伊馬替尼對白血病相關抗原RHAMM特異性CD8 T細胞和CD4CD25調節(jié)性T細胞抑制的研究.doc

東南大學博士學位論文伊馬替尼對白血病相關抗原RHAMM特異性CD8+ T細胞和CD4+CD25+調節(jié)性T細胞抑制的研究姓名：陳錦飛申請學位級別：博士專業(yè)：遺傳學指導教師：陳寶安20070801 荷境癑阿瓼猚猚籝札籧 。纊鉚丞東南大學學位論文使用授權聲明東南大學、中國科學技術信息研究所、國家圖書館有權保留本人所送交學位論文的復印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。本人電子文檔的內容和紙質論文的內容相一致。除在保密期內的保密論文外，允許論文被查閱和借閱，可以公布n論文的全部或部分內容。論文的公布n授權東南大究生院辦理期： 櫻蟆啊薄返目掛籖特異性的馨拖赴娜芙夤芎透咂德適茿札患者猘特異性的酪氨酸激酶抑制劑“。它還作用于血小板來源的生長因子受體治療。 本研究的目的。為了闡述以上解釋，我們須回答如下問題： 續(xù)感染的控制力下降。沒有赴且銫赴募譚苑從1扔蠧細胞輔助下的弱“。早期起效期后而不是在起效期起作用”虼耍鋅贍芤諒硤婺岫遠約且湫訡 馨拖赴募詈馱鮒常種艭赴置諳赴蜃櫻鶻諳騎反應的細胞有不同的功能分化結果。的平衡，提示伊馬替尼抑制體內納傘醚芯拷峁蚑等的研究結果相吻合。 小時，這個可能可以解釋上三、伊馬替尼對正常造血干細胞和祖細胞的影響狵代表人干細胞因子芴澹虵春脫P“逕傷一起 更高劑量譬如每天薄級或兌隕系畝拘苑直鶚。伊馬替尼預小板減少貧血飧魷窒罌梢災稚鮮齬鄄臁薄磽猓詂札患者超過一年的高劑量伊馬替尼前瞻性研究揭示血清虸水平的顯著性變化“?；谏鲜鲅芯拷Y果，伊馬替尼對胃腸道基質腫瘤的治療特殊的意義，因為等“” 冷凍盒疭，。；光學顯微鏡猌，珿 ：琁，琋，保存；雙蒸水，保存；琋，。健康獻血員和后安吮甌糾叢春脫舯萻分離 第二章伊馬替尼對白血病相關抗原砌拍特異性赴虲鶻諦訲細胞抑制的研究姐臼【荒?，h分離緩沖液：含搜0椎鞍的 甽；充分混勻后在路胖分鐘；擲牖撼逡； 琇。收集所有的流出液，這是未標記的細胞部分；從分離架上移去磁柱，并置于合適的收集管上；，；，保存在：，；。不冷凍。 分離緩沖液洗滌細胞，充分去除細胞上清液；擲牖撼逡；的抗一生物素磁珠；磁珠； 分離緩沖液洗滌細胞，充分去除細胞上清液；擲牖撼逡。褂肔恰細胞使用分離緩沖液洗滌柱；用擲牖撼逡合吹覮次，收集所有未標記的細胞，其為未標記的富含擲牖撼逡。將細胞懸液放入柱中； 細胞株來源于原始細胞危象的槐澩颒分子但是可以表達校痗。用于在“釋放試驗中作為陰性對照。培養(yǎng)基； 計算和籘細胞；勻； 口卜腅試驗。任琾滴嬗； ，：在板中孵育細胞在每孔中加入經相應刺激物刺激的細胞懸液；養(yǎng)箱中薄諗嘌詡洳灰R貧疎板。斑點的檢測使用洗滌緩沖液圖觳飪固籅一生物素任孜鍶芤褐敝撩饗緣陌叩愕牟避光狀態(tài)下室溫放置種； ，；微球蛋白，。：包被緩沖液：保存；抗生蛋白鏈菌素一 按照每孔甽準各有絲分裂源以及相關抗原刺激的靶細胞；抗體的檢測去除細胞懸液，每孔用蒸餾水洗滌危詡涿靠酌看斡盟分鐘；吹次；渲煤玫腁底物溶液，監(jiān)測斑點的形成以防形成過分高的背景顏琋展餛椎奈裝逶畝療，。 生物素結合的抗一人單克隆抗體；醯目股鞍琢淳匾煌萈；稀釋液：試劑的準備，將標準品充分混勻；、和皿患穎曜計返難鞠鴕荷櫛工作檢測劑；徹一步底物試劑，在使用前分鐘之內配置。每孔加渲煤玫南吹踴撼逡合吹櫻次，最后一次用濾紙將孔中的骷觳餳粒肊板封口膜將夂茫謔椅孿路胖小渲煤玫南吹踴撼逡合吹櫻次，最后一次用濾紙將孔中的時： 能檢測笪展餛椎奈裝逶畝療琄，。標準品：基因重組的人猵洗滌濃縮液加入上述細胞標準品的準備蒸餾水后在震蕩器上至少震蕩分鐘；用聚丙烯小管將稀釋的標準品分裝，每小管。工作檢測品的準備猓荷鎪兀股鞍琢淳厥賊匆徊椒跤 吹踴撼逡合吹次。最后一次洗滌時用濾紙吸干：骷觳餳檢測抗體股鞍琢淳，用封口膜封好后琋熒光色素結合的抗一抗體痗撼逡海嬗；郵洗滌緩沖液褂檬庇盟徒衛(wèi)：稀釋嬗：的邢統(tǒng)嘣，再在每毫升的細胞培養(yǎng)液中加染色緩沖液：疊氮化鈉。所有的試劑都包含在“琒體外培養(yǎng)細胞的標記 為了標記細胞，仔細將指魷赴緩蠼赴跤分鐘。的細胞培養(yǎng)液中去。細胞的舊撼逡褐瀉蠶赴置入流式細胞儀檢測管中；溶液中； 櫓嘌叻琋。；甆的圓錐形管中。再將畬蟆癱頭靶細胞一 匾煨勻芙獾募撲惴椒檢測孔的釋放一自發(fā)“釋放最大“釋放一自 魘較赴叻琋，；碘化丙啶；5鞍譜結合緩沖液。中；聚丙烯圓底管管中；的并輕輕混勻；岷匣撼逡海時之內進行流式細胞儀進行分析。肋罅魘較赴肋琋琈，；狝疘， 琈，；琈， 號瓶：試劑含甲醛的固定劑；收集和計數(shù)細胞：將在室溫下放置分鐘；腎約罙并輕輕混勻；在室溫放置分鐘； 治療后的啦酥屑庥盞妓櫳腎特異性的的淋巴細胞進行培養(yǎng)產生疌特異性的。共對齛瘟坪蟮腃地病人和例健康獻血員的進行了匾煨訡腡細胞進行了體外培養(yǎng)的研究。為了確定體外誘導的特異性，經肽刺激的細胞作為籣虶的匝櫚陌邢赴的后的撕為了確定對馨拖赴畝鎏匾煨苑從褂肐和腅的刺激的反應。通過獃，和，的匝镋性的赴從菡飧鍪笛榻峁鮮實腞亮渴后的實驗中。馨拖赴曰匾淇乖腎的的反應也里劑量依懶性柿銜聰允。瓵糶詂嗵淋巴細胞對船四聚物染色的特異性 伽 通過甈而從健康獻血員或瘟坪蟮募舜匾煨緣腡淋巴細 甃甃甈 細胞增殖的細胞數(shù)為觶以、和和齛猄治療后私性誆煌亮員的匾煨緣腃淋巴細胞和來自說腞匾煨訡淋巴細胞的增 渲蠫被抑制的比猋更明顯。 樹， 議 聇癬騇 奎壹查蘭苧蘭蘭堡絲苧開瑚 甌，唧 猋砌 ，狟甌士 為了確定伊馬替尼對增殖的抑制作用，在不同濃度的伊馬替尼一 作用下的在抗一涂掛籆固宕碳缶天培養(yǎng)，用標記后使用流式細胞儀檢測細胞增殖情況。結果提示伊馬替諒硤婺嶙饔孟耇的增殖幾乎被 盧 伊馬替尼抑制人的細胞因子分泌對功能的影響，使用 討論四聚物腡細胞在瘟坪蟮腃虬病人中高于健康獻血員。這個結果顯示，的記憶細胞和前體細胞。分的馨拖赴堋狙芯肯允疽諒硤婺崢贍芑崴鷙淋巴細胞的功能。 兩次治療時的穩(wěn)定的血漿濃度可以達到絕對的生物利用度為“?；蛭四聚螇哪T淋巴細胞增殖和功能。體外試驗雖然不能完全代替體內試驗，但是伊馬替尼對蚏匾煨緣腃過猋和腅試驗以及”釋放試驗證實。制一赴腦鮒巢鼙澩鎦釗鏔、和萒的特 囊諒硤婺峒負蹌芡耆種芓的增殖。懿鶬。該因子是個多向性的細胞因子，能在一型細胞因子的介導下一致，本研究也顯示該藥也能劑量依懶性地抑制和的表面表達以及、虲南赴詒澩鎩囊諒硤婺崮芤種艭南赴礱姹澩鏌約癎和一的 白血病特異性細胞毒馨拖赴蚑兩者之間的比例。研究可以找到更理想的和騎細胞為基礎的免疫治療和伊馬替尼聯(lián)合治療的策略。 甌琀簁姍琓 ，瓸：， ：甆珿甁眥， 狝，琣甆： 珼：琒：瓻， 瓸：琒 ，：篸 甊琀 ：! ：琍： 琑琑!猘 一瓸猘 瓻瓻：，：疦 ：琑珹 參考文獻