為 2.0 的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然 RIA 也有較寬的線性動力學范圍，但放射性限制了其應用。,寬的線性動力學范圍 光信號持續(xù)時間長 輝光型的 CLIA 產(chǎn)生的光信號持續(xù)時間可達數(shù)小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量。 絕大多數(shù)分析測定均為僅需加入一種試劑（或復合試劑）的一步模式,分析方

4、法簡便快速 結(jié)果穩(wěn)定、誤差小 樣品系直接自己發(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響，使分析結(jié)果靈敏穩(wěn)定可靠。 安全性好及使用期長 免除了使用放射性物質(zhì)。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)其危害性；試劑穩(wěn)定，保存期可達一年。,二、化學發(fā)光免疫分析基本原理,化學發(fā)光免疫分析包含兩個部分, 即免疫反應系統(tǒng)和化學發(fā)光分析系統(tǒng)。免疫反應系統(tǒng)是將標記物質(zhì)標記在抗原或抗體上, 經(jīng)過特異性免疫反應后,形成抗原2抗體復合物。然后進行對標記物進行檢測, 來測定待檢物?；瘜W發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化, 形成一個激發(fā)態(tài)的中間體, 當這種激發(fā)態(tài)

5、中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時, 同時發(fā)射出光子, 利用發(fā)光信號測量儀器光量子產(chǎn)率。,化學發(fā)光免疫分析儀是通過檢測患者血清內(nèi)待測物質(zhì)從而對人體進行免疫分析的醫(yī)學檢驗儀器。將定量的患者血清和辣根過氧化物（HRP）加入到固相包被有抗體的白色不透明微孔板中，血清中的待測分子與辣根過氧化物酶的結(jié)合物和固相載體上的抗體特異性結(jié)合。分離洗滌未反應的游離成分。然后，加入魯米諾Luminol發(fā)光底液 ，利用化學反應釋放的自由能激發(fā)中間體，從基態(tài)回到激發(fā)態(tài)，能量以光子的形式釋放。此時，將微孔板置入分析儀內(nèi)，通過儀器內(nèi)部的三維傳動系統(tǒng)，依次由光子計數(shù)器讀出各孔的光子數(shù)。樣品中的待測分子濃度根據(jù)標準品建立的數(shù)學模型進行定量

6、分析。最后，打印數(shù)據(jù)報告，以輔助臨床診斷。,三、化學發(fā)光免疫分析的類型,化學發(fā)光免疫分析法根據(jù)其標記物的不同可分為三大類,即化直接化學發(fā)光免疫分析、化學發(fā)光酶免疫分析和電化學發(fā)光免疫分析法。,用吖啶酯直接標記抗體(抗原)，與待測標本中相應的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-吖啶酯標記抗體復合物，這時只需加入氧化劑（H2O2）和NaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光 。 由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，這部分光的積分與待測抗原的量成正比，可從標準曲線上計算出待測抗原的含量。,3.1 直接化學發(fā)光免疫分析,發(fā)光,Y,Y,Y,磁微粒

7、,被測抗原,+,抗體,+,帶吖啶酯標記物抗體,沖洗后,- 夾心法,（1） 加入H2O2 （pH10）,（2） 加入堿 （pH10）,直接化學發(fā)光的機理,磁微粒模式圖,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,特點 抗原和抗體結(jié)合與未結(jié)合部分的易分離,磁微粒技術(shù),化學發(fā)光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用參與催化某一化學發(fā)光反應的酶如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶(ALP)來標記抗原或抗體，在與待測標本中相應的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復合物，經(jīng)洗滌后，加入底物(發(fā)光劑)，酶催

8、化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯螅侔阉鼈儌魉椭劣嬎銠C數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出測定物的濃度。,3.2、化學發(fā)光酶免疫分析,該分析系統(tǒng)采用辣根過氧化物酶（HRP）標記抗體(或抗原)，在與反應體系中的待測標本和固相載體發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶（HRP）標記抗體復合物，這時加入魯米諾發(fā)光劑、H2O2和化學發(fā)光增強劑使產(chǎn)生化學發(fā)光。, 辣根過氧化物酶標記的化學發(fā)光免疫分析,辣根過氧化物酶標記化學發(fā)光免疫分析示意圖,該分析系統(tǒng)以堿性磷酸酶 標記抗體(或抗原)，在與反應體系中的待測標本和固相載體發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體-待測抗原-酶

9、標記抗體復合物，這時加入AMPPD發(fā)光劑，堿性磷酸酶使AMPPD脫去磷酸根基團而發(fā)光。, 堿性磷酸酶標記的化學發(fā)光免疫分析,堿性磷酸酶標記化學發(fā)光免疫分析示意圖,分析步驟,電化學發(fā)光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以電化學發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標記 抗體(抗原)，以三丙胺(TPA)為電子供體， 在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學發(fā)光 反應，它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程。,3.3 電化學發(fā)光免疫分析,在電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中，磁性微粒為固相載體包被抗體(抗原)，用三聯(lián)吡啶釕標記抗體(抗原)，在反應體系內(nèi)待測標本與相應的抗原 (抗體

10、)發(fā)生免疫反應后，形成磁性微粒包被抗體-待測抗原-三聯(lián)吡啶釕標記抗體復合物，這時將上述復合物吸入流動室，同時引人TPA緩沖液。當磁性微粒流經(jīng)電極表面時，被安裝在電極下面的電磁鐵吸引住，而未結(jié)合的標記抗體和標本被緩沖液沖走。與此同時電極加壓，啟動電化學發(fā)光反應，使三聯(lián)吡啶釕和TPA在電極表面進行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學發(fā)光，光的強度與待測抗原的濃度成正比。,電化學發(fā)光免疫分析示意圖,電化學發(fā)光免疫測定示意圖,標記磁顆粒在電場中發(fā)光工作示意圖,目前我院最新引進的邁瑞CL-2000i 全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)主要以化學發(fā)光酶免疫分析為主。擁有國內(nèi)完全自主知識產(chǎn)權(quán)，它的酶促化學發(fā)光是目前免疫診斷中最靈敏

11、的化學發(fā)光體系之一，其核心性能達到了國際同類產(chǎn)品先進水平。,該機采用高靈敏全球主流化學發(fā)光技術(shù)的CL-2000i 分析系統(tǒng)，擁有業(yè)內(nèi)領(lǐng)先的高效處理能力，可實現(xiàn)240T/H檢測；智能優(yōu)化的測試流程，專利邏輯設(shè)計，提升測試通量，瀑布式真空氣吸清洗技術(shù)降樣本攜帶干擾至最低，涵蓋甲狀腺功能、激素、腫瘤標志物、傳染病等50多個檢測項目。 目前我科開展腫瘤標志物，甲狀腺功能檢測，生殖內(nèi)分泌激素檢查項目，后續(xù)依臨床需要酌情開展新的項目，更好的服務(wù)臨床，服務(wù)患者,四、臨床應用,1.甲狀腺激素 2.生殖激素 3.腎上腺/垂體激素 4.貧血因子 5.腫瘤標記物 6.感染性疾病 7.糖尿病 8.心血管系統(tǒng) 9.病毒

12、標記物 10.骨代謝 11.過敏性疾病 12.治療藥物監(jiān)測,甲狀腺功能檢測項目及臨床意義,甲功五項是T3、T4、FT3、FT4和TSH的總稱，它與甲狀腺功能有密切關(guān)系，是診斷甲亢、甲減的重要依據(jù) 。檢測甲狀腺激素在甲亢和甲減病人的診斷中已得到廣泛應用，并成為判斷療效、監(jiān)測復發(fā)的重要手段,甲狀腺素（T4）,甲狀腺素（T4）是由甲狀腺合成、分泌的激素，在調(diào)節(jié)機體代謝中起著重要作用，被分泌到血液循環(huán)中的T4能對垂體的促甲狀腺激素（TSH）的調(diào)節(jié)起反應；下丘腦、甲狀腺、垂體所組成負反饋機制對T4的分泌起著調(diào)節(jié)作用。 在血循環(huán)中，T4約60%與甲狀腺結(jié)合球蛋白（thyroxine-binding glo

13、bulin，TBG）結(jié)合，30%與甲狀腺激素轉(zhuǎn)運蛋白（Transthyretin，TBPA）結(jié)合，其余約10%與白蛋白結(jié)合，僅0.03%-0.04%為游離狀態(tài) 游離的T4有活性，而結(jié)合的T4無活性，主要起備用作用。,參考范圍：5.014.5ug/dl（CENTAUR） 臨床意義： T4升高：見于甲狀腺功能亢進的病人，但輕型甲亢、早期甲亢、亞臨床甲亢的變化未如T3明顯； 凡引起TBG升高的因素均可使T4升高，如妊娠、應用雌激素、葡萄胎、淋巴瘤、血卟啉病等；藥物如胺碘酮、含碘造影劑、受體阻斷劑、奮乃近、海洛因等 T4降低： 見于甲狀腺功能減退的病人，輕型甲減、亞臨床甲減的變化較T3明顯； 缺碘性甲

14、狀腺腫可見T4降低或在正常低限，而T3正常； 腎病綜合征、肝功能衰竭、遺傳性TBG缺陷癥、肢端肥大癥、重癥全身性疾病狀態(tài)等；以及應用糖皮質(zhì)激素、雄激素、生長激素、苯妥英鈉等藥物,血清中的三碘甲狀腺原氨酸（T3）,血清中的三碘甲狀腺原氨酸（T3），僅20%由甲狀腺直接分泌而來，80%以上在外周組織通過T4脫碘而來。血液循環(huán)中的T3能對垂體的促甲狀腺激素（TSH）的調(diào)節(jié)起反應，下丘腦、垂體、甲狀腺所組成負反饋機制對T3的分泌起著調(diào)節(jié)作用。 在血循環(huán)中，約99.5%的T3與TBG結(jié)合，但T3與TBG的親和力明顯低于T4；T3不與TBPA結(jié)合 未結(jié)合的T3有活性；而結(jié)合的T3無活性，主要起備用作用。,

15、參考范圍：0.581.62 ug/dL 臨床意義： T3升高：見于甲狀腺功能亢進的病人，輕型甲亢、早期甲亢、亞臨床甲亢的變化較T4明顯，適合輕型甲亢、早期甲亢和亞臨床甲亢以及甲亢治療后復發(fā)的診斷；T3型甲亢僅有T3和FT3升高； 與T4一樣，T3亦受TBG變化影響，但受影響程度不及T4。 T3降低： 僅于較重甲狀腺功能減退的病人，T3和T4均下降，輕型甲減T3不一定下降； 重癥全身性疾病狀態(tài)或慢性病變可導致T3下降，多見于慢性腎功能不全、慢性心功能不全、糖尿病、心梗等疾病的患者。,游離甲狀腺素（FT4）游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）,FT3和FT4分別為T3和T4在血清中未與蛋白結(jié)合的部分，其

16、不受血清中TBG的影響，直接反映甲狀腺功能的狀態(tài)，其敏感性和特異性均高于T3和T4 參考范圍： FT3：2.34.0pg/mL FT4：0.61.2ng/dL,臨床意義： 血清FT3和FT4升高：甲亢；低T3綜合征，由于5脫碘酶受抑制，T4外周脫碘作用障礙使FT4升高；甲狀腺素不敏感綜合征， FT3和FT4升高，而無甲亢表現(xiàn)；某些藥物，胺碘酮、肝素等可使FT4升高；FT3適合于甲亢和左旋甲狀腺素治療中藥物是否過量的判斷。 血清FT3和FT4降低： 甲減病人兩者皆下降，但輕型甲減、甲減初期多以FT4下降為主；低T3綜合征僅有FT3下降； 某些藥物，如苯妥英鈉、多巴胺、糖皮質(zhì)激素也可使FT3和FT

17、4降低。,T3、T4均升高：高TBG血癥、甲亢、甲狀腺激素不敏感綜合征。 T4升高，T3正?；蛳陆担杭易逍园椎鞍桩惓Ｐ愿逿4血癥；胰高血糖素瘤；藥物普萘洛爾、胺碘酮、膽囊造影劑；全身性疾病、精神性疾病；苯丙胺成癮；T4型甲亢、甲亢伴T4轉(zhuǎn)換T3障礙。 T4正常，T3升高：T3型甲亢；甲減用T3或者其他甲狀腺激素制劑替代治療后 T4正常，T3下降：患有全身性疾病時；5單脫碘酶活性下降；血皮質(zhì)醇升高的各種情況；營養(yǎng)不良綜合征。 T4下降、T3升高：醫(yī)源性甲亢；甲狀腺功能正常病人服用甲狀腺激素制劑。 T4下降，T3正常：輕至中度甲減；碘缺乏；苯妥英鈉、卡馬西平。 T3和T4均下降：中至重度甲減；重癥

18、全身性疾??；低TBG血癥；大劑量使用水楊酸制劑,促甲狀腺激素（TSH）,促甲狀腺激素是由、兩亞單位非共價結(jié)合而成的糖蛋白，亞單位與LH、FSH的亞單位相似；而亞單位與上述垂體糖蛋白的相應部分完全不同，有自已獨特的生化及免疫特性；TSH主要由垂體合成，主要針對FT3、FT4的負反饋起反應；下丘腦三肽、促甲狀腺激素釋放激素（TRH）都可直接刺激TSH的產(chǎn)生。 TSH主要通過與甲狀腺細胞膜受體作用發(fā)揮以下三種功能，一是促進甲狀腺細胞產(chǎn)生與肥大；二是促進碘代謝；三是促進甲狀腺合成T3、T4。 參考范圍：0.5-7.30mIU/ml（CENTAUR）,促甲狀腺激素（TSH）,腫瘤標志物（tumor ma

19、rker，TM）,腫瘤標志物（tumor marker，TM）是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產(chǎn)生的或者是由機體對腫瘤細胞反應而產(chǎn)生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、激素、酶（同工酶）、多胺等。 可在腫瘤患者血液或體液中檢測到腫瘤標志物。,腫瘤標志物臨床應用,正常人群中的篩查 有癥狀者的輔助診斷 癌癥的臨床階段的分期 疾病進程的預后指標 評估治療方案 判斷癌癥是否復發(fā) 治療應答的監(jiān)測 血清腫瘤標志物的檢測是腫瘤診斷的常用方法之一，對于惡性腫瘤的診斷、療效的觀察、病情進展的判斷和復發(fā)的監(jiān)測等皆有一定的臨床應用價值，并具有簡便無創(chuàng)、測定結(jié)果定量客觀、可重復測定以便動態(tài)監(jiān)測

20、、費用相對低廉等優(yōu)點。,甲胎蛋白(AFP) 參考值：7.0ng/ml,胎兒發(fā)育早期，由肝臟和卵黃囊合成的一種血清糖蛋白，胎兒出生后不久即逐漸消失。成人血清中含量甚微。 在我國6070的肝癌病人存在AFP高于正常值。凡AFP500g/L持續(xù)1個月或AFP200g/L持續(xù)2好個月，應高度懷疑肝癌，同時應有醫(yī)學影像學好的證據(jù)參與診斷 低濃度（50200g/L）持續(xù)時間超過2個月的好患者，應視為肝癌的高危人群 當谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）正常，用AFP來診斷肝癌，可取性可達100。 若AFP及膽紅素同時明顯升高，病人存活期很短 通常由非原發(fā)性肝癌引起的AFP升高，一般都不會高于400g/L,3.65.2的膽

21、管上皮癌、84以上的肝母細胞癌和70左右的生殖性畸胎瘤及較少比例的胰腺癌、肺癌、腎癌和白血病患者也可出現(xiàn)AFP低濃度的異常升高。 良性病變中的AFP升高，升高一般是散在的和暫時的。肝炎病人，10升高，水平50g/L；肝硬化病人，30升高，水平500g/L；,癌胚抗原（CEA）參考值：4.5ng/ml,是一種可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎兒的胃腸管、胰腺和肝臟。胃腸道惡性腫瘤時可見血清CEA升高，在乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤中也可出現(xiàn)表達，并分泌于體液中。 CEA在中晚期腫瘤中的陽性率 胰腺癌 8891 肺癌 76 結(jié)腸癌 73 乳腺癌和卵巢癌 73 膀胱癌、宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌中也有升高,鐵蛋

22、白（SF）男:27-375ug/l 女:12-135ug/l,鐵蛋白升高可見于下列腫瘤：急性白血病、何杰金氏病、肺癌、結(jié)腸癌、肝癌和前列腺癌。檢測鐵蛋白對肝臟轉(zhuǎn)移性腫瘤有診斷價值，76%的肝轉(zhuǎn)移病人鐵蛋白含量高于400g/L，當肝癌時，AFP測定值較低的情況下，可用鐵蛋白測定值補充，以提高診斷率。在色素沉著、炎癥、肝炎時鐵蛋白也會升高。升高的原因可能是由于細胞壞死，紅細胞生成被阻斷或腫瘤組織中合成增多。,乳腺癌相關(guān)抗原（CA15-3）參考值：15U/ml,CA15-3是乳腺癌的最重要的特異性標志物。30%-50%的乳腺癌患者的CA15-3明顯升高。 CA15-3動態(tài)測定有助于II期和III期乳

23、腺癌病人治療后復發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)；當CA15-3大于100U/ml時，可認為有轉(zhuǎn)移性病變。 肺癌、胃腸癌、卵巢癌及宮頸癌患者的血清CA15-3也可升高，應予以鑒別，特別要排除部分妊娠引起的含量升高。,卵巢癌相關(guān)抗原（CA125）:參考值：35U/ml,在卵巢腫瘤上皮和Mullerian副腎管來源的一種糖蛋白，病理和正常組織中表達，其生物學功能不明。 CA125在卵巢癌，尤其是上皮性卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌可出現(xiàn)升高，還可在肺癌、宮頸癌等腫瘤狀態(tài)時升高。 血清CA125升高（或降低）2倍的患者中大于80%的病例為病情進展（或消退） CA12535U/ml的病人中有95%在第二次手術(shù)時仍有腫瘤存在 早期復發(fā)

24、的監(jiān)測:75%的患者在腫瘤復發(fā)前一年左右時間CA125的水平就已升高 CA125在子宮內(nèi)膜異位癥、1%的健康婦女、3%的患良性卵巢疾病婦女及其他非腫瘤患者也可見到升高。,胰腺胃腸癌相關(guān)抗原（CA19-9）參考值：30U/ml,CA19-9是胰腺癌，胃癌，結(jié)、直腸癌、膽囊癌的相關(guān)標志物，是對胰腺癌敏感性最高的標志物。 胰腺癌患者85%-95%為陽性。當CA19-9小于1000U/ml時，有一定的手術(shù)意義，腫瘤切除后CA19-9濃度會下降，如再上升，則可表示復發(fā)。對胰腺癌轉(zhuǎn)移的診斷也有較高的陽性率，當血清CA19-9水平高于10000Uml時，幾乎均存在外周轉(zhuǎn)移。 胃癌、結(jié)直腸癌、膽囊癌、膽管癌、

25、肝癌的陽性率也會很高。 胃腸道和肝的多種良性和炎癥病變，如胰腺炎、輕微的膽汁郁積和黃疸，CA19-9濃度也可增高，但往往呈“一過性”，而且其濃度多低于120U/ml。,總前列腺特異性抗原（TPSA）參考值：4.0ng/ml,PSA是前列腺癌的特異性標志物，也是目前公認的唯一具有器官特異性腫瘤標志物。血清TPSA升高一般提示前列腺存在病變（前列腺炎、良性增生或癌癥）。血清PSA是檢測和早期發(fā)現(xiàn)前列腺癌最重要的指標之一，血清TPSA定量的陽性臨界值為大于10g/L，前列腺癌的診斷特異性達90-97。TPSA也可用于高危人群前列腺癌的篩選與早期診斷，是第一個由美國癌癥協(xié)會推薦用于篩查50歲以上男性前

26、列腺癌的腫瘤標志物。 TPSA測定還可用于監(jiān)測前列腺癌患者或接受激素治療患者的病情及療效，90%前列腺癌術(shù)后患者的血清TPSA值可降至不能檢出的痕量水平，若術(shù)后血清TPSA值升高，提示有殘存腫瘤。放療后療效顯著者，50以上患者在2個月內(nèi)血清TPSA降至正常。,游離前列腺特異性抗原（FPSA）參考值:1ng/ml,單項的血清總PSA（TPSA）測定不能明確鑒別前列腺癌和良性的前列腺增生，主要是因為在濃度220ng/ml范圍內(nèi)，二組病人有交叉。而FPSA/TPSA不受此因素及年齡的影響，通過FPSA/TPSA比值達到鑒別前列腺癌或良性的前列腺增生的目的。前列腺癌患者的FPSA/TPSA比值明顯偏低

27、，良性的前列腺增生患者的FPSA/TPSA比值顯著增高。FPSA/TPSA界限指定為0.15，低于該值高度懷疑前列腺癌，其診斷敏感性為90.9%，特異性為87.5%，準確性為88.6%，明顯優(yōu)于TPSA單獨測定。 FPSA檢測主要適用于未經(jīng)治療、TPSA值為220ng/ml病人，當TPSA值低于2ng/ml或高于20ng/ml時，F(xiàn)PSA/TPSA比值并不能用于鑒別前列腺癌和良性的前列腺增生。,一種腫瘤可分泌多種腫瘤標志物，而不同的腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型可有相同的腫瘤標志物，而且在不同的腫瘤患者體內(nèi)，腫瘤標志物的質(zhì)和量變化也較大。因此，單獨檢測一種腫瘤標志物，可能會因為測定方法的靈敏度不

28、夠而出現(xiàn)假陰性，聯(lián)合檢測多種腫瘤標志物有利于提高檢出的陽性率。為此，選擇一些特異性較高，可以互補的腫瘤標志物聯(lián)合測定，對提高腫瘤的檢出率是有價值的。,腫瘤標志物的相關(guān)腫瘤,腫瘤標志物的聯(lián)合應用,性激素檢測系列,下丘腦水平：促性腺激素釋放激素（GnRH） 腦垂體水平：促卵泡激素（FSH），促黃體生成素（LH），垂體催乳素（PRL） 性腺水平（睪丸，卵巢分泌）：睪酮（T），雌二醇（E2），雌三醇（E3），孕酮（P）（胎盤分泌）：胎盤催乳素（HPL），人絨毛膜性腺激素（HCG） 其它：性激素結(jié)合球蛋白（SHBG），硫酸去氫表酮（DHEA-SO4），妊娠相關(guān)血漿蛋白A（PAPP-A）,卵巢、子宮內(nèi)膜與

29、激素水平,雌二醇E2,參考值;男性為2584pg/ml。女性卵泡期為25138 pg/ml；黃體期為31317 pg/ml；排卵期為100440 pg/ml；絕經(jīng)期為2584 pg/ml。 1.判斷閉經(jīng)原因 (1)激素水平符合正常的周期變化，表明卵泡發(fā)育正常，應考慮為子宮性閉經(jīng)； (2)雌激素水平偏低，閉經(jīng)原因可能因原發(fā)或繼發(fā)性卵巢功能低下或受藥物影響而抑制卵巢功能，也可見于下丘腦-垂體功能失調(diào)、高催乳激素血癥等。 2. 診斷無排卵：雌激素無周期性變化，常見于無排卵性功能失調(diào)性子宮出血、多囊卵巢綜合征、某些絕經(jīng)后子宮出血。 3. 監(jiān)測卵泡發(fā)育：應用藥物誘導排卵時，測定血中E2作為監(jiān)測卵泡發(fā)育、

30、成熟的指標之一，用以指導HCG用藥及確定取卵時間。 4. 女性性早熟：臨床多以8歲以前出現(xiàn)第二性征發(fā)育診斷性早熟，血E2水平升高為診斷性早熟的激素指標之一。,雌三醇E3,未孕婦女：(0.310.17) ng/ml。在妊娠婦女則隨妊娠周齡而升高：21周，(0.2-5.8) ng/ml;35周，(4.9-15.7) ng/ml;41-42周，(8.2-24.2) ng/ml。男性：(0.240.17) ng/ml。 (1) 糖尿病妊娠患者監(jiān)測E3有助于了解胎盤功能和胎兒發(fā)育情況。凡胎兒發(fā)育正常者妊娠中期E3濃度逐漸緩慢上升，41-42周達到高峰。一般認為足月妊娠時血清E3應大于31nmol/L，6

31、.9nmol/L、13.9nmol/L者示胎兒危急。24h尿10mg，亦提示胎兒胎盤功能低下。 (2) 妊娠高血壓綜合征在無胎兒窘迫的情況下，早期由于子宮-胎盤血流增加，E3可保持正常。中、重度妊高癥由于腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)活性增強，致胎盤缺血，血清E3可明顯下降。 (3) 多胎妊娠、超重胎兒血清E3多升高。過期妊娠、胎兒宮內(nèi)生長遲緩、胎兒腎上腺發(fā)育不全、死胎等血清E3下降。,孕激素PROG,男：成人0.7-2.1 ng/ml 女： 卵泡期 0.21.6 ng/ml 排卵期 0.32.1 ng/ml 排卵后 1.822.5 ng/ml 1. 監(jiān)測排卵 血孕酮水平在黃體期范圍內(nèi)提示有排卵

32、。若孕酮水平符合有排卵，而無其它原因的不孕患者，需配合B型超聲檢查觀察卵泡發(fā)育及排卵過程，以除外黃素化未破裂卵泡綜合征。原發(fā)性或繼發(fā)性閉經(jīng)、無排卵性月經(jīng)或無排卵性功能失調(diào)性子宮出血、多囊卵巢綜合征、口服避孕藥或長期使用GnRH激動劑，均可使孕酮水平下降。 2.了解黃體功能 黃體期血孕酮水平低于生理值，提示黃體功能不足；月經(jīng)來潮45日血孕酮仍高于生理水平，提示黃體萎縮不全。 3. 觀察胎盤功能 妊娠期胎盤功能減退時,血孕酮水平下降。異位妊娠時,孕酮水平較低如孕酮水平25ng/ml,基本可除外異位妊娠。單次血清孕酮水平低于黃體期孕酮正常范圍，提示為死胎。先兆流產(chǎn)時，孕酮值若有下降趨勢，有可能流產(chǎn)。

33、 4. 孕酮替代療法的監(jiān)測 孕早期切除黃體側(cè)卵巢后,應用孕酮替代療法時應監(jiān)測血清孕酮水平。,雄激素TESTO,成人：男2.279.76 ng/ml 女0.11.23 ng/ml 睪酮增高：特發(fā)性男性性早熟，家族性男性性早熟，腎上腺皮質(zhì)增生，腎上腺皮質(zhì)腫瘤（腺癌顯著增高，腺瘤亦常增高），睪丸腫瘤，睪丸女性化，多囊卵巢綜合征，卵巢雄性化腫瘤，松果體瘤，特發(fā)性多毛癥，甲減，雄激素，HCG和雌激素治療中等。 降低：21三體綜合征，尿毒癥，肌強直營養(yǎng)不良征，肝功能不全，陷睪癥，原發(fā)性或繼發(fā)性性腺功能減退癥（Klinefelter綜合征，Kallman綜合征等），雄激素治療停藥后等。 睪酮降低：男性睪丸發(fā)

34、育不全、類無睪綜合征、下丘腦或垂體性性腺功能減低。此外，也見于甲狀腺功能亢進、肝硬化、腎衰竭、嚴重創(chuàng)傷以及久病體弱患者。,垂體催乳激素PRL,參考范圍;男性：3.0-16.5 ng/ml 女性：3.8-30.7 ng/ml非妊娠期女性：3.224.9 ng/ml 1. 閉經(jīng)、不孕及月經(jīng)失調(diào)者,無論有無泌乳,均應測PRL,以除外高催乳激素血癥。 2. 垂體腫瘤患者伴PRL異常增高時，應考慮有垂體催乳激素瘤。 3. PRL水平升高還見于性早熟、原發(fā)性甲狀腺功能低下、卵巢早衰、黃體功能欠佳、長期哺乳、神經(jīng)精神刺激、藥物作用(如氯丙嗪、避孕藥、大量雌激素、利血平等)因素等；PRL水平降低多見于垂體功能

35、減退、單純性催乳激素分泌缺乏癥等。,垂體促性腺激素（LH和FSH）,參考范圍；LH在排卵前期為1.911.6mIU/ml，排卵期為12.9105.2mIU/ml，排卵后期為0.810.5mIU/ml。一般在非排卵期的正常值是6.664.4mIU/ml。FSH在排卵前期為2.07.1mIU/ml，排卵期為2.712.3mIU/ml，排卵后期為14.4mIU/ml。一般以540mIU/ml作為正常值。 1. 協(xié)助判斷閉經(jīng)原因 FSH及LH水平低于正常值，提示閉經(jīng)原因在腺垂體或下丘腦。FSH及LH水平均高于正常，病變在卵巢。 2. 測定LH峰值 可以估計排卵時間及了解排卵情況，有助于不孕癥的治療及研

36、究避孕藥物的作用機制。 3. 測定LH/FSH比值 如LH/FSH3表明LH呈高值，F(xiàn)SH處于低水平，有助于診斷多囊卵巢綜合征。 4. 診斷性早熟 有助于區(qū)分真性和假性性早熟。真性性早熟由促性腺激素分泌增多引起，F(xiàn)SH及LH呈周期性變化。假性性早熟的FSH及LH水平較低，且無周期性變化。,人絨毛膜促性腺激素（HCG）,1、診斷早孕：在受精卵著床后5-7天（未次月經(jīng)后26天左右）即能測出HCG，以血清HCG值作為診斷早孕的指標，符合率達98-100% 2、滋養(yǎng)層細胞腫瘤的診斷、療效觀察和預后判斷：葡萄胎和絨毛膜上皮癌患者的血清HCG明顯高于正常妊娠，且其分泌量與癌細胞總數(shù)以及病情嚴重程度呈正相關(guān)

37、。在治療過程中動態(tài)檢測HCG濃度，實際上反映了癌細胞群生長或退化的狀態(tài)。 3、診斷宮外孕：對月經(jīng)過期而無早孕癥狀，HCG較高而人工流產(chǎn)未見絨毛組織者，應考慮為宮外孕 4、先兆流產(chǎn)的處理依據(jù)：臨床上發(fā)現(xiàn)孕婦有先兆流產(chǎn)的癥狀時，通過動態(tài)檢測，觀察HCG的變化，對HCG濃度下降不明顯而仍接近正常者，可積極保胎，經(jīng)治療HCG濃度漸上升，并與妊娠月份相符，多能繼續(xù)妊娠；而對HCG逐漸下降，且下降至一定程度者，孕婦流產(chǎn)已不可避免，宜人工流產(chǎn)以終止妊娠。,5、不全流產(chǎn)的鑒別診斷：流產(chǎn)4周后HCG應轉(zhuǎn)為正常，而不全流產(chǎn)者HCG仍會高于正常；若宮腔感染或產(chǎn)后子宮復舊不全，其HCG在正常范圍 6、診斷異位HCG腫

38、瘤：作為腫瘤標志物，不同組織臟器腫瘤HCG的陽性檢出率高低不一，依次分別為：絨毛細胞管細胞瘤66%，乳腺瘤60%，睪丸瘤51%，卵巢腺瘤36%，胰腺瘤33%，胃癌22%，肝癌17%，腸癌13%，肺癌9%。 7、用于生育研究：HCG可作為觀察抗早孕藥物效果的指標之一。,表 妊娠期間血清HCG水平（從著床時間算起） 妊娠周數(shù) HCG（IU/L） 0.21 550 12 50500 23 1005000 34 50010000 45 100050000 56 10000100000 6823月 10000100000,甲狀腺素與性激素,甲狀腺功能減退可導致閉經(jīng)，性欲減退及陰

39、毛脫落 甲狀腺功能亢進患者血清雌激素增加，卵泡期或黃體期LH較正常人高23倍 甲亢時睪酮和雄烯二酮增加，睪酮代謝清除率下降,五、發(fā)展與展望,化學發(fā)光免疫分析法具有選擇性好、靈敏度高、分析速度快、設(shè)備簡單等優(yōu)點，近年來在環(huán)境、臨床、食品、藥物檢測中得到了廣泛運用。實際檢測常常需要對大量、復雜、低豐度的樣品進行測定，因而化學發(fā)光免疫分析法逐漸向快速、高通量、高靈敏檢測的方向發(fā)展。近幾年化學發(fā)光免疫分析法的研究方向主要涉及到降低溫育時間，多組分檢測，以及信號放大技術(shù)等。這些例子都證明了化學發(fā)光免疫分析法具有廣泛的應用前景和可操作性。,目前我科室開展的成熟項目簡介,最近兩年我科室緊跟臨床發(fā)展需要，相繼

40、開展了：全程CRP，心梗三聯(lián)，肌鈣蛋白定量，D-二聚體，糖化血紅蛋白，胱抑素，同型半胱氨酸。這些項目開展一年多來運行成熟，因其敏感性，特異性，準確性及時為臨床診治提供了參考?，F(xiàn)對其做一簡要介紹。,全程CRP,C反應蛋白是一種由肝臟合成的急性時相反應蛋白，在正常情況下健康人的CRP值非常低，機體在感染，炎癥，組織損傷后CRP濃度顯著升高，CRP感染后4h6h開始增高，24h48h達到高峰，峰值可為正常值的1001000倍，在感染消除后其含量急劇下降,一周內(nèi)可恢復正常，CRP的濃度與疾病情況正相關(guān)，且不受機體，日間差，藥物治療，放化療影響。全程CRP可廣泛適用于發(fā)熱待查及疑似感染的患者的感染診斷與

41、診斷，感染監(jiān)控，治療指導，疾病預后等。,全程CRP臨床應用,1,CRP與常用感染指標對比，更靈敏，特異性更好。 2、更快更準確的鑒別細菌感染和病毒感染，及時快速幫助醫(yī)生對病人病情做出判斷、治療。 3,監(jiān)控病情變化及術(shù)后感染 術(shù)前CRP值大于25mg/l的患者,手術(shù)發(fā)生感染的概率明顯高于術(shù)前CRP值小于 25mg/l的患者,建議:對術(shù)前CRP值大于25mg/l的患者,加強消炎治療,手術(shù)時間調(diào)整到患者CRP水平降到25mg/l.以下。對術(shù)前CRP值小于25mg/l的患者必須立即進行手術(shù)時,術(shù)后應加強護理,并視情況預防性使用抗生素。當外科，骨傷科，婦科手術(shù)后伴有細菌感染，高CRP會持續(xù)存在，連續(xù)定量

42、測定CRP有重要的臨床意義。 4、觀察抗生素治療療效 5、心血管疾病hsCRP是心血管炎癥病變的生物標志物。個體hsCRP基礎(chǔ)水平和未來心血管病的發(fā)病關(guān)系密切（其水平升高同健康人群未來發(fā)生CAD、腦血管病、周圍動脈疾病等事件的危險成正相關(guān),心梗三聯(lián),心梗三項快速診斷實驗指：肌鈣蛋白（CTnI）、肌酸激酶同工酶（CKMB）、肌紅蛋白（Myo）。在進行心肌損傷標志物檢測時應該同步檢測相關(guān)標志物。三種標志物Myo、cTnI、CK-MB釋放的時間是不同的，同時快速測定三種標志物，較單獨測定更方便,更快速，時間上同步更利于對結(jié)果的分析和判斷，從而更能夠做到快速、準確診斷。,心梗三聯(lián)臨床應用,肌紅蛋白（M

43、yoglobin，Myo）：是目前心肌受損后最早發(fā)生異常增加的心肌蛋白標志物,急性心梗（AMI）發(fā)作2h后的血清Myo即開始升高，4-6h達高峰。由于Myo無心肌特異性，肌紅蛋白的陰性有助于排除AMI的診斷；使用該標志物的最佳戰(zhàn)略是利用它的高陰性預測值和靈敏度以排除心肌梗死。 肌鈣蛋白I(CTn I)：是目前公認的、特異性最高且持續(xù)時間最長的診斷心梗的可靠指標。心肌肌鈣蛋白一般在心肌損傷后4-8小時在外周血中逐漸增高，最高值在12-24小時出現(xiàn)。在心肌損傷后7-10天外周血中仍可探測到增高的心肌肌鈣蛋白。急性心梗病人的血中cTnI濃度可高達100-300ngml。主要用于對心肌損傷-特別是微小

44、損傷的診斷，還可用于心臟手術(shù)時心肌缺血的可靠指標，可用于評價心肌的保護性措施。急性心梗后溶栓治療的指示物；判斷再灌注效果。 CK-MB:是目前臨床醫(yī)生最信賴的AMI檢測“金標準”，特異性較高。,肌鈣蛋白定量,肌鈣蛋白（cTn）被認為是目前用于ACS診斷最特異的生化marker，它們出現(xiàn)早，最早可在癥狀發(fā)作后2h出現(xiàn)；具有較寬的診斷窗：cTnT（514天），cTnI（410天）。在它們的診斷窗中，cTn增高的幅度要比CK-MB高510倍。由于在無心肌損傷時cTn在血液中含量很低，因此也可用于minor mycardial damage（MMD，微小心肌損傷）的診斷，這是以前酶學指標所難以做到的。cTn還具有判斷預后的價值，對任何冠狀動脈疾患病人，即便ECG或其他檢查（如運動試驗）陰性，只要cTn增高，應視為具有高危險性。,肌鈣蛋白定量臨床應用,1.是早期診斷AMI最好的標志物 2.對于ST段抬高的AMI病人，迅速地再血管化已成為臨床標準的治療方案。 3.估計梗塞面積和心功能 4.其他如鈍性心肌外傷、心肌挫傷、甲狀腺機能減退病人的心肌損傷、藥物的心肌毒性、嚴重膿毒血癥和膿毒血癥導致的左心衰時cTn也可升高。 5.其他心肌標志物的心肌特異性不如cTn 6.cTnT用于血透病人心