分子生物學(xué)學(xué)生復(fù)習(xí)題答案

1、簡答題1.簡述Sanger法的DNA測序原理。利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設(shè)立四種相互獨立的測序反應(yīng)體系，在每個反應(yīng)體系中加入不同的雙脫氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作為鏈延伸終止劑。在測序引物引導(dǎo)下，按照堿基配對原則，每個反應(yīng)體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后，從凝膠底部到頂部按53方向讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列 。2.簡述遺傳分析中用于點突變的代表性技術(shù)有哪些。 等位基因特異性寡核苷酸（ASO）分子雜交 反向點雜交

2、變性高效液相色譜 DNA序列分析 PCR - 限制性片段長度多態(tài)性分析3.簡述基因治療的策略。（1）缺陷基因精確的原位修復(fù)基因矯正基因置換（2）基因增補（3）基因沉默或失活4.簡述基因治療的基本程序。1. 選擇治療基因 2. 選擇攜帶治療基因的載體3.選擇基因治療的靶細胞4.在細胞和整體水平導(dǎo)入治療基因5.治療基因表達的檢測5.簡述癌基因活化的機制。獲得啟動子與增強子染色體易位基因擴增點突變6.簡述RB基因（視網(wǎng)膜母細胞瘤基因。抑癌基因）的作用機制。 非磷酸化形式有活性，抑制細胞增殖 對腫瘤的抑制作用與轉(zhuǎn)錄因子E-2F有關(guān) 低磷酸化Rb能結(jié)合E2F-1使之失活，細胞周期進展受抑，不能通過G1-

3、S關(guān)卡。 高磷酸化Rb不能結(jié)合E2F-1，相關(guān)基因開放，促進細胞通過G1-S關(guān)卡，細胞增殖。7.簡述原癌基因的產(chǎn)物及功能。1. src家族 酪氨酸蛋白激酶（信號轉(zhuǎn)導(dǎo)類蛋白）2. ras家族 P21蛋白（GTP酶活性）3. myc家族 核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白（核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子類）4. sis家族 P28（類人血小板源生長因子)（生長因子類）5. myb家族 核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子（核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子類）6. erb家族生長因子及其受體和蛋白激酶 8.簡述印跡技術(shù)的分類及應(yīng)用。DNA印跡 (Southern blotting)用于基因組DNA、重組質(zhì)粒和噬菌體的分析。RNA印跡 (Northern blotting)用于

4、RNA的定性定量分析蛋白質(zhì)的印跡 (Western blotting)用于蛋白質(zhì)定性定量及相互作用研究。9.簡述 PCR 反應(yīng)體系的基本成分、 PCR 的基本反應(yīng)步驟和主要用途。成分：模板DNA、特異性引物、耐熱DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+步驟：變性、退火，延伸用途：（一）目的基因的克?。ǘ┗蛲蛔儯ㄈ?DNA和RNA的微量分析（四）DNA序列測定（五）基因突變分析10.Southern blotting為什么要進行預(yù)雜交？預(yù)雜交是為了篩選有利的變種.為了獲得目的物種，就需要預(yù)先的雜交篩選工作11.DNA的損傷的原因是什么?（一） 體內(nèi)因素-誘發(fā)DNA“自發(fā)損傷”DNA復(fù)制錯誤DNA

5、自身的不穩(wěn)定性機體代謝過程中產(chǎn)生的活性氧（ROS）（二） 體外因素物理因素（電離輻射、紫外線）化學(xué)因素（自由基，堿基類似物，堿基修飾劑、烷化劑，嵌入性染料）生物因素（黃曲霉毒素）12.簡述堿基切除修復(fù)的大致過程。在多種酶的作用下，先將損傷區(qū)域切除，然后利用互補鏈為模板，合成一段正確配對的堿基順序來修補。（作用過程：識別并切除 修復(fù)合成并連接）13.真核生物基因及基因組的結(jié)構(gòu)特點各是什么？基因：真核基因的基本結(jié)構(gòu)（斷裂基因）基因編碼區(qū)編碼多肽鏈和特定的RNA分子調(diào)控序列參與真核基因表達調(diào)控基因組：基因的編碼序列少有大量的重復(fù)序列存在多基因家族和假基因有可變剪接DNA+蛋白質(zhì)染色體體細胞的基因組為

6、二倍體14.簡述質(zhì)粒的基本特征。 是細菌細胞內(nèi)、染色體外共價閉合環(huán)狀DNA分子 能夠獨立于細胞的染色質(zhì)DNA而進行復(fù)制 對宿主細胞的生存不是必需的 能賦予細菌特定的遺傳性狀15.真核生物染色質(zhì)活化有哪些主要表現(xiàn)？論述題1.試述基因診斷的特點及基本技術(shù)。特點：針對直接病因診斷特異性強，靈敏度高適應(yīng)性強，診斷范圍廣目的基因是否處于活化狀態(tài)均可，無組織和發(fā)育特異性在感染性疾病的基因診斷中，可檢測正在生長的病原體或潛伏病原體基本技術(shù)：核酸雜交（斑點印跡、Southern印跡、Northern印跡、原位雜交、等位基因特異寡核苷酸探針雜交）聚合酶鏈反應(yīng)（具體）DNA測序（具體）基因芯片技術(shù)（具體） 限制性

7、內(nèi)切酶酶譜分析法2.舉例說明原癌基因和抑癌基因是如何調(diào)控細胞增殖和凋亡的。(1)原癌基因的編碼產(chǎn)物是生長因子、生長因子受體、胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、轉(zhuǎn)錄因子、cyclin 及CDK等。(2)正常情況下，原癌基因的編碼產(chǎn)物為細胞生長所必需。如 ras 編碼Ras蛋白，是一種小G蛋白，參與細胞內(nèi)生長信號的傳導(dǎo)，從而促進細胞的生長。 (3)特定條件下，原癌基因通過點突變、DNA重排、基因擴增、染色體易位、病毒啟動子及增強子的插入等機制活化，過度轉(zhuǎn)導(dǎo)生長信號，導(dǎo)致細胞惡性增殖。(4)抑癌基因的編碼產(chǎn)物起著抑制細胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、負性調(diào)節(jié)細胞周期的作用，從而抑制細胞增殖，促進細胞凋亡。如p53蛋白可以抑制細胞的

8、生長，同時它也可以促進細胞的凋亡。(5)細胞增殖與凋亡是癌基因和抑癌基因的相互作用的結(jié)果。正常細胞向惡性細胞轉(zhuǎn)化涉及原癌基因活化、抑癌基因失活等因素的綜合作用。 (6) 癌基因和抑癌基因在某些條件下可以相互轉(zhuǎn)變，如 野生型的p53基因?qū)儆谝职┗?，而突變的p53基因卻發(fā)揮癌基因的作用。 3.試述逆轉(zhuǎn)錄 PCR 、原位 PCR 和實時 PCR 技術(shù)的基本原理和主要區(qū)別。逆轉(zhuǎn)錄PCR：逆轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一種技術(shù)。RT-PCR是目前從組織或細胞中獲得目的基因以及對已知序列的RNA進行定性及半定量

9、分析的最有效方法。 原位PCR：原位PCR(in situ PCR)是在組織切片或細胞涂片上的單個細胞內(nèi)進行的PCR反應(yīng)，然后用特異性探針進行原位雜交，即可檢出待測DNA或RNA是否在該組織或細胞中存在。原位PCR方法彌補了PCR技術(shù)和原位雜交技術(shù)的不足，是將目的基因的擴增與定位相結(jié)合的一種最佳方法。實時PCR：引入了熒光標記分子，并使熒光信號強度與PCR產(chǎn)物量成正比，對每一反應(yīng)時刻的熒光信號進行實時分析，就可算出PCR產(chǎn)物量，實現(xiàn)了mRNA水平的快速定量分析，已經(jīng)在基因診斷方面得到臨床應(yīng)用4.試述酵母雙雜交技術(shù)的基本原理及應(yīng)用。原理：應(yīng)用： 證明兩種已知基因序列的蛋白質(zhì)可以相互作用的生物信息

10、學(xué)推測。 分析已知存在相互作用的兩種蛋白質(zhì)分子的的相互作用功能結(jié)構(gòu)域或關(guān)鍵的氨基酸殘基。、 將擬研究的蛋白質(zhì)的編碼基因與BD基因融合成為“誘餌”表達質(zhì)粒，可以篩選AD基因融合的“獵物”基因表達文庫，篩選未知的相互作用蛋白質(zhì)。5.PCR的引物設(shè)計一般遵守什么原則？ 引物長度，15-30bp,常用20bp左右堿基分布均衡，同一堿基連續(xù)不應(yīng)超過5個，GC含量一般40-60%引物Tm值一般為55C到60C不能有反向重復(fù)和自身互補序列6.試述常見的DNA損傷途徑及每條途徑的修復(fù)對象和參與修復(fù)的酶或蛋白。7、討論乳糖操縱子的正負調(diào)控機制。(1)乳糖操縱子包含3個結(jié)構(gòu)基因（編碼半乳糖苷酶、半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙?；福?、3個調(diào)控元件（啟動子、操縱基因和CAP結(jié)合位點）和1個調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。 (2)阻遏蛋白的負調(diào)控：無乳糖時，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動子，抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時，生成別位乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，不能封閉操縱基因，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄。(3)cAMP-CAP復(fù)合物的