藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課

藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課,藥理教研室,藥學(xué)專業(yè)實(shí)驗(yàn)課程安排,（1）實(shí)驗(yàn)基本技能,（2）不同給藥途徑對藥物的影響,（4）藥物對家兔離體腸平滑肌的作用,（5）嗎啡鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn),（3）藥物抗炎實(shí)驗(yàn),足腫脹法,耳片法,熱板法,扭體法,臨床醫(yī)學(xué)（本）實(shí)驗(yàn)課程,（1）實(shí)驗(yàn)基本技能,（2）不同給藥途徑對藥物的 影響,（5）藥物對家兔離體腸平滑肌的作用,（7）藥物對腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)的影響,（4）嗎啡鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn),（3）藥物抗炎實(shí)驗(yàn),（8）藥物對家兔心電圖的影響,（6）藥物對家兔動脈血壓的影響,實(shí)驗(yàn)課程學(xué)習(xí)要求,實(shí)驗(yàn)課程學(xué)習(xí)目的,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)一、基本實(shí)驗(yàn)操作看短片,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,標(biāo)題實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)器材：實(shí)驗(yàn)方法：結(jié)果：討論：結(jié)論：,二、不同給藥途徑對 藥物的影響,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆招∈蠼o藥的基本方法。 比較不同給藥途徑藥物起效的時(shí) 間快慢實(shí)驗(yàn)原理：不同的給藥途徑藥物吸收不同,1,實(shí)驗(yàn)動物：小鼠實(shí)驗(yàn)器材：0.4%戊巴比妥鈉、1ml注射器、 1ml灌胃器。,2,取6只小鼠，稱重、分組、標(biāo)記 給0.4戊巴比妥鈉（腹腔、皮下、灌胃） （0.1ml/10g） 觀察小鼠翻正反射消失及恢復(fù)的時(shí)間 分析、比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果,計(jì)時(shí),（1）注意給藥途徑的正確操作。 （2）注意小鼠翻正反射消失時(shí)間判定 （1min）。,4,仔細(xì)觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合藥理學(xué)總論知識思考，何種給藥途徑起效最快。為什么？,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn) 二、抗炎實(shí)驗(yàn) 1、大鼠足腫脹法 2、小鼠耳片法,1、大鼠足腫脹法,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)利用雞蛋清制急性炎癥動物模型方法。 觀察糖皮質(zhì)激素的抗炎作用。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：雞蛋清為異性蛋白，可致動物急性炎癥，出現(xiàn)局部腫脹，容積增加。比較給藥組與對照組動物局部容積的變化，從而觀察到藥物的抗炎作用。,1,和,實(shí)驗(yàn)動物：大鼠（雄性） 實(shí)驗(yàn)藥物：0.5%氫化可的松、10%雞蛋清、生理鹽水 主要儀器：（PV-200足趾腫脹測定儀）,大鼠兩只：稱重、標(biāo)記,甲、乙二鼠右踝關(guān)節(jié)的突起點(diǎn)處用筆劃線作為測量標(biāo)志，測定大鼠正常足容積(見后圖),動物,給藥30min， 從右后足掌心向掌跖關(guān)節(jié)方向進(jìn)針，皮下注射10%新鮮蛋清0.1ml。 (見后圖),注射蛋清后15min、30 min、45min、，測量右后足的體積，記錄數(shù)據(jù)。 計(jì)算腫脹率=（藥后-藥前體積）/ 藥前體積100%,甲（給藥組）：腹腔注射0.5%氫化可的松溶液 0.3ml/100g 體重乙（對照組）：腹腔注射生理鹽水0.3ml/100g 體重,計(jì)時(shí),皮下注射新鮮蛋清,抗炎實(shí)驗(yàn)中動物性別的選擇：雄性測定大鼠足體積時(shí)，選定統(tǒng)一測量位置（大鼠足外踝關(guān)節(jié)突起）注意測量時(shí)別把鼠足插得過深，避免測量杯中水溢出，影響準(zhǔn)確性。大鼠捉拿時(shí)別捉得過緊，避免其窒息死亡。雞蛋清現(xiàn)配現(xiàn)用。,2、小鼠耳片法,2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)利用化學(xué)藥物刺激制急性炎癥動物模型方法。 觀察糖皮質(zhì)激素的抗炎作用。2.2 實(shí)驗(yàn)原理：化學(xué)刺激物，可致動物急性炎癥，出現(xiàn)局部腫脹，重量改變，比較給予藥物前后動物局部腫脹程度的變化從而觀察到藥物的抗炎作用。,和,實(shí)驗(yàn)動物：小鼠（雄性） 實(shí)驗(yàn)藥物：0.1%地塞米松、二甲苯、 生理鹽水 主要儀器： 分析天平、打孔器、手術(shù)剪等,小鼠4只，稱重、標(biāo)記,四只分二組,30min后用二甲苯0.05ml均勻涂抹每只鼠的右耳,涂抹45min后小鼠脫臼處死，分別用打孔器取相同部位左右耳片，電子天平稱重。計(jì)算： 右耳-左耳=腫脹度； 腫脹率=（右耳-左耳）/左耳100%,給藥組：腹腔注射0.1地塞米松 0.1ml/10g 體重對照組：腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g 體重,計(jì)時(shí),抗炎實(shí)驗(yàn)中動物性別的選擇：雄性小鼠耳廓滴加二甲苯時(shí)，正反面均勻涂抹。避免滴入耳廓內(nèi)。小鼠左右耳打耳片位置統(tǒng)一（耳廓中間部位）。使用打孔器注意：1、安全；2、別打硬物。注意時(shí)間合理分配。,4,本實(shí)驗(yàn)中選擇雄性動物的原因？,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)四、藥物對家兔離體腸平滑肌的作用,藥物對家兔離體腸平滑肌的作用,浴槽實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備(預(yù)熱）：,1、領(lǐng)取器材,2、浴槽內(nèi)加水,3、測定筒內(nèi)加液,4、接通電源,5、按壓溫度調(diào)節(jié)旋鈕,6、調(diào)溫為37,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)離體平滑肌器官的實(shí)驗(yàn)方法。 觀察擬膽堿藥和抗膽堿藥對離體家兔腸平滑肌的作用。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：乙酰膽堿通過激動M受體興奮胃腸平滑肌；阿托平可阻斷M受體；氯化鋇直接興奮胃腸平滑肌。,1,和,實(shí)驗(yàn)動物：家兔 實(shí)驗(yàn)藥物：乙酰膽堿溶液（1/10萬）、0.1% 硫酸阿托品溶液、1% 氯化鋇溶液 實(shí)驗(yàn)試劑：臺氏液 主要儀器：離體平滑肌槽（浴槽）,在浴槽（大試管）中，加入臺氏液70ml （標(biāo)線處），加熱，維持水370.5 。,3,3,斜角在上,取家兔一只，頸椎脫臼處死。,立即打開腹腔，找到幽門部，分離十二指腸，以2cm左右穿線，分段結(jié)扎，剪取腸段（一只兔取三段）。,每組取一腸段，在上下結(jié)扎線內(nèi)側(cè)邊緣各剪一小口。腸段貫通。,3,將腸段，一端連結(jié)通氣鉤，置測定管（麥?zhǔn)显〔郏┲小Ａ硪欢诉B結(jié)張力換能器彈簧片上。上下調(diào)節(jié)雙凹夾，控制張力的大小。,3,打開氣量調(diào)節(jié)旋鈕，讓氣泡緩慢通入，1-2個氣泡/秒即可。,打開電腦，點(diǎn)擊桌面中BL-420圖標(biāo)，進(jìn)入主菜單，點(diǎn)擊工具欄上的“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目”，消化道實(shí)驗(yàn)，消化道平滑肌生理特性（2）,雙擊,正常曲線,乙酰膽堿,阿托品,乙酰膽堿,1. 腸管穩(wěn)定10分鐘，記錄一段正常活動曲線 。,2. 加入1:10萬乙酰膽堿溶液0.2ml，記錄其收縮幅度，待收縮明顯后。,3. 立即加入0.05% 硫酸阿托品0.2ml。觀察結(jié)果。,4. 平滑肌收縮曲線穩(wěn)定后，再次加入1:10萬乙酰膽堿溶液0.2ml ，結(jié)果與（1）相比較，觀察結(jié)果有何不同。,3,5.加入1% 氯化鋇溶液0.2ml，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。,3,6.待作用明顯后，加入0.05% 硫酸阿托品溶液0.2ml，再次觀察結(jié)果。,反演窗口及剪輯,1拖,2點(diǎn)擊,剪輯板（同時(shí)復(fù)制）,沖洗和分離腸管時(shí)動作應(yīng)輕柔，盡量避免牽拉腸管。 如需換液，臺氏液液面高度及溫度應(yīng)與以前保持一致。加藥時(shí)不要把藥液直接加到標(biāo)本上，以免影響結(jié)果。 浴溫和腸肌的張力均可影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)注意調(diào)節(jié)。,4,實(shí)驗(yàn)中能影響離體腸肌收縮活性的必要條件有哪些？,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn) 三、嗎啡鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?掌握鎮(zhèn)痛藥的實(shí)驗(yàn)方法 （熱板法、扭體法） 觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)原理：熱刺激或者化學(xué)刺激物使小鼠 產(chǎn)生不同的疼痛反應(yīng)，觀察給 藥前后小鼠疼痛反應(yīng)的變化。 （痛閾值、扭體次數(shù)）,1,實(shí)驗(yàn)動物：小鼠（熱板法中小鼠為雌性） 實(shí)驗(yàn)藥物： 0.1%嗎啡 實(shí)驗(yàn)試劑：0.1酒石酸銻鉀（或0.7%冰醋酸）、生理鹽水 主要儀器：熱板測痛儀（RB-200智能熱板儀）,2,打開實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)定溫度（55）,動物初篩（選出四只），稱重，合格動物分二組,測定藥前痛閾值。,給藥組：腹腔注射0.1%嗎啡 0.1ml/10g體重對照組：腹腔注射生理鹽水 0.1ml/10g體重,給藥后15min、30min、45min再次測定各組小鼠痛閾值1次。,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄、整理、分析,二組,痛閾值即小鼠出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的時(shí)間。（以小鼠添后足作為出現(xiàn)疼痛觀察指標(biāo)。）篩選指標(biāo)以痛閾值大于5秒，小于30秒，做為篩選合格動物。藥前痛閾值測定2次痛閾值， 2次間隔時(shí)間5min，取平均值，為給藥前正常痛閾值。,返回,嗎啡熱板法鎮(zhèn)痛結(jié)果,用藥后平均痛閾值-用藥前平均痛閾值 用藥前平均痛閾值 組別 劑量（mg/kg） 動物數(shù) 藥前痛閾值（s） 藥后痛閾值(s) 藥后痛閾值提高百分率(%) 15min 30min 45min 15min 30min 45min 生理鹽水組 0.1ml/10g 2 0.1%嗎啡組 0.1ml/10g 2,痛閾值提高百分率=,100%,b,四只小鼠隨機(jī)分二組,給藥組：腹腔注射0.1%嗎啡 0.1ml/10g體重對照組：腹腔注射生理鹽水 0.1ml/10g體重,各組小鼠均腹腔注射0.7%冰醋酸（0.1%酒石酸銻鉀）0.2ml/只,記錄各組小鼠潛伏期、15min內(nèi)的扭體次數(shù),小鼠扭體反應(yīng),（給藥出現(xiàn)扭體時(shí)間）,30min后,嗎啡對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（扭體法）,注：疼痛潛伏期超過15mim，以15mim（900s）計(jì)。,熱板儀溫度設(shè)定：550.5 室溫 :以15 20C為宜 熱板法中動物性別的選擇：雌性痛閾值判定指標(biāo)：添后足初篩：（5s 痛閾值時(shí)間 30s）。 超過60s動物未添足，將動物取出，痛閾值以60s計(jì)算實(shí)驗(yàn)中保持小鼠足底及熱板內(nèi)干凈、干燥。熱板儀測量中注意：及時(shí)蓋鼠盒蓋，避免溫度散失。扭體法實(shí)驗(yàn)中觀察：潛伏期：以注射刺激物到出現(xiàn)疼痛反應(yīng)（開始腹部凹陷或扭體）計(jì)時(shí)。扭體次數(shù)：只數(shù)扭體反應(yīng)的次數(shù)。酒石酸銻鉀、冰醋酸現(xiàn)用現(xiàn)配,4,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn) 八、藥物對家兔動脈血壓的影響,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)麻醉動物急性血壓實(shí)驗(yàn)的方法 。 觀察傳出神經(jīng)藥物對動物血壓的影響 。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：鹽酸腎上腺素溶液 、酚妥拉明溶液等藥物能與心肌或者血管平滑肌上的相應(yīng)受體結(jié)合，從而影響家兔的血壓。,1,和,實(shí)驗(yàn)動物：家兔 實(shí)驗(yàn)藥物： 肝素生理鹽水液(500ml 生理鹽水加肝素12ml)、1.5%戊巴比妥鈉溶液、 0.01%腎上腺素溶液、 0.1%酚妥拉明溶液。,和,主要儀器： 壓力換能器1臺、BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)1套、手術(shù)刀1把、手術(shù)剪1把、止血鉗2把、眼科剪1把、三通2個、氣管插管1個、動脈插管（留置針）1根、動脈夾1個、輸液針1根、20ml注射器1個、5ml注射器1個、1ml注射器3個、燒杯1個、紗布1塊、絲線等。,家兔稱重，找到耳緣靜脈，用輸液針，耳緣靜脈注射1.5%戊巴比妥鈉2ml/kg，麻醉。（固定輸液針，建立靜脈輸液通道）注入適量肝素生理鹽水液（沖洗管道并防凝血）。,將動物背位固定于手術(shù)臺上，剪去頸部的毛，頸正中切口，分離氣管，（作一倒“T”形切口，插入氣管插管，結(jié)扎固定。據(jù)情況可免）。,3,分離氣管 氣管插管,留置針管與壓力換能器相連（充滿肝素生理鹽水）并連接在生物信號采集系統(tǒng)一通道上；在氣管一側(cè)的頸動脈鞘內(nèi)分離頸總動脈（注意有迷走神經(jīng)伴行，應(yīng)將其與頸總動脈分離）。頸總動脈近心、遠(yuǎn)心端各穿一根線，遠(yuǎn)心端結(jié)扎；然后用動脈夾夾住近心端，在靠近遠(yuǎn)心結(jié)扎處，向心方向，剪一V字型口，插入充滿肝素生理鹽水液動脈插管，結(jié)扎近心端，固定于動脈插管小叉上。慢慢松開頸總動脈夾，描記正常血壓曲線。,3,在氣管一側(cè)的頸動脈鞘內(nèi)分離頸總動脈，進(jìn)行頸總動脈插管,分離得到頸總動脈,頸總動脈插管,連接壓力換能器后，打開電腦，點(diǎn)擊桌面上的BL-420圖標(biāo)，進(jìn)入血壓實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。,3,描記正常血壓曲線靜脈注射0.01%腎上腺素0.15ml/kg，描記血壓曲線?；謴?fù)正常后，靜脈注射0.1%酚妥拉明（0.15ml/kg) ，描記血壓曲線。恢復(fù)正常后，再次靜脈注射0.01%腎上腺素0.15ml/kg，描記血壓曲線。注：每次注射藥物后都需推注適量肝素生理鹽水液沖洗。,作用于、受體的藥物,3,建立靜脈通道時(shí)，輸液針一定要固定好，防止動物掙扎時(shí)滑脫，每次給藥后都藥用適量肝素生理鹽水液沖洗。 隨時(shí)注意插管位置，特別在掙扎時(shí)，避免扭轉(zhuǎn)而阻塞血流或刺破血管。兩次給藥之間須等待血壓恢復(fù)正常。,4,3、先加入酚妥拉明再加入腎上腺素，血壓的變化情況與第一次加入腎上腺素有何變化？為什么？,五、傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物對小鼠胃腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)的影響,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆招∈笪改c推進(jìn)實(shí)驗(yàn)基本方法。 比較擬膽堿藥、抗膽堿藥的作用。實(shí)驗(yàn)原理：胃腸興奮，蠕動增強(qiáng)，小腸中的碳墨運(yùn)行長；反之運(yùn)行短。,1,實(shí)驗(yàn)動物：小鼠（各半）實(shí)驗(yàn)藥品、器材：0.05%阿托品、0.001%新斯的明、10%活性炭混懸液、生理鹽水。 1ml注射器3支、灌胃針1支、直尺1把、手術(shù)剪1把、培養(yǎng)皿1個、苦味酸及棉簽。,2,取6只小鼠（各半），稱重、標(biāo)記、分三組 甲組：ip 0.05阿托品 0.2ml/只 乙組：ip 0.001%新斯的明 0.2ml/只 丙組：ip 生理鹽水 0.2ml/只 灌胃 10%活性炭懸液0.2ml/只 處死動物，打開腹腔，取出小腸測量小腸全長和碳末運(yùn)行距離,10min后,15min后,幽門,碳末運(yùn)行率 =,幽門至遠(yuǎn)端碳末處距離,小腸全長,100%,【結(jié)果】,1、碳末灌胃量、小鼠處死時(shí)間必須準(zhǔn)確。2、取出小腸后，先用水浸濕，平鋪在桌上可免與臺面粘連。3、剪取腸道時(shí)必須避免強(qiáng)行牽拉，否則將影響長度的準(zhǔn)確性。,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),六、利多卡因抗氯化鋇 誘發(fā)家兔心律失常,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?家兔心電圖導(dǎo)聯(lián)的實(shí)驗(yàn)方法. 觀察利多卡因的抗心律失常作用。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：氯化鋇具有加速鈉離子內(nèi)流的作用， 自律性，引起心律失常。利多卡因抑制鈉離子內(nèi)流自律性，抗心律失常。,1,和,實(shí)驗(yàn)動物：家兔，體重2 3kg 實(shí)驗(yàn)藥物： 20%烏拉坦、0.2%利多卡因、0.5 %氯化鋇、150U/ml肝素生理鹽水。主要儀器：電腦、BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、三心線、三通1個、輸液針1根、5ml注射器2支、20ml 10ml注射器各1支、膠布。,1、 取家兔1只，稱重。用輸液針經(jīng)耳緣靜脈注射20%烏拉坦6 ml/kg，并推注適量肝素生理鹽水液，麻醉 。固定在兔板上。,3,2、用三線心電連線，分別在右前肢（白色），左后肢（紅色），右后肢（黑色）皮下插入針形電極（肢體導(dǎo)聯(lián)）。3、在1通道插口連接計(jì)算機(jī)，并開機(jī)。選擇輸入信號通道1動物心電（G =1000 T =0.1S F =300HZ）。4、描記正常心電圖。作藥物（利多卡因）的準(zhǔn)備。,4,5、由靜脈注射0.5氯化鋇0.5ml/kg。立即描記心電圖，心律失常出現(xiàn)后，立即靜脈注射0.2利多卡因1ml/kg，描記心電圖的變化。 記錄、分析結(jié)果。,5,附：常見心電圖表現(xiàn),1、正常竇性心律,2、陣發(fā)性室性心動過速,3、扭轉(zhuǎn)性室性心動過速,4、房室完全傳導(dǎo)阻滯,5、心室撲動與心室顫動,1】每次給藥后，用適量肝素生理鹽水液沖洗,并防凝血堵塞針頭。2】針形電極不能插入肌肉，否則肌電干擾。,6,九、藥物對動物自發(fā)活動的影響,目的： 1、觀察安定對小白鼠自發(fā)活動的影響。 2、掌握小白鼠自發(fā)活動的實(shí)驗(yàn)方法。,材料,1、同性別小白鼠 4 只2、1ml注射器2支3、ZZ-6小白鼠自發(fā)活動測試儀1臺4、藥品：0.05%安定、生理鹽水、苦味酸溶液,ZZ-6小白鼠自發(fā)活動測試儀,測試儀使用,方法,1、取同性別，活動度相近小鼠4只。稱重、編號，分成甲乙2組。2、分別放入自發(fā)活動測試儀反應(yīng)箱的4個格內(nèi)，使其適應(yīng)5min。按“定時(shí)”按鈕，設(shè)為5min。按“啟動”按鈕，測試給藥前正常小鼠5min內(nèi)活動值。3、取出小鼠，甲組:ip 0.05%安定0.2ml/10g。 乙組:ip 等量生理鹽水。4、再放回自發(fā)活動測試儀反應(yīng)箱格內(nèi)，同樣方法每隔5min一次（測試5min內(nèi)活動次數(shù)）。連續(xù)觀察5次。,5、記錄結(jié)果。,注意事項(xiàng),1、測試過程中保持安靜，別震動臺面。2、各組測試中記住每次的數(shù)據(jù)。3、統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)時(shí)，可以算出減少或增加的百分率。4、實(shí)驗(yàn)完成后，打掃衛(wèi)生的同學(xué)，將測試儀的反應(yīng)箱取出、洗凈、擦干，放回機(jī)內(nèi)。5、實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求安靜。有條件可在隔音室內(nèi)進(jìn)行。6、動物活動與飲食條件、晝夜及生活環(huán)境等有密切關(guān)系、觀察自發(fā)活動最好各方面條件相近。7、動物宜事先禁食12小時(shí)，以增加覓食活動。,十、動物鹽酸腎上腺素半數(shù)致死量（LD50）測定,寇氏改良法,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?通過實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)測定藥物L(fēng)D50的方法、步驟和計(jì)算方法。,【實(shí)驗(yàn)原理】,藥物的致死量的對數(shù)值在50%致死量的上下形成正態(tài)分布，因此通過藥物的對數(shù)劑量-動物的死亡率可求出LD50。從而反應(yīng)藥物的安全性。,【實(shí)驗(yàn)材料】,動物：小鼠藥品：0.1%鹽酸腎上腺素器材：注射器、天平、量筒、刻度吸管。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,1、預(yù)試驗(yàn)：以一個實(shí)驗(yàn)小組為單位完成。（約10只小鼠）（1）劑量范圍（找出0%和100%死亡率的劑量范圍）： 全死量Dmax （30內(nèi)），每次取2只小鼠，用0.1%腎上腺素腹腔注射（全死參考劑量0.14ml/10g）,如全死，劑量減小1.2倍直到不全死，則上一劑量為Dmax 。如非全死，劑量增加1.2倍直到全死，此劑量為Dmax。 全活量Dmin （30內(nèi)），每次取2只小鼠，用0.1%腎上腺素腹腔注射（全活參考劑量0.05ml/10g）,如全活，劑量增加1.2倍直到非全活，則上一劑量為Dmin。如非全活，劑量減小1.2倍，直到全活，此劑量為Dmin 。（取本實(shí)驗(yàn)室6個組的全死量、全活量的平均值為最后值）,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,確定公比：-公比；Dmax -最大劑量；Dmin-最小劑量；n-動物組數(shù)（6）。 =(Dmax/Dmin) 1/n-1 配制等比稀釋液：C母液=Dmax/藥的容積數(shù)（ml） 按公比逐級稀釋成n組（6）。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,2、正式試驗(yàn)：（以實(shí)驗(yàn)室為單位，每小組完成一個劑量組。） 每組取小鼠10只（各半），腹腔注射腎上腺素各稀釋液，藥的容積數(shù)（ml）/10g，記錄30分鐘內(nèi)小鼠死亡數(shù)。完成后，各實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)計(jì)全實(shí)驗(yàn)室各組的數(shù)據(jù)繪表、按公式計(jì)算。,LD50的計(jì)算,LD50= （ P：用小數(shù)表示的死亡率；Xm:最大劑量對數(shù)值； ：相鄰兩組劑量對數(shù)值之差； P:各組動物死亡率之和 ） LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤Sx50=（n:為每組動物數(shù)） LD50的95%可信限 =LD504.5LD50Sx50,修正計(jì)算,當(dāng)最小劑量組的死亡率大于0而又小于30，或最大劑量組的死亡率小于100而又大于70時(shí)，可按下列校正公式計(jì)算： （式中Pm最大劑量組的死亡率； Pn最小劑量組的死亡率。） LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤Sx50= （n:為每組動物數(shù)） LD50的95%可信限 =LD504.5LD50Sx50,(perfusion of frogs heart),十一、強(qiáng)心苷對離體蛙心活動的影響,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?. 學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。2.觀察強(qiáng)心苷對離體蛙心的作用。,【實(shí)驗(yàn)原理】青蛙的心臟離體后，把含有任氏液的蛙心套管插入心室，用這種人工灌流的方法保持心臟新陳代謝的順利進(jìn)行，以維持蛙心有節(jié)律地收縮和舒張。通過生物信號處理系統(tǒng)，記錄心臟搏動情況。本實(shí)驗(yàn)采用離體蛙心，觀察強(qiáng)心苷的強(qiáng)心作用。,【實(shí)驗(yàn)材料】 420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、張力換能器、蛙類手術(shù)器械、蛙心插管、試管夾、縫合線、蛙心夾、鐵支架、滴管【實(shí)驗(yàn)藥品】 任氏液、低鈣任氏液（所含CaCl2量為一般任氏液的1/4，其它成分不變 ） 、0.02%去乙酰毛花苷(西地蘭)、1% CaCl2。,【實(shí)驗(yàn)方法】,一、離體蛙心臟標(biāo)本制備 1.破壞腦和脊髓，仰位固定于蛙板上。 2.剪開胸廓、心包膜，暴露心臟 3.蛙心插管,1.觀察心臟的解剖結(jié)構(gòu),（腹面）,（背面）,3.1 分離主A干,在其下穿二條線，一條準(zhǔn)備結(jié)扎A和蛙心插管。另一條準(zhǔn)備結(jié)扎后腔靜脈。3.2用蛙心夾夾住心尖，向上翻起，結(jié)扎后腔靜脈，盡量向下結(jié)扎，避免扎著靜脈竇。否則心臟停搏。扎完，恢復(fù)心臟原位。,蛙心插管,3.3 在主動脈根部剪一“V”斜口，將插管插入動脈圓錐， 在心室收縮時(shí)將插管插入心室，結(jié)扎固定(成功，管內(nèi)液面會上下波動)。分離周圍組織，在結(jié)扎處遠(yuǎn)端剪斷血管及組織，使心臟離體。并用任氏液連續(xù)換洗，至無血色。,蛙心插管,1.用試管夾將蛙心管固定在鐵支架上。2.把張力換能器固定鐵支架支臺上，蛙心夾上的線如圖繞過滑輪連于換能器彈簧片上，上下移動換能器或蛙心插管，調(diào)整線的松緊程度。換能器的信號線連于420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)1通道上，開機(jī)，描記曲線。,二、連接儀器和裝置,三、儀器的使用,1、打開420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)后面的電源開關(guān)，指示燈亮。2、打開電腦，在桌面雙擊420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)圖標(biāo)，在工具欄中點(diǎn)擊“輸入信號”，選擇1通道，在子菜單中選擇“張力”，再點(diǎn)擊記錄。,四、描記及給藥,1、穩(wěn)定510分鐘，描記正常蛙心收縮曲線。2、用低鈣任氏液換洗插管內(nèi)任氏液兩次，描記曲線的變化。3、當(dāng)蛙心收縮明顯減弱時(shí)，向插管內(nèi)加入0.02%去乙酰毛花苷0.04ml ,描記曲線的變化。4、當(dāng)作用明顯時(shí)，再向套管內(nèi)加入1%氯化鈣溶液23滴，描記曲線的變化。,【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】,注意：1、測定時(shí)，插管內(nèi)液面保持相同高度，以保證心臟的固定負(fù)荷。 2、隨時(shí)滴加任氏液于心臟表面使之保持濕潤。 3、蛙心套管一定要插入心室。切勿用力過大，插入過深，損傷心肌。 4、結(jié)扎靜脈時(shí)，要遠(yuǎn)離靜脈竇（起博點(diǎn)）。,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),七、藥物的利尿作用,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)利尿的實(shí)驗(yàn)方法. 觀察利尿藥對尿量的影響。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：呋塞米屬高效利尿藥，通過抑制髓袢升枝粗段對氯化鈉的重吸收而達(dá)到利尿作用 。(與尿液生成生理過程相聯(lián)系。),1,和,實(shí)驗(yàn)動物：家兔，體重2 3kg 實(shí)驗(yàn)藥物： 1.5%戊巴比妥鈉、1%呋噻米、 實(shí)驗(yàn)試劑：生理鹽水 主要儀器：燒杯、膀胱漏斗、10 ml量筒。,1、 取家兔1只，稱重，清水灌胃30ml/kg,3,2、30min后，用1.5%戊巴比妥鈉2ml/kg經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉,3、家兔背位固定于兔臺上。恥骨聯(lián)合前正中切開腹部皮膚46 cm，暴露膀胱。,4、分離輸尿管，結(jié)扎尿道內(nèi)口。在膀胱游離部作荷包縫合，然后剪開小口插入膀胱漏斗并固定。,5、膀胱內(nèi)注入生理鹽水（或清水），使其充盈。記錄10分鐘正常尿量。,6.耳緣靜脈注入藥物： 呋噻米0.5ml/kg，觀察并記錄各藥給藥后10 min尿液滴數(shù)及尿量。,家兔麻醉過程中，控制麻醉藥推注速度，密切觀察實(shí)驗(yàn)過程中家兔情況。手術(shù)過程中，動作輕柔，以免損傷膀胱。準(zhǔn)確找到輸尿管，注意輸尿管的生理比鄰位置。,4,考試軟件的使用說明,分二種題型1、單選題2、判斷題,雙擊,輸入01-30,單擊,選擇,點(diǎn)擊,點(diǎn)擊,1,2,3,4,點(diǎn)擊,判斷題,單選題,答題完成,點(diǎn)擊,1,2,3,4,氯丙嗪加強(qiáng)麻醉藥的麻醉作用,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹坑^察氯丙嗪加強(qiáng)麻醉藥的麻醉作用，并聯(lián)系其臨床意義。【實(shí)驗(yàn)材料】5ml注射器2支、兔固定盒、苦味酸、棉簽。1%戊巴比妥鈉溶液、0.25%鹽酸氯丙嗪溶液；家兔2只；,【實(shí)驗(yàn)方法】1、取家兔2只，稱重、標(biāo)記分成甲乙兩只。2、觀察正?；顒忧闆r（角膜反射、肌肉緊張度、呼吸頻率及深度、心率等）。3、甲兔耳緣靜脈注射0.25%氯丙嗪1ml/kg; 乙兔耳緣靜脈注射生理鹽水1ml/kg。觀察注射氯丙嗪后家兔的情況。4、10分鐘后，甲乙兩兔分別耳緣靜脈注射1%戊巴比妥鈉1.5ml/kg。觀察兩兔的麻醉情況有何差異。,【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】,擬膽堿藥與抗膽堿藥對兔眼瞳孔的作用,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹坑^察擬膽堿藥、抗膽堿藥對瞳孔的作用并分析其作用機(jī)制?！驹怼?M受體激動藥通過激動瞳孔括約肌上分布的M受體，使括約肌向中心方向收縮，開大肌(瞳孔輻射肌)張力不變，故瞳孔縮?。?M受體阻斷藥通過阻斷瞳孔括約肌上分布的M受體，使括約肌松弛，開大肌(瞳孔輻射肌)張力不變，故瞳孔散大。,【實(shí)驗(yàn)材料】 器材：兔固定箱、1ml注射器、測瞳尺、剪刀。 藥品：1%硫酸阿托品溶液、0.2%硝酸毛果蕓香堿溶液。動物：家兔,【實(shí)驗(yàn)方法】 1取家兔1只，放入兔固定箱內(nèi)，剪去眼睫毛，在自然光線下測量并記錄兩眼正常瞳孔直徑，然后按下列順序給藥(每眼4滴)：左眼滴1%硫酸阿托品溶液；右眼滴0.2%硝酸毛果蕓香堿溶液。2滴藥10min后，在同樣強(qiáng)度的光線下，再分別測量并記錄家兔左右眼瞳孔大小。如滴0.2%硝酸毛果蕓香堿溶液的瞳孔已明顯縮小，則再滴硫酸阿托品，10min后再觀測瞳孔變化。,【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】將結(jié)果記錄于下表中。,【注意事項(xiàng)】 1測量瞳孔勿刺激角膜，光照強(qiáng)度及角度須前后一致，否則將影響測瞳結(jié)果。2各眼滴藥量要準(zhǔn)確，在眼內(nèi)停留時(shí)間要一致，以確保藥液充分作用。3實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)為一周內(nèi)未用過眼藥者。,【思考題】通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析阿托品與毛果蕓香堿對眼瞳孔的作用有何不同？,氯丙嗪對阿撲嗎啡引起激怒反應(yīng)的影響,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、激怒實(shí)驗(yàn)中激怒模型的建立。2、氯丙嗪的抗精神病作用【實(shí)驗(yàn)材料】鐘罩或鼠盒、1ml注射器、氯丙嗪、阿撲嗎啡。,【實(shí)驗(yàn)方法】1、取分籠大鼠4只，稱重、標(biāo)記、分成甲乙兩組。2、甲組兩只腹腔注射1%氯丙嗪1.5ml/100g(15mg/kg);3、 乙組兩只腹腔注射等劑量生理鹽水。4、 30后分別給每只大鼠皮下注射0.01%阿撲嗎啡0.1ml/100g（0.1mg/Kg）。同組同籠，5、15后刺激兩組，造成斗毆。比較兩組斗毆情況。,【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn) 藥物對大鼠動脈血壓的影響,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)麻醉大鼠急性動脈血壓實(shí)驗(yàn)的方法觀察腎上腺素對大鼠血壓的翻轉(zhuǎn)作用并與家兔血壓實(shí)驗(yàn)比較，有何區(qū)別。了解動物種屬差異1.2 實(shí)驗(yàn)原理：腎上腺素、受體激動劑，酚妥拉明受體阻斷劑，酚妥拉明能阻斷腎上腺素的作用。,1,和,實(shí)驗(yàn)動物：大鼠（體重300g左右） 實(shí)驗(yàn)藥物： 肝素生理鹽水液、1.5%戊巴比妥鈉溶液、0.001%腎上腺素溶液、 0.1%酚妥拉明溶液。,和,主要儀器： 壓力換能器、BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、心電導(dǎo)線、手術(shù)刀、手術(shù)剪、止血鉗、動脈插管(留置針）、動脈夾、頭皮靜脈注射針頭等。,充滿肝素生理鹽水液,大鼠稱重，腹腔注射1.5%戊巴比妥鈉0.2ml/100g，麻醉后，將動物背位固定于手術(shù)臺上。,在后肢內(nèi)側(cè)手術(shù)，分離股靜脈，做靜脈插管，注入肝素生理鹽水液，建立通道。,剪去頸部的毛，頸正中切口，分離氣管，尋找頸總動脈，做頸總動脈插管。,3,建立心電肢體導(dǎo)聯(lián)：右前-白、左后-紅、右后-黑。,分離氣管,在氣管一側(cè)的頸動脈鞘內(nèi)分離頸總動脈（注意有迷走神經(jīng)伴行，應(yīng)將其與頸總動脈分離）。頸總動脈近、遠(yuǎn)心端各穿一根線，遠(yuǎn)心端結(jié)扎；然后用動脈夾夾住近心端，在靠近遠(yuǎn)端結(jié)扎處，向心方向插入裝有肝素生理鹽水溶液的動脈插管（留置針），結(jié)扎近心端線，同時(shí)抽出內(nèi)心。慢慢松開頸總動脈夾，留置針繼續(xù)深插，線結(jié)扎并固定于留置針分叉處。壓力傳感器連接在420E（或F）生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)1通道上；，試測正常血壓曲線。（后暫停）2通道接入心電三心線。,在氣管一側(cè)的頸動脈鞘內(nèi)分離頸總動脈，進(jìn)行頸總動脈插管,分離得到頸總動脈,頸總動脈插管,測定血壓及心電圖,1、選擇輸入信號通道1(CH1)血壓 通道2(CH2)心電圖2、描記正常血壓及心電圖。注意打上標(biāo)記。,10-5腎上腺素0.1ml/100g，適量肝素生理鹽水液沖洗，描記曲線。 0.1%酚妥拉明0.1ml/100g，適量肝素生理鹽水液沖洗，描記曲線。 10-5腎上腺素0.1ml/100g，適量肝素生理鹽水液沖洗，描記曲線。,作用于、受體的藥物,V,V,V,觀察每步的血壓及心電變化情況。,動脈插管過程容易發(fā)生出血，操作應(yīng)仔細(xì)、小心。 每次給藥后，都要輸入1ml左右肝素生理鹽水，將藥物完全沖入血管內(nèi)。隨時(shí)注意動、靜脈插管位置，特別在掙扎時(shí)，避免扭轉(zhuǎn)而阻塞血流或刺破血管。兩次給藥之間須等待血壓恢復(fù)正常。,藥物對豚鼠氣管的作用,豚鼠氣管鏈法,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?掌握平喘藥物的測定方法之一（氣管鏈法）【實(shí)驗(yàn)原理】 不同的藥物通過直接或間接激動不同的受體使離體氣管條產(chǎn)生收縮或松弛作用。本實(shí)驗(yàn)觀察組胺、腎上腺素、等藥物對豚鼠離體氣管條的作用?！緦?shí)驗(yàn)材料】 豚鼠；平滑肌槽，生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，張力