細(xì)菌代謝產(chǎn)物的檢測(cè)及鑒定.ppt

,細(xì)菌的分類及鑒定 同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科,細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn),原理：由于細(xì)菌各自的酶系統(tǒng)不同，新陳代謝的產(chǎn)物也有所不同，而這些產(chǎn)物又各具有不同的生物化學(xué)特性。為此，可利用生物化學(xué)的方法來鑒別細(xì)菌的類別，這種試驗(yàn)稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn),常用檢查方法,碳水化合物代謝試驗(yàn) 氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn) 碳源利用試驗(yàn) 呼吸酶類試驗(yàn) 抑菌試驗(yàn),碳水化合物代謝試驗(yàn),糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn),原理 由于細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖類的酶，故分解糖的能力不同，終末產(chǎn)物亦不一致。 應(yīng)用 鑒定細(xì)菌最主要的試驗(yàn)，特別對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的鑒定尤為重要 。,氧化一發(fā)酵試驗(yàn)(OF試驗(yàn)),原理 氧化型：僅在有氧環(huán)境中分解葡萄糖 發(fā)酵型：在有氧或無氧環(huán)境中都能分解 葡萄糖 產(chǎn)堿型：在有氧或無氧環(huán)境中都不能 分解葡萄糖,結(jié)果： 兩支培養(yǎng)基均無變化為產(chǎn)堿型； 兩支培養(yǎng)基均產(chǎn)酸為發(fā)酵型； 若不加石蠟的培養(yǎng)基產(chǎn)酸為氧化型。 應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌（發(fā)酵型） 非發(fā)酵菌（產(chǎn)堿型/氧化型） 葡萄球菌（發(fā)酵型） 微球菌（氧化型）,-半乳糖苷酶試驗(yàn),原理：有的細(xì)菌可產(chǎn)生-半乳糖苷酶，能分解鄰-硝基酚-D-半乳糖苷(ONPG)，而生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下也可檢出。,結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反應(yīng)，一般在2030min內(nèi)顯色。 應(yīng)用：迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。本試驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。,七葉苷水解試驗(yàn),原理： 七葉苷 七葉素 黑色化合物 培養(yǎng)基：七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基。,細(xì)菌,枸櫞酸鐵,結(jié)果：培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛栃?，不變色者為陰性?應(yīng)用：D群鏈球菌（+） 其它鏈球菌（-）,甲基紅試驗(yàn),原理： 葡萄糖 丙酮酸 混合酸（pH ) 醇酮醛（pH ) 紅色反應(yīng)（+） 橘黃色（-）,細(xì)菌,甲基紅試劑,培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。 應(yīng)用：大腸埃希菌（+） 產(chǎn)氣腸桿菌（-） 腸桿菌科中沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬等為陽性，而腸桿菌屬則為陰性。,V-P試驗(yàn),原理： 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 紅色化合物（+） 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基,細(xì)菌,OH-,O,胍基,結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性；如無紅色出現(xiàn)且于35 4h后仍如故者即為陰性。 應(yīng)用：常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧栃缘募?xì)菌，后者通常為陰性。 產(chǎn)氣腸桿菌（+） 大腸埃希菌（-）,蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn),吲哚試驗(yàn),原理 色氨酸 吲哚 玫瑰吲哚 （紅色） 應(yīng)用 腸道桿菌的鑒定。 大腸埃希菌（+） 沙門菌屬（-）,對(duì)二甲基氨基苯甲醛,硫化氫試驗(yàn),原理 含硫氨基酸 硫化氫 硫化鉛/硫化亞鐵 （黑色） 應(yīng)用 腸桿菌科菌屬間的鑒定。,細(xì)菌,醋酸鉛/硫酸亞鐵,尿素（脲）酶試驗(yàn),原理： 無色 尿素 氨 紅色 應(yīng)用：腸桿菌科中變形桿菌屬的鑒定。,細(xì)菌,苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn),原理 苯丙氨酸 苯丙酮酸 10%氯化鐵 綠色化合物 應(yīng)用：腸桿菌科的鑒定 變形桿菌屬、摩根菌屬、普羅威 登斯菌屬（+）,氨基酸脫羧酶試驗(yàn),原理：氨基酸 特異性脫羧酶 胺CO2 指示劑變色 應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如肺炎克雷伯菌賴氨酸為陽性，鳥氨酸為陰性。,明膠液化試驗(yàn),原理：明膠 明膠酶 氨基酸 失去凝固力 應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如沙雷菌、普通變形桿菌、陰溝腸桿菌等。,碳源利用試驗(yàn),枸櫞酸鹽利用試驗(yàn),原理 枸櫞酸鹽 碳酸鹽+氨（pH ) 溴麝香草酚藍(lán) 綠色 深藍(lán)色 應(yīng)用：腸桿菌科細(xì)菌的鑒定 埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌 屬（-）,呼吸酶類試驗(yàn),細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn),原理 鹽酸二甲基對(duì)苯二銨 醌類化合物 （深紫色） 應(yīng)用 奈瑟菌屬、假單胞菌屬（+） 腸桿菌科（-）,細(xì)菌,Cyt氧化酶,過氧化氫酶（觸酶）試驗(yàn),原理 某些細(xì)菌分泌過氧化氫酶，使過氧化氫生成水和初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。 應(yīng)用 金黃色葡萄球菌、奈瑟菌屬（+） 鏈球菌屬（-）,（血漿）凝固酶試驗(yàn),原理 金葡 血漿凝固酶 應(yīng)用：致病性葡萄球菌的鑒定,游離,結(jié)合（凝聚因子）,協(xié)同因子,凝血