白喉棒狀桿菌及檢驗(yàn)ppt課件.ppt

第二十三章 需氧革蘭陽性桿菌及檢驗(yàn)檢驗(yàn)系劉濤 1 棒狀桿菌屬 第一節(jié) 2 G 菌 菌體一端或兩端彭大呈棒狀而得名 菌體染色不均勻 出現(xiàn)節(jié)段濃染或異染顆粒 排列不規(guī)則 呈柵欄狀 或L形 或V形 無莢膜 無鞭毛 不產(chǎn)生芽胞 多為條件致病菌 只有白喉棒狀桿菌是致病菌 3 白喉棒狀桿菌 4 CASE 患兒 男 6歲 咽痛 聲嘶 咳嗽 發(fā)熱3天 體溫37 心率96 分 白細(xì)胞升高 亞碲酸鉀培養(yǎng) 病史 百白破疫苗出生后三個(gè)月打了第一針 加強(qiáng)免疫因經(jīng)濟(jì)困難而未接種 家屬說舍不得花錢 一針要40多元 孩子的父親右手殘疾 問題 什么病 患者和密切接觸者需如何處理 5 白喉 Diphtheria 是一種急性呼吸道傳染病 特征 患者咽喉部出現(xiàn)灰白色的假膜 假膜 6 一 生物學(xué)性狀 7 1 白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征 細(xì)長(zhǎng)桿菌 粗細(xì)不一 一端或兩端膨大呈棒狀 排列不規(guī)則 呈柵欄狀 V字形或L形 奈瑟染色 革蘭染色 8 1 白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征 異染顆粒成分 核糖核酸 多磷酸鹽作用 儲(chǔ)存養(yǎng)料 鑒定價(jià)值 Albert染色 9 2 培養(yǎng)特性 呂氏血清斜面培養(yǎng)物含凝固的血清 生長(zhǎng)迅速 異染顆粒明顯 亞碲酸鉀血平板黑色菌落 還原 在亞碲酸鉀血瓊脂平板上的白喉棒狀桿菌菌落 18 24h 亞碲酸鹽 碲 黑色 10 根據(jù)對(duì)亞碲酸鉀的還原能力 菌落形態(tài)及生化反應(yīng)可將白喉棒狀桿菌分為3種類型 重型 gravis 輕型 mitis 和中間型 intermedius 重型 輕型 菌落不溶血 不規(guī)則 有條紋 菌落 溶血 光澤 凸起 11 3 變異 白喉棒狀桿菌形態(tài) 菌落和毒性均可發(fā)生變異 無毒株溶原性細(xì)菌 產(chǎn)生外毒素 噬菌體 12 4 抵抗力 抗寒冷和干燥 對(duì)濕熱抵抗力弱 對(duì)青霉素 氯霉素 紅霉素敏感對(duì)磺胺不敏感 13 二 致病性與免疫性 14 1 致病物質(zhì) 白喉毒素 diphtherotoxin 索狀因子 cordfactor K抗原 Kantigen 15 2 致病機(jī)制 1 白喉外毒素 只有攜帶 棒狀桿菌噬菌體的溶原性白喉?xiàng)U菌才能產(chǎn)生外毒素 外毒素結(jié)構(gòu) B亞單位 有結(jié)合和轉(zhuǎn)位功能A亞單位 其上有1個(gè)催化區(qū) 作用靶位 心肌和神經(jīng)細(xì)胞 16 2 致病機(jī)制 2 索狀因子破壞哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的線粒體 影響細(xì)胞呼吸與磷酸化 3 K抗原 抗吞噬 17 3 所致疾病 傳染源 患者 恢復(fù)期帶菌者 健康帶菌者 傳播途徑 飛沫或污染 多在秋冬季 臨床表現(xiàn) 白喉 急性呼吸道傳染病 18 臨床表現(xiàn) 1 細(xì)菌與毒素共同作用引起局部癥狀 炎癥 壞死 纖維蛋白滲出 假膜導(dǎo)致窒息2 毒素入血引起全身中毒癥狀 外周神經(jīng)炎 膈肌麻痹 呼吸困難 聲帶麻痹 聲音嘶啞 軟頜麻痹 吞咽困難心肌炎 3 所致疾病 19 20 1 人群易感性 普遍易感 1 5歲兒童 成人也有可能 4 免疫性 21 2 免疫特點(diǎn) 抗毒素免疫 感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力 機(jī)體還可通過其它方式獲得免疫力 六月以下嬰兒 母親成人 隱性感染 疫苗 22 三 微生物學(xué)檢查法 23 標(biāo)本 假膜邊緣取材 涂片鏡檢 革蘭染色菌體顏色奈瑟染色典型菌體排列Albert染色異染顆粒 標(biāo)本片 鏡下特點(diǎn) 24 分離培養(yǎng) 標(biāo)本 接種 呂氏血清斜面 37 6 12h 直接涂片鏡檢 接種 亞碲酸鉀瓊脂平板 培養(yǎng) 黑色菌落 12 18h 灰白色小菌落 快速診斷 25 Elek平板試驗(yàn)白喉?xiàng)U菌的有毒菌株可產(chǎn)生白喉外毒素 白喉抗毒素可與其特異性結(jié)合 中和白喉外毒素的毒性 可用細(xì)菌培養(yǎng)法和動(dòng)物試驗(yàn)予以證實(shí) 原理 Elek平板毒力試驗(yàn)是一種體外的毒力測(cè)定方法 通過觀察白喉抗毒素與白喉外毒素的雙向瓊脂擴(kuò)散現(xiàn)象 判斷所培養(yǎng)的白喉?xiàng)U菌的產(chǎn)毒性 材料 1 產(chǎn)毒素的白喉?xiàng)U菌 類白喉?xiàng)U菌及待測(cè)的白喉?xiàng)U菌呂氏血清斜面24h培養(yǎng)物 2 Elek瓊脂蛋白胨培養(yǎng)基 3 白喉抗毒素 1000u m1 馬或兔血清 無菌 無菌濾紙條 6 0 1 5cm 無菌5ml刻度吸管 無菌平皿及鑷子等 26 方法 1 將Elek瓊脂蛋白胨培養(yǎng)基10ml加熱融化 待冷至50 55 時(shí) 加入無菌的馬或兔血清2ml 立刻混勻 并傾注平板 2 趁瓊脂未凝固前 用無菌鑷子將浸有白喉抗毒素 1000u m1 的濾紙條 盡量使濾紙條上的抗毒素流盡 貼于平板中央 待瓊脂凝固后將平板置37 溫箱內(nèi)1 2h 平板面朝下 使培養(yǎng)基略干燥 27 3 接種細(xì)菌 以接種環(huán)取產(chǎn)毒素白喉?xiàng)U菌 類白喉?xiàng)U菌和待檢的白喉?xiàng)U菌分別以與濾紙條成垂直的方向劃線接種 接種線須密且集中 接種的菌量宜多 若用此法測(cè)未知標(biāo)本需設(shè)陽性對(duì)照 產(chǎn)毒株 及陰性對(duì)照 無毒株 一般每個(gè)平板可接種5 6個(gè)標(biāo)本 置37 培養(yǎng)24 48 72h觀察結(jié)果 28 結(jié)果 注意觀察在接種線兩側(cè)距濾紙條約1cm處有無與接種線呈45 角的白色沉淀線出現(xiàn) 有沉淀者 白喉?xiàng)U菌毒力試驗(yàn)陽性 該菌株產(chǎn)生白喉外毒素 無沉淀線者 白喉?xiàng)U菌毒力試驗(yàn)陰性 該菌株不產(chǎn)生白喉外毒素 29 毒力鑒定 動(dòng)物試驗(yàn) Elek平板毒力實(shí)驗(yàn) 白喉?xiàng)U菌菌苔 沉淀線 陽性 含白喉抗毒素