革蘭染色法、細(xì)菌的特殊染色法

1、實(shí)驗(yàn)一 革蘭染色法、細(xì)菌的特殊染色法,微生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)教研室,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握細(xì)菌革蘭染色的原理與方法 掌握細(xì)菌芽孢染色的基本原理與方法 熟悉普通光學(xué)顯微鏡的油鏡使用與保養(yǎng),實(shí)驗(yàn)原理,革蘭染色法的簡(jiǎn)介 革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最廣泛使用的一種鑒別染色法。由丹麥醫(yī)師Christian Gram創(chuàng)立。 方法是先將細(xì)菌用結(jié)晶紫染色，加媒染劑（增加染料和細(xì)胞的親和力）后，用脫色劑（乙醇和丙酮）脫色，再用復(fù)染劑染色。,實(shí)驗(yàn)原理,革蘭染色法的原理 一般認(rèn)為革蘭陽性菌的細(xì)胞壁較厚，肽聚糖含量高，且交聯(lián)度大，脂類含量少，經(jīng)95%乙醇脫色時(shí)，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，與細(xì)胞結(jié)合的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物不容易被脫

2、掉，因此細(xì)胞仍保留初染時(shí)的顏色。而革蘭陰性菌的細(xì)胞壁較薄，脂類含量較高，肽聚糖含量較低，乙醇脫色時(shí)溶解外層類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染之后，又染上了復(fù)染的顏色。,實(shí)驗(yàn)原理,芽孢染色法的原理 芽孢具有厚而致密的壁，折光性強(qiáng)，通透性低，不易著色，用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色。芽孢染色法都基于同一個(gè)原則，即除了使用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱或延長(zhǎng)染色時(shí)間等，促進(jìn)標(biāo)本著色。然后使菌體脫色而芽孢上的染料仍然保留。經(jīng)復(fù)染之后，菌體和芽孢呈不同的顏色。,實(shí)驗(yàn)材料-菌株,金黃色葡萄球菌（209P） 18-20h斜面 大腸桿菌 18-20h斜面 枯草芽孢桿菌 20-24h斜面,實(shí)驗(yàn)材料-試劑,蒸餾水 結(jié)晶紫 盧戈碘液 95%乙醇 番紅花紅 孔雀綠,實(shí)驗(yàn)步驟,革蘭染色法 涂片 干燥 固定 初染（結(jié)晶紫1分鐘） 水洗 媒染（碘液1分鐘內(nèi)換2-3次） 水洗 脫色（95%乙醇20-30秒） 水洗 復(fù)染（番紅花紅5分鐘） 水洗 吸水紙吸干 鏡檢,實(shí)驗(yàn)步驟,芽孢染色法 涂片 干燥 固定 初染（孔雀綠20分鐘） 水洗 復(fù)染（番紅花紅5分鐘） 水洗 吸水紙吸干 鏡檢,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,其它項(xiàng)目,預(yù)習(xí)酵母菌和霉菌的形態(tài)觀察