廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院袁浩股骨頭壞死專題；

1、中西醫(yī)結合治療股骨頭壞死臨床研究2000年獲國家科技進步二等獎,廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院 全國中醫(yī)髖關節(jié)疾病醫(yī)療中心,股骨頭壞死,世界骨科領域三大難題之一 臨床常見，發(fā)病率呈上升趨勢 好發(fā)于20-50歲的中青年 早期診斷與治療十分困難,股 骨 頭 壞 死,創(chuàng)傷、激素、酒精中毒為主要原因 非創(chuàng)傷性發(fā)病機制十分復雜，尚未完 全清楚 血管內凝血、脂肪栓塞、骨內高壓、細胞毒性、骨質疏松等多種途徑-股骨頭血循環(huán)障礙-壞死發(fā)生,股骨頭壞死的危害,致殘率高，嚴重影響 生活質量 患者喪失勞動能力 給家庭和社會帶來嚴 重經濟和精神負擔,股骨頭壞死發(fā)展過程,正常 缺血壞死 塌陷 骨性關節(jié)炎,缺血與塌陷是治療的難

2、點與關鍵,發(fā)病后相當時間缺少癥狀 早期疼痛可遠離髖關節(jié) 原有疾病干擾 x線片難以顯示早期壞死,早期診斷困難的原因,長期服用激素者應定期作mri或ect檢 查，直至停藥后至少一年以上 一側股骨頭壞死者，另一側應高度懷疑，并作相應檢查,早期診斷方法,對成年男性發(fā)生髖、膝疼痛，如 有酗酒史，必須排除股骨頭壞死， 及時作x線及mri或ect檢查,早期診斷方法,對股骨頸骨折愈合后患者，有下列表現者，應警惕發(fā)生股骨頭壞死 恢復正常行走后再次疼痛 x線片顯示股骨頭密度持續(xù)增高 內固定術后3月ect檢查股骨頭呈現“冷”區(qū),早期診斷方法,病史（創(chuàng)傷、激素、酒精等） 臨床癥狀：髖或膝痛 體征：腹股溝附近壓痛 髖活

3、動受限（旋轉、外展） 肌肉萎縮 跛行或行走困難,臨床診斷,最常用、最簡單、最直觀、最廉價 的診斷手段 能大致反映壞死范圍、部位；塌陷 范圍、程度；推測軟骨狀態(tài)；判斷 增生程度、頭臼關系,x線診斷,動態(tài)x線片能反映壞死轉歸趨勢 鑒別診斷不可缺少 確定手術方案主要依據、評價療 效的重要手段 攝片要求：清晰、雙髖正、蛙位 缺點：早期壞死敏感性差,x線診斷,ficat 分期 a b,袁氏 分期 a b,袁氏分期與ficat分期,ficat分期 ,袁氏 分期 a b c,袁氏分期與ficat分期,ficat分期 ,袁氏 分期 a b c,袁氏分期與ficat分期,股骨頭壞死范圍,局部壞死1/3 大部壞死

4、2/3 全頭壞死2/3,股骨頭壞死部位,內側部壞死 頂中部壞死 外側部壞死 中央部壞死,股骨頭壞死的病理分型,鄒某，女，雙側激素性anfh，郁阻型,徐某，男，左側酒精性anfh，大塊缺血型,梁某，男，雙側anfh，混合型(左側),張某，男性，左側增生硬化型，酒精性anfh,是ficat四期分法的改進 比較全面真實地反映了股骨頭壞死 病理演變的過程 更切合保留股骨頭治療方法的選擇,袁氏分期分型優(yōu)點,股 骨 頭 壞 死 診 斷,病史、癥狀、體征、x片 x片陰性，而臨床懷疑或一側確診為非創(chuàng)傷性壞死，另一側陰性時，作mri檢查，有金屬物存在時，作 ect檢查,鑒 別 診 斷,股骨頭壞死誤診為,腰椎間盤

5、突出癥,風濕病,腫瘤,膝關節(jié)疾病,鑒 別 診 斷,色素沉著絨毛結節(jié)性滑膜炎 強直性脊柱炎 髖關節(jié)結核 髖關節(jié)骨性關節(jié)炎 類風濕性關節(jié)炎 腫瘤 髖臼發(fā)育不良,誤診為股骨頭壞死,1、中青年好發(fā)，病情發(fā)展 較快，可能塌陷,骨性 關節(jié)炎,1、老年好發(fā)，病情發(fā)展 緩慢，極少塌陷,2、塌陷發(fā)生前關節(jié)間隙正常,3、致殘率高,2、早期可出現關節(jié)間隙變窄,3、多無嚴重致殘,鑒 別 診 斷,股骨頭 壞死,男 30歲 雙股骨頭壞死,女 67歲 雙髖原發(fā)性 骨性關節(jié)炎,股 骨 頭 壞 死 治 療,保留自身股骨頭是治療發(fā)展趨勢 絕大多數患者應避免首選人工關節(jié)置換 理由： 多數為中青年患者，目前的人工關節(jié)壽命 不能滿足患

6、者的要求 非創(chuàng)傷性壞死較其它髖關節(jié)病效果差,5年的失敗率10%50%(美 .mont) 中青年患者面臨多次更換手術(日.saito) 價格昂貴,中晚期西醫(yī)治療方法人工關節(jié)置換術,股 骨 頭 壞 死 治 療,對所有患者一律采用保守治療，使許多患 者失去獲得更好療效的機會 把疼痛暫時緩解，功能改善作為療效主要依據 對中晚期患者，輕率采用人工關節(jié)置換術,存在的誤區(qū),何某 男 51歲 保守治療前,治療23月后,治療54月,治療40月,中 醫(yī) 中 藥 治 療股 骨 頭 壞 死,亞臨床期 壞死發(fā)生在非負重區(qū)或為中央型 患者有嚴重內科疾病，不具備手術條件者 手術后配合應用,前景廣闊，難度很大，目前的適應癥,

7、股 骨 頭 壞 死,清除負重區(qū)死骨；重建股骨頭血運；防止或糾正塌陷 對晚期患者清除骨贅、改善功能；修補破裂軟骨，頭臼成形減輕骨性關節(jié)炎,手術治療目的,中醫(yī)中藥 保留股骨頭的手術,我們的治療方法 中西醫(yī)結合保留自身股骨頭,血脈瘀滯，不通則痛 疼痛 瘀阻樞節(jié) 關節(jié)功能障礙 筋骨失養(yǎng) 跛行,股骨頭壞死主要病機血瘀氣滯,袁氏活骨系列中藥,主要功用 活血化瘀 消腫止痛 補腎健骨 藥理研究表明：具有促進血管生長，促進成骨；另有提高機體免疫力和輕度的抗菌作用。 該方已通過國家保密品種審批，專家一致認為其對股骨頭壞死有“獨特療效”,保留股骨頭的手術,多條血管束分離 骨瓣移植,同時解決缺血與塌陷兩個關鍵問題,提

8、供豐富血運 防止或糾正塌陷,多條血管束植入示意圖,血管束植入股骨頭后的生長情況,切下的股骨頭 植入的血管束在股 血管束周圍 骨頭內的生長情況 的軟骨成骨,中醫(yī)中藥治療大法活血化瘀,早期患者 避免手術治療 中晚期患者 提高手術療效,早期（、） 或不具備手術 中藥 條件的中、晚期 中、晚期（-） 手術 + 中藥,中西醫(yī)結合治療方法,療效評價標準,按照作者參與制訂的全國骨壞 死學組標準 臨床癥狀 60分 x 線 40分,病例治療情況,袁氏活骨系列治療效果(總有效率91.6%, 總優(yōu)良率61.6%),分期 例數 隨訪例數 有效率 優(yōu)良率 1852 1246 93.6% 63.2% 1356 912 9

9、0.4% 60.8% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0,袁氏活骨系列配合手術治療效果(近期隨訪 1-5年),分期 例數 隨訪例數 有效率 優(yōu)良率 0 0 0 0 0 0 0 0 1556 1033 94.8% 86.7% 984 661 98.7% 89.1% 409 227 96.1% 85.9% 223 186 98.9% 87.5%,中西醫(yī)結合方法 人工關節(jié),優(yōu)良率,年數,韓素云 女 33歲 雙側股骨頭壞死（激素性 左b、右a） 94年1月28日行左側中藥+手術治療（多條血管束植入術加縫匠肌骨瓣），右側單純中藥治療,典 型 病 例,一側手術+服藥，一側單純服

10、藥,治療前 左側全頭壞死，嚴重塌陷，負重區(qū)可見 大塊死骨；右側大部壞死，輕度塌陷。,治療后1年 左側股骨頭明顯修復，塌陷基本糾正；右側壞死區(qū)縮小，股骨頭保持球形，無塌陷。,治療后3年：左側股骨頭進一步修復，密度趨向均勻，頭形態(tài)良好；右側壞死區(qū)范圍進一步縮小。,治療后4年 雙側股骨頭基本修復，外形良好，關節(jié)間隙基本正常。,右側服藥前 ct顯示股骨頭內大塊囊區(qū)存在,服藥4個月 囊區(qū)內出現新骨,服藥1年 囊區(qū)內成骨現象明顯,服藥31個月 囊區(qū)已基本被新生骨代替,術前功能 術后功能,治療后得到江澤民總書記的親切接見,譚某某 女 52歲 右側股骨頸骨折后股骨頭壞死（b） 1988年5月24日行多條血管束

11、植入術， 術后配合中藥治療,治療前 右側股骨頭大部壞死，明 顯呈錐形塌陷 。,治療后7.5年 右側股骨頭修復，密度均勻，外形良好，關節(jié)間隙基本正常,治療后9.5年 右側髖關節(jié)基本正常,治療后功能恢復正常 ，每天爬12層樓，一天三次,李佩君 女 36歲 因過敏性皮炎，應用激素治療致雙側股骨頭壞死，左側iiib，右側iiib，均為全頭壞死。,1991年10月左側行多條血管束植入術+服藥。,右側單純服藥6月，死骨吸收，新骨形成，頭趨園。,左側術后6月，頭增園，密度增高，死骨吸收，頂部軟骨成骨明顯。,治療14個月恢復工作，22個月參加大型舞會獲得一等獎。,李惠玲 女 44歲 雙側股骨頭壞死，右側在某醫(yī)

12、院做人工股骨頭置換，術后仍疼痛，喪失工作能力，用輪椅行走。,治療后2年恢復工作，服藥5.5年完全恢復正常。,91年10月右側作血管束植入+中藥，服藥12月。,李惠玲治療5.5年功能完全恢復正常。,彭某，男，31歲， 因小腦炎用激素治療引發(fā)雙側股骨頭壞死。,左側手術前,91年10月左側行多條血管束植入+中藥治療10.5個月。頭園，骨密度增高，提示血運豐富。,右側iiib，單純服藥治療10.5月，骨密度增高，壞死區(qū)明顯縮小，頭園，關節(jié)間隙清晰,右側服藥24月，頭園，密度進一步增高，達到臨床基本治愈。,左側術后+服藥24月，顯示頭頂部尚有部分軟骨成骨。,左側術后+中藥5年達到完全治愈。由于血管束提供

13、了豐富的血運，促進了股骨頭的恢復，所以塑形較右側為快。,右側服藥5年，頭塑形，骨小梁進一步增多。,治療2.5年功能恢復正常。,孫新亮 男 38歲 因酒精致雙側股骨頭壞死，右側iiia，全頭壞死（大塊缺血型），左側iib，大部壞死。,右側行血管束植入+中藥治療1.5年。頭園，死骨吸收，軟骨成骨。左側單純中藥治療，死骨吸收，新骨形成，恢復工作。,治療后3年，右側頭新骨形成，頭呈飽滿，尚有部分軟骨成骨。左側死骨吸收，成骨明顯，達到基本治愈。,治療后5年頭進一步塑形，達到臨床治愈。,單純服藥治療,洪鳳仙 男 58歲 雙側iia,服藥4月后自覺癥狀明顯好轉，疼痛減輕，雙髖自感輕松。x線顯示骨密度增加，死

14、骨吸收。,服藥7月進一步好轉。,服藥22月頭密度增高，骨小梁增多，關節(jié)間隙清晰，無明顯疼痛，行動自如。,服藥34月自覺行動進一步改善，骨小梁增多，密度增高，頭進一步飽滿，關節(jié)間隙清晰。,洪鳳仙功能相,馬惠珍 女 34歲 患sle用激素治療致左側股骨頭壞死iiib。,服藥2月死骨吸收，裂解，透明帶增加，部分骨密度增高，頭趨園。,服藥5月密度增高，趨均勻，頭頂部軟骨成骨，頭園。疼痛明顯減輕，功能改善。,服藥16月骨小梁形成，骨密度增高，趨均勻。,服藥2.5年，成骨明顯。,服藥5年10個月，達到臨床治愈。,張琴 女 36歲 因sle激素致雙側壞死，iiia。服藥治療。,服藥9月，壞死區(qū)縮小，骨密度增

15、高。,張琴功能相,趙玉慧 女 19歲 腦炎用激素治療致雙側股骨頭壞死，左側iiib，右側iiia。,服藥3月，右側骨密度明顯增高，均勻，左側死骨吸收明顯。,服藥19月，骨密度明顯增高。,趙玉慧功能相,何謂鴻 男 51歲 雙側激素性股骨頭全頭壞死，左側iiib，右側iib。,服5個月，死骨明顯吸收，裂解。,服10個月，死骨吸收，新骨形成。,服1 年11個月，進一步成骨明顯。,服40個月，死骨完全吸收，成骨明顯，部分軟骨成骨，達到臨床基本治愈。,王強 男 40歲，酒精致雙側股骨頭全頭壞死，左側iiib，右側iiia。,王強服藥2個月，死骨吸收，成骨明顯。,服5個月，成骨非常明顯，頭園，關節(jié)間隙正常

16、。,服9個月，進一步新骨形成和塑形。,呂固然之妻 女 70歲 右側股骨頭壞死vi期，合并骨性關節(jié)炎，關節(jié)間隙消失，疼痛劇烈。,服藥3個月，死骨吸收，新骨形成，關節(jié)間隙出現，疼痛減輕明顯。,來信告知：未服藥之前，除行走明顯跛行外，嚴重的是不分日夜酸、刺痛難忍，借助于炎痛喜康。自服該藥一瓶后，人感舒服，5瓶后感到輕微的疼痛，8瓶后患腿膝蓋下疼痛消除，停用炎痛喜康。,服藥3個月，患者來信：,黃碧玉 女 52歲 腎移植后，用激素抗排斥致雙側股骨頭壞死，左側在印尼做全髖置換仍不能減輕疼痛，右側iiia。來髖病中心求醫(yī)。,由于體質太差，無法做血管束植入，改用服藥治療，3個月后，疼痛明顯消失，離開輪椅，雙拐

17、行走。死骨吸收。,服7個月，死骨明顯吸收，骨密度增高，頭頂部軟骨成骨，活動行走輕便。,服藥16個月，成骨明顯，頭頂部軟骨鈣化，死骨完全吸收，行動方便，赴美旅游。,服藥3年，股骨頭進一步成骨，塑形，頭頂部軟骨繼續(xù)鈣化。,黃碧玉功能相,朱殷雷 男 20歲 因腦炎激素治療致雙側全頭壞死，iiia。,服藥4個月，壞死區(qū)明顯縮小，死骨吸收，成骨明顯，疼痛消失。,服藥7個月，死骨繼續(xù)吸收，軟骨成骨明顯。,服13個月，死骨完全吸收，進一步成骨塑形，頭呈園，密度趨均勻。,服32個月，頭繼續(xù)成骨和塑形，右頂部尚有小量軟骨成骨，19個月恢復工作。,朱殷雷功能相,丁傳友 男 71歲，右側股骨頸骨折2年，全頭出現壞死

18、，疼痛難忍。,蛙位片,服藥3個月，疼痛消失，x片顯示死骨吸收，成骨明顯，骨密度增高，頭呈園形。,服藥6個月，繼續(xù)成骨和塑形，骨密度進一步增高。,服藥10個月，骨密度進一步增高和塑形，出現骨小梁，從頸部上升。,服藥16個月，死骨完全吸收，成骨明顯，骨小梁形成，基本達到臨床治愈。,服藥2年4個月，進一步成骨和塑形，去拐行走。,丁傳友服藥3年功能相,王爐中 男 42歲，酒精致雙側股骨頭全頭壞死，左側iiia，右側iiib。,服藥3個月，右側死骨吸收，新骨形成明顯，壞死范圍縮小，左側死骨吸收，成骨明顯，顯示膜內成骨。,服藥6個月，雙側股骨頭成骨明顯，頭趨園形，均勻。,服藥9個月，骨密度進一步增高，均勻

19、，頭塑形。,服藥11個月，雙頭進一步成骨，骨密度明顯增高，頭塑形，增園，左側達到臨床基本治愈，去拐行走。,服藥22個月，右側壞死區(qū)縮小，形成中央壞死型，周緣密度增高，股骨頭支撐力增強，達到臨床基本治愈。,治療中應注意的問題,1. 疼痛：發(fā)生、發(fā)展過程，對策 2. 預防頭塌陷，及防止二次塌陷 3. 預防術后半脫位： 糾正骨盆的傾斜 髖臼唇不要全部切除 收緊關節(jié)囊，縫合密實 髖臼加蓋 包容不佳；外側壁低；年齡大，臀中肌力量弱者 外展牽引,骨性關節(jié)炎的預防：凡是頭已塌陷者均可能出現，故術后應維持牽引，加大關節(jié)間隙，扶雙拐行走時間宜盡量長，后期維持皮牽引，并服用袁氏系列中藥進行有效的預防和治療。 功能

20、康復：為安全渡過術后的疤痕期和攣縮期，應注意術后康復。術后3個月、6個月復查，若功能不滿意，宜進行手法推拿或麻醉下推拿 治愈后不要過度使用患側，增強自我保護意識，勞逸結合,小 結（1）,股骨頭壞死是常見的危害嚴重的髖關節(jié)疑難病 早期準確診斷是治療關鍵，袁氏分期分型方法進一步揭示了股骨頭壞死的病理演變規(guī)律，提高了該病的診斷水平 保留自身股骨頭是治療發(fā)展方向 中醫(yī)藥治療前景廣闊，有必要深入研究,首先應用中醫(yī)傳統(tǒng)的“去瘀生新”理論，指導股骨頭壞死的治療，顯示了中醫(yī)對于疑難病整體治療的優(yōu)勢 以重建股骨頭血運為核心的手術，能使多數中青年中晚期患者避免或推遲人工關節(jié)置換,小 結 (2),小 結（3）,手術

21、治療能否成功，與下列因素有關： 診斷是否精確 手術方法選擇是否符合原則 手術技術是否能達到手術目的 術后康復是否有針對性 病人能否很好合作,將中醫(yī)藥的整體治療與針對性的局部手術治療有機結合，采用中西醫(yī)結合治療股骨頭壞死的方法，使絕大多數股骨頭壞死患者都能恢復自身健康髖關節(jié)，從事正常工作與生活,小 結（4）,2000年6月，應美國virginia大學邀請進行學術交流，得到王國照教授和崔建軍教授的熱烈歡迎，相互交流了股骨頭壞死的治療經驗，“中西結合治療股骨頭壞死”受到王國照教授的高度評價。,國 外 交 流,訪問王國照教授,參觀崔建軍教授的實驗研究室,參觀美國hopkins大學醫(yī)學院關節(jié)中心 左：m

22、oint教授。 右：hungford教授,2001年5月7日王國照教授來我校進行學術交流 （左起第四：王國照教授）,王國照教授受聘儀式 （左起第二：王國照教授）,john paul jones,jr.,m.d.致袁浩教授的信件節(jié)譯,jones教授是arco(國際骨微循環(huán)學會)的前任主席,尊敬的袁浩教授： 希望您已收到我先前寫給您的信。僅在5天前我才收到您寄來的令人感興趣的cd光盤，不管如何，您在骨壞死方面進行了大量卓有成效的研究工作，這給我留下了深深的印象。 多年來，我一直在尋找具有預防或/和治療早期骨壞死的藥物，但至今尚未找到,也許您現在已經發(fā)現了這種藥物。若是，祝賀您!該袁氏中草藥極可能是

23、一個重大的科學貢獻， 特別是對于激素性和酒精性股骨頭壞死的非手術治療(和預防)， 且可能對激素和酒精誘導的骨質疏松，以及因老齡和肥胖引起的原發(fā)性骨性關節(jié)炎也有效。 目前，顯然我們尚不知道該草藥的活性成份。但是，基于五例激素性股骨頭壞死的臨床與放射學改變，以及您的實驗研究，我推測該中藥至少具有如下2個或更多的治療效應。,其一，該藥可能防止高脂血癥、骨內脂肪栓塞、骨內脂質通過骨小管進入骨陷窩引起的脂肪聚集，和進而導致的骨細胞壞死。,john paul jones,jr.,m.d.,其二，基于你們的研究，顯示該藥能改善骨內微循環(huán)，可能通過促進血管生成來起作用(在骨形成之前)。該藥還能刺激成骨細胞活性

24、，放射學上顯示能增加新骨形成。,中西醫(yī)結合治療股骨頭壞死系列研究榮獲2000年度國家科技進步二等獎。該課題先后還獲得國家中醫(yī)藥管理局科技進步二等獎（1999年）、廣東省中醫(yī)藥科技進步一等獎（1999年）、廣州中醫(yī)藥大學科技進步一等獎（1998年）、廣東省科技進步二等獎（1990年）、廣東省高校衛(wèi)生系統(tǒng)重大科技成果一等獎（1990年）等獎勵。,獲獎情況,2000年度國家科技進步獎勵大會在人民大會堂舉行，授獎者獲得國家領導人的親切接見。圖為胡錦濤副主席與袁浩教授的親切握手,圖為朱鎔基總理與袁浩教授親切握手,生脈成骨膠囊治療激素性股骨頭壞死的機理研究,股骨頭壞死的治療目的,改善或重建股骨頭內血液循環(huán)

25、 促進骨再生、加速骨修復，恢復股骨頭的組織結構 防止或糾正股骨頭塌陷、以及繼發(fā)性骨性關節(jié)炎,生脈成骨膠囊的開發(fā)研究簡況,60年代，用于治療開放骨折感染創(chuàng)面發(fā)現消炎生肌，促進骨生長作用 80年代早期，配合術后應用于股骨頭壞死。目前應用3000余例，療效滿意 80年代后期，單獨用于股骨頭壞死。目前治療3000余例，總有效率達91.2%,優(yōu)良率61.6% 今年1月進入期臨床，更名為“通絡壯骨膠囊”,生脈成骨膠囊的作用,氣滯血瘀病機關鍵、貫穿始終 活血化瘀基本治則 生脈成骨膠囊 功效：活血化瘀、補腎健骨、 消腫止痛、扶正固本,研究目的,生脈成骨 膠囊,促進血管再生 改善血液循環(huán),促進骨再生 加速骨修復

26、,通絡,壯骨,治療股骨頭壞死,動物：成年新西蘭兔56只，省衛(wèi)生廳提供 藥物：內毒素、甲基強的松龍 生脈成骨膠囊 造模：每只兔注射內毒素50g/kg共2次、 注射甲基強的松龍20mg/kg共3次， 2周后處死2只兔確認模型成立,實驗方法,分組：正常組、模型組、生脈成骨膠囊 組（中藥組），每組18只 觀察：中藥組以5ml /kg/日藥液（含生 藥0.42g/ml）灌胃，另兩組用生 理鹽水灌胃，三組動物分別于用 藥后4 周、8周、12周各處死6只 行相關檢查,檢 測 指 標,光鏡：空骨陷窩率、成骨細胞計數、軟 骨下血竇計數、tbv、mtw 電鏡：成骨細胞 、骨細胞、膠原纖維 原位雜交：型膠原mrna

27、，vegf mrna 骨組織生化代謝：第8周軟骨下骨膠原、 鈣、磷 血清放免檢測：bgp、il-6、,一、光鏡觀察結果,空骨陷窩率（%）比較,組別 4周 8周 12周 正常組 123 133 133 模型組 405* 5212* 589* 中藥組 235* 194 154 注：各組與正常組相比，* p0.05；* p0.01；與模 型組相比， p0.05； p0.01(以下同),模型組各時相點的空骨陷窩率較正常組升高。中藥組各時相點的則較模型組降低（p0.01），但第4周時空骨陷窩率高于正常組（p0.01）,成骨細胞計數（個）比較,組別 4w 8w 12w 正常組 272 282 283 模型

28、組 193* 182* 163* 中藥組 254 313 365,骨小梁相對體積(tbv,%)比較,組別 4周 8周 12周 正常組 503 513 536 模型組 464 412* 426* 中藥組 494 524 545,骨小梁平均寬度（mtw，m）比較,組別 4周 8周 12周 正常組 163.3314.75 161.5013.77 162.5013.77 模型組 150.677.47 144.838.54* 143.339.90* 中藥組 160.8313.17 165.1714.05 179.8318.08,軟骨下血竇計數(個)比較,軟 骨 下 血 竇,模型組,正常組,中藥組,髓腔內

29、血竇,正常組 模型組第12周 中藥組第12周,骨 小 梁,正常組 模型組第4周 中藥組第4周,骨 小 梁,正常組 模型組第12周 中藥組第12周,骨 細 胞,正常組 模型組第4周 中藥組第4周,成 骨 細 胞,正常組 模型組第12周 中藥組第12周,二、超微結構觀察,正常組接近成熟的骨細胞 模型組：細胞核開始固縮、核/漿 比例大， 呈現退變相,骨 細 胞,骨 細 胞,模型組 模型組 中藥組,正常組成骨細胞，粗面內質網發(fā)達，多聚核糖體豐富，線粒體多。,成 骨 細 胞,模型組成骨細胞，粗面內質網擴張、脫顆粒，線粒體腫脹，有呈氣球樣變，胞核皺縮。,中藥組成骨細胞，粗面內質網發(fā)達，多聚核糖體豐富，線粒

30、體多。,膠 原 纖 維,模型組成骨細胞，細胞器結構差，胞核有皺縮，核異染色質增多；基原質內膠纖維排列紊亂,中藥組的成骨細胞邊可見周期性膠原纖維，明 暗相間，排列有序。,三、原位雜交觀察,型膠原探針序列,針對型膠原1鏈的寡核苷酸探針序列： 5cacag atcac gtcat cgcac aacac cttgc cgttg3 5agctt caccg ggacg accag cttca ccagg agatc3 針對型膠原2鏈的寡核苷酸探針序列： 5tcact ccttc tacat tatat tcaaa ctggc tgcca3 探針采用地高辛標記，凝膠過濾備用。,血管內皮細胞生長因子(ve

31、gf)探針序列,(1) 5，cagcc tggga ccact tggca tggtg gaggt agagc3， (2) 5，cacat ctgca agtac gttcg tttaa ctcaa gctgc3， (3) 5，atatt aacat cacgt ctttg tctct agagc agttt3，,原位雜交步驟,固定 脫鈣 包埋 切片,切片脫蠟 消化,預雜交 雜交,封閉 加抗、抗,dab顯染 封片 觀察,型膠原mrna在股骨頭內表達的結果,陰性對照 陰性對照 軟骨細胞未見 陽性表達,正常組 模型組第4周 中藥組第4周,成 骨 細 胞,成 骨 細 胞,模型組第12周 中藥組第12

32、周,骨 髓,正常組 模型組第12周 中藥組第12周,12周時vegfmrna在成骨細胞的表達結果,正常組 模型組 中藥組 陽性表達 弱陽性表達 陽性表達,12周時vegfmrna在血管內皮細胞的表達結果,正常組 模型組 中藥組 中藥組 陽性表達 弱陽性表達 陽性表達 陽性表達,四、骨組織生化代謝,第8周時股骨頭內生化指標比較(g/mg),組 別 膠原量 鈣總量 磷總量 正常組 206.0616.03 197.3611.20 89.336.63 模型組 168.6815.74* 183.4610.98* 82.185.82* 中藥組 208.3216.80 198.3514.81 94.878.

33、07,五、血清放射免疫學檢測,txb2測定結果（單位pg/ml）,組別 4周 8周 12周 正常組 186.4648.21 185.9430.08 182.0636.37 模型組 634.4369.36 * 852.6261.67 * 960.8372.23 * 中藥組 467.8636.15 * 318.6943.82 196.4128.14 ,“瘀去”指標結果,6-k-pgf1測定結果（單位pg/ml）,組別 4周 8周 12周 正常組 58.5613.21 54.9412.18 56.0615.37 模型組 38.439.36 * 24.927.68 * 11.833.23 * 中藥組

34、52.8612.15 56.6910.32 61.219.54 ,“瘀去”指標結果,t/k比值的變化,組別 4周 8周 12周 正常組 3.181.21 3.380.98 3.250.87 模型組 16.514.36 * 34.219.68 * 81.220.23 * 中藥組 8.851.15 * 5.621.32 3.211.54 ,“瘀去”指標結果,血清骨鈣素(ng/ml)比較,組別 4 周 8周 12周 正常組 9.860.85 10.590.85 10.012.25 模型組 9.341.50 7.163.15* 7.142.98* 中藥組 10.291.89 9.922.03 11.7

35、00.86,血清il-6(pg/ml)比較,組別 4 周 8周 12周 正常組 82.3318.34 84.3121.77 90.7322.25 模型組 263.3761.13* 219.9453.84* 171.0574.91 中藥組 79.8525.12 64.4420.05 92.9468.22,討 論,動物模型的制備,單純用激素：脂質代謝紊亂、脂肪栓塞、骨細胞脂肪變性 激素加馬血清：血管炎、血管破壞、骨內和髓內出血 激素加內毒素：血液高凝、低纖溶，ic “血瘀”：部分臟器有瘀血、出血、血栓形成，t/k失平衡，高粘滯血癥等,本模型的特點（一）,內毒素加激素導致了動物“瘀”的情況 病理：動

36、物股骨頭局部發(fā)現有纖維蛋白血栓的形成，血管破壞，表現為血管內皮結構、平滑肌纖維排列紊亂。 原位雜交：血管內皮細胞中的vegfmrna的表達明顯降低。 血液學：txb2水平增高，6-keto-pgf1水平降低，t/k比值增高。,“血瘀”狀態(tài)下，出現了成骨功能低下的表現 病理：股骨頭髓腔內生血細胞減少，大的脂肪空泡，骨小梁結構紊亂，稀疏、碎裂，骨空骨陷窩率增高，成骨細胞數量較少，呈長梭形。 原位雜交：成骨細胞型膠原mrna的表達降低 血液學：bgp水平逐漸下降 骨吸收、骨丟失增加：骨小梁變細；骨吸收陷窩；骨有機質(膠原)和無機質(鈣、磷)丟失；血清il-6水平升高,本模型的特點（二）,骨形成減少,

37、骨丟失增加,骨修復差,加重骨壞死,局部血液高凝,小血管損害,血栓形成,血液供應差,生脈成骨膠囊能夠改善股骨頭壞死的瘀血狀態(tài) 病理：髓腔內生血細胞豐富，軟骨下血管豐富，小血管壁清晰正常，無明顯血栓形成。 原位雜交：血管周圍、成骨細胞均有持續(xù)的高陽性表達的vegf， 血液學：txb2水平隨時間而逐漸下降， 6-keto-pgf1逐漸增高的趨勢，t/k比值降低，,生脈成骨膠囊的作用特點（一）,隨著瘀血狀態(tài)的改善，生脈成骨膠囊應用組顯示出了較強的骨修復能力 病理：骨小梁結構整齊，排列規(guī)則；空骨陷窩率較低；骨小梁周沿的成骨細胞數量豐富 ，功能活躍， 細胞器豐富，多呈成骨相 原位雜交：成骨細胞型膠原mrna陽性表達數量較多 血液學：bgp水平隨時間逐漸升高，il-6水平隨時間逐漸降低,生脈成骨膠囊的作用特點（二）,本研究證實了生脈成骨膠囊能促進骨修復和血管新生，對于激素誘導的股骨頭壞死具有確切的治療作用,結 論,生脈成骨膠囊治療后骨內血管數量增加，骨髓修復，成骨細胞增殖分化增