微生物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1、.,08級(jí)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)考試試題解答PPT,PPT制作人： 36號(hào) 龔鵬 解說人 ： 35號(hào) 張青 36號(hào) 龔鵬 37號(hào) 曾澤文,第八組,.,問題：,某細(xì)菌肥料是由相關(guān)的不同 組成的一個(gè)菌群并通過混合培養(yǎng)得到的一種產(chǎn)品。 的多少是質(zhì)量好壞的一個(gè)重要標(biāo)志之一，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案來檢測(cè)該細(xì)菌肥料的質(zhì)量？在實(shí)驗(yàn)過程中為減少實(shí)驗(yàn)誤差提高數(shù)據(jù)的可靠性，應(yīng)該注意那些操作步驟？,微生物,活菌數(shù),.,我們的思路,一、題目分析 二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 三、解題總結(jié),.,一、題目分析,某細(xì)菌肥料是由相關(guān)的 組成的一個(gè)菌群并通過混合培養(yǎng)得到的一種產(chǎn)品。 的多少是質(zhì)量好壞的一個(gè)重要標(biāo)志之一，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案來檢測(cè)該細(xì)菌肥料的質(zhì)

2、量？在實(shí)驗(yàn)過程中為減少實(shí)驗(yàn)誤差提高數(shù)據(jù)的可靠性，應(yīng)該注意那些操作步驟？ 從題目我們可以看出該題目的要求是 ； 因此，必須考慮以下幾個(gè)問題：,不同微生物,活菌數(shù),檢測(cè)單位質(zhì)量細(xì)菌肥料中的活菌數(shù),減少實(shí)驗(yàn)誤差,.,1、該細(xì)菌肥料中的不同微生物,通過查找資料我們了解到細(xì)菌肥料，一般有 、 、 、 和 等分成。由此，我們推斷該細(xì)菌肥料中大概有 、 和 。,瘤菌劑,固氮菌劑,磷細(xì)菌劑,抗生菌劑,復(fù)合菌劑,細(xì)菌,真菌,放線菌,有哪幾種？,.,2、如何 這些微生物？,選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)； 用平板分離法分離。,分離純培養(yǎng),.,3、怎樣,采用平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)法要求操作熟練、準(zhǔn)確，否則難以得到正確結(jié)果。 要求樣品成分混

3、勻，保證每個(gè)活細(xì)胞都能分別形成菌落；盡可能選用選擇性培養(yǎng)基，保證計(jì)數(shù)菌落圍有效菌落。,減少實(shí)驗(yàn)誤差？,解決方法：,.,思考之后,鑒于，以上幾點(diǎn)我們綜合考慮，最終決定采 用 分離純化微生物并測(cè)定樣品中活菌數(shù)。,稀釋涂布平板法,.,二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?2、實(shí)驗(yàn)原理 3、實(shí)驗(yàn)過程,.,1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?檢測(cè)單位質(zhì)量樣品細(xì)菌肥料中的 。,活菌數(shù),.,2、實(shí)驗(yàn)原理,，分離培養(yǎng)樣品中的不同微生物。不同的培養(yǎng)基，由于營(yíng)養(yǎng)成分不同，因此具有選擇性，適合改培養(yǎng)基的微生物就可以生長(zhǎng)；反之，則不能生長(zhǎng)，根據(jù)不同的選擇培養(yǎng)基，我們可以分離出樣品中的不同微生物。 ，是種統(tǒng)計(jì)物品含菌數(shù)的有效方法。方法如下：將待測(cè)樣品

4、經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液涂布到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞；統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。,利用選擇培養(yǎng)基,平板菌落計(jì)數(shù)法,.,3、實(shí)驗(yàn)過程,（一）樣品的處理和稀釋 （二）培養(yǎng)基的配置及倒平板 （三）涂布 （四）培養(yǎng) （五）計(jì)數(shù)和報(bào)告,.,（一）樣品的處理和稀釋,1.以無菌操作取檢樣10g，放于盛有90ml滅菌蒸餾水的滅菌三角瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)，經(jīng)充分研磨、搖床震蕩制成1：10的均勻稀釋液。 2.用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml

5、，注入含有9ml滅菌蒸餾水稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混合均勻，制成1：100的稀釋液。 3.另取1ml滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序，制10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。,.,操作示意圖：,.,【注意1：樣品稀釋誤差】,1、為減少樣品稀釋誤差，在連續(xù)遞次稀釋時(shí)，每一稀釋液應(yīng)充分振搖，使其均勻，同時(shí)每一稀釋度應(yīng)更換一支吸管。 2、在進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí)，應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀釋液內(nèi)，以免吸管外部粘附的檢液溶于其內(nèi)。 3、為減少稀釋誤差，最好采用取10mL稀釋液，注入90mL緩沖液中。,.,（二）培養(yǎng)基的配置及倒平板,1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（培養(yǎng)細(xì)菌用) 2、高

6、氏I號(hào)培養(yǎng)基（培養(yǎng)放線菌用） 3、馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基（分離真菌用）,.,倒36個(gè)培養(yǎng)皿,操作圖,.,【注意2：倒平板誤差】,1. 倒平板時(shí)傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一，從1220ml不等，一般以15ml較為適宜，平板過厚可影響觀察，太薄又易于干裂。傾注時(shí)，培基底部如有沉淀物，應(yīng)將底部棄去，以免與菌落混淆而影響計(jì)數(shù)觀察。 2.為使菌落能在平板上均勻分布，檢液加入平皿后，應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻，可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，檢樣從開始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過20min，以防止細(xì)菌有所死亡或繁殖。,.,（三）涂布,操作方法： 選擇個(gè) 4個(gè)稀釋度，以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固

7、的培養(yǎng)基平板上，然后用無菌的玻璃涂棒把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平皿。,.,（四）培養(yǎng),待瓊脂凝固后，將含高氏I號(hào)培養(yǎng)基和馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基的平板倒置與28溫室中培養(yǎng)3-5d，牛肉膏蛋白胨平板倒置與37溫室中培養(yǎng)1-2d。,.,【注意3】,1、無菌操作：操作中必須有“無菌操作”的概念，所用玻璃器皿必須是完全滅菌的，不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝，應(yīng)用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。 2、操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺(tái)或經(jīng)過消毒處理的無菌室進(jìn)行。,.,（五）計(jì)數(shù)和報(bào)告,操作方法： 培養(yǎng)到時(shí)間后，取出培養(yǎng)皿，計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù)目。計(jì)數(shù)時(shí)可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)，計(jì)算出每克樣品中的菌落數(shù)。 計(jì)算方法： 每克樣品中的菌落數(shù)（個(gè)）=同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)（個(gè)）稀釋倍數(shù),.,結(jié)果統(tǒng)計(jì),將計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表,.,【注意4：計(jì)數(shù)誤差】,1. 到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。 2計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)在30300之間的平板 3不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比。 4當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，要仔細(xì)觀察 清楚再計(jì)數(shù)。,.,三、解題總結(jié),首先，看到這個(gè)題目時(shí)，我們覺得最難的就是，不知道該