啤酒中雙乙酰的測(cè)定(EBC法).ppt

1、啤酒中雙乙酰的測(cè)定（EBC法）,主講人：,物理性質(zhì),雙乙酰：亦稱雙乙酰酮或2，3-丁二酮，黃色油狀液體，有苯醌氣味，稀溶液有奶油氣味，存在于茴香油和奶油中。熔點(diǎn)-3-4、沸點(diǎn)8891，密度（15/15）0.990g/cm3，溶于水，能與乙醇、乙醚混溶。當(dāng)其在啤酒中的含量超過一定濃度(0.15mg/L)時(shí)，啤酒就會(huì)出現(xiàn)一種令人不愉快的氣味，嚴(yán)重影響啤酒的風(fēng)味和口感質(zhì)量，因此在啤酒的生產(chǎn)過程中需要對(duì)其進(jìn)行控制。,原理,鄰苯二胺與聯(lián)二酮類反應(yīng)，生成2,3-二烷喹喔啉，反應(yīng)式如下： R2C2O2+C6N2H8 R2C8N2H4+2H2O 2,3-二烷喹喔啉的鹽酸鹽在335nm波長處有最大吸收，其吸光度

2、與聯(lián)二酮的濃度成正比，根據(jù)測(cè)得的吸光度可換算出以雙乙酰計(jì)的聯(lián)二酮含量。,儀器和試劑,儀器 電子天平（0.1mg）； 紫外可見分光光度計(jì)（應(yīng)符合或高于GB9721要求）； 半微量凱氏定氮蒸餾裝置（100mL）。,儀器和試劑,試劑 消泡劑 有機(jī)硅消泡劑或甘油聚醚。 4mol/L鹽酸溶液 量取34mL濃HCl，用水定容至100mL。 1%鄰苯二胺溶液 準(zhǔn)確稱取0.5g鄰苯二胺，溶于4mol/L HCl溶液中，并以4mol/L HCl溶液定容至50mL，貯存于棕色瓶中（宜當(dāng)天配制）。,儀器和試劑,0.5000mg/L雙乙酰貯備液 稱取0.5000g優(yōu)級(jí)純雙乙酰，用水稀釋定容至1000mL，貯于棕色瓶中

3、，冰箱保存（最好現(xiàn)配現(xiàn)用）。 0.2500mg/mL雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)溶液 吸取雙乙酰貯備液5.00mL于25mL具塞比色管中，用水稀釋至10.0mL。,測(cè)定方法,蒸餾 于25mL具塞比色管內(nèi)加2.5mL水，置于冷凝器下端，使冷凝器下端浸入水中。量取未除氣的啤酒100.0mL，加24滴消泡劑，迅速加入到已預(yù)先加熱的蒸餾器中，用少量水沖洗加樣口，并做水封。繼續(xù)加熱蒸餾至餾出液近25mL。取下比色管，以水定容至25mL，混勻。 顯色 分別取10.00mL餾出液，置于兩支25mL具塞比色管中，向1號(hào)管加入0.50mL1%鄰苯二胺溶液，2號(hào)管不加（做空白）。充分搖勻，放置暗處反應(yīng)2030min。,測(cè)定方法,向

4、1號(hào)管中加入2.00mL 4mol/L HCl溶液，2號(hào)管加入2.50mL 4mol/L HCl溶液，搖勻。 同時(shí)準(zhǔn)確吸取0.10mL 0.2500mg/mL雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)溶液與25mL具塞比色管中，用水稀釋至10.0mL。加入0.50mL 1%鄰苯二胺溶液，充分搖勻，放置暗處反應(yīng)2030min。加入2.00mL 4mol/L HCl溶液。 比色 于335nm波長下，用2cm的石英比色皿，以空白做參比，用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)出樣品和雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，比色操作需在20min內(nèi)完成。,計(jì)算,聯(lián)二酮（以雙乙酰計(jì)，mg/L）= 0.625 無雙乙酰標(biāo)準(zhǔn)品，可按下式計(jì)算： 聯(lián)二酮（以雙乙酰計(jì)。mg/L）=A1.2-0.01 式中 A試樣的吸光度； 1.2吸光度與雙乙酰的換算系數(shù); 0.01校正數(shù)，可略去。,討論,雙乙酰不易純化，市售雙乙酰需測(cè)定純度，然后折算。 蒸餾時(shí)加入試樣要迅速，勿使成分損失，而且要盡快蒸出，最好在5min內(nèi)完成。如果蒸餾器體積小，或消泡劑效果差時(shí)，可將100mL試樣分兩次蒸餾（接收在同一支比色管內(nèi)）。調(diào)節(jié)蒸汽量，控制蒸餾速度，勿使泡沫過高而被蒸汽帶出。 試樣蒸餾結(jié)束后，加入稀堿液煮沸，以除去附著在容器壁上的殘?jiān)?，再用熱水沖洗至中性（pH試紙檢驗(yàn)）。 顯色反應(yīng)宜在暗處進(jìn)行，如在光亮處可導(dǎo)致結(jié)果偏高。,補(bǔ)充,改進(jìn)EBC法：用4mol/mL鹽酸鄰苯二胺溶液從