凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn) 教育學(xué)習(xí)

凝集反應(yīng),1,高級(jí)課件,抗原抗體反應(yīng)的類(lèi)型,1沉淀反應(yīng)2凝集反應(yīng)3補(bǔ)體參與的反應(yīng)4.中和反應(yīng)5.免疫標(biāo)記,2,高級(jí)課件,凝集反應(yīng),是指顆粒性抗原(紅細(xì)胞、細(xì)菌等)或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性結(jié)合，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)兩大類(lèi)。,3,高級(jí)課件,凝集反應(yīng)的類(lèi)型一、直接凝集反應(yīng)(directagglutination),是指細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集。反應(yīng)中的抗原稱(chēng)為凝集原，參與反應(yīng)的抗體稱(chēng)為凝集素。,4,高級(jí)課件,將已知的可溶性抗原（或抗體）吸附或耦聯(lián)到與免疫無(wú)關(guān)的載體顆粒表面,形成致敏顆粒,再與相應(yīng)抗體（或抗原）作用,在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼所見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，稱(chēng)之。載體不同可分：紅細(xì)胞間接血凝試驗(yàn)聚苯乙烯乳膠間接乳膠凝集試驗(yàn)活性炭間接炭凝集試驗(yàn)。,二、間接凝集反應(yīng),5,高級(jí)課件,1、正向間接凝集反應(yīng)用于檢測(cè)標(biāo)本中的抗體,抗體,載體微球,可溶性抗原,免疫微球,免疫微球凝集,+,+,本試驗(yàn)簡(jiǎn)便、快速、敏感性和特異性高、成本低。,6,高級(jí)課件,2、反向間接凝集反應(yīng)用于檢測(cè)標(biāo)本中的抗原本法快速、敏感性和特異性高,+,凝集,抗原,載體顆粒,抗體,抗體致敏顆粒,7,高級(jí)課件,A、正向：診斷試劑為已知抗原致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗體，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。,3、間接凝集抑制反應(yīng)又稱(chēng)為膠乳凝集抑制試驗(yàn),8,高級(jí)課件,抗體,待測(cè)抗原,免疫微球,免疫微球不凝集,+,（,（,結(jié)果：免疫微球不凝集為陽(yáng)性,(標(biāo)本),第一種情況：,9,高級(jí)課件,抗體,免疫微球,免疫微球凝集,+,標(biāo)本中無(wú)抗原,結(jié)果：免疫微球凝集為陰性,第二種情況：,10,高級(jí)課件,3間接凝集抑制反應(yīng)B、反向：診斷試劑為已知抗體致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗原，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗體相同的抗體。,11,高級(jí)課件,間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用,間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，而且能用于抗原或抗體的測(cè)定，因此在臨床檢驗(yàn)中廣為應(yīng)用。,12,高級(jí)課件,（一）抗原的檢測(cè),人絨毛膜促性腺激素檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的間接血凝試驗(yàn)。,13,高級(jí)課件,（一）抗體的檢測(cè),梅毒抗體類(lèi)風(fēng)濕因子RF,14,高級(jí)課件,一、正向間接凝集試驗(yàn),梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)RapidPlasmaReagin（RPR）RPR試驗(yàn),15,高級(jí)課件,感染梅毒后，首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間，IgG抗體仍可通過(guò)記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測(cè)出,梅毒的免疫性（一）,16,高級(jí)課件,梅毒的免疫性（二）,另一種具有抗體性質(zhì)的物質(zhì)叫反應(yīng)素（reagin），是梅毒螺旋體破壞人體組織過(guò)程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機(jī)體所產(chǎn)生的抗體。反應(yīng)素一般在感染后57周產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。,17,高級(jí)課件,梅毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷,（一）非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（二）梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（三）梅毒確認(rèn)試驗(yàn),18,高級(jí)課件,非梅毒螺旋體血清試驗(yàn),這類(lèi)試驗(yàn)的抗原分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇的混懸液，用來(lái)檢測(cè)抗心磷脂抗體。由于這些試驗(yàn)具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原，所以敏感性相似?？捎米髋R床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。,19,高級(jí)課件,非特異性類(lèi)脂抗體測(cè)定,1、性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）2、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）3、快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）4、甲苯胺紅試驗(yàn)（TRUST）,20,高級(jí)課件,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：用梅毒螺旋體作為抗原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均高于非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，但不能用作療效觀察的指標(biāo)。1、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA)3、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）,特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn),21,高級(jí)課件,梅毒確認(rèn)試驗(yàn)（三）,1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（westernblottest）,22,高級(jí)課件,一、梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）,實(shí)驗(yàn)原理梅毒患者血清中存在著能與VDRL(類(lèi)脂質(zhì))抗原發(fā)生凝集反應(yīng)的反應(yīng)素，本試劑利用這一原理，將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒表面，當(dāng)待測(cè)血清中存在反應(yīng)素時(shí)，即與其發(fā)生凝集反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的黑色凝塊。,23,高級(jí)課件,一、梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）,用途本方法能快速簡(jiǎn)單地測(cè)定梅毒病人血清中的反應(yīng)素，可用于梅毒診斷和監(jiān)測(cè)梅毒病人療效。,24,高級(jí)課件,試劑與器材,RPR試劑梅毒陽(yáng)性對(duì)照梅毒陰性對(duì)照紙片專(zhuān)用滴管，針頭，橡皮頭,25,高級(jí)課件,操作方法,1.分別吸取30微升梅毒陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照均勻鋪加在紙卡的兩個(gè)圓圈中。2.另吸取30微升待檢血清均勻鋪加在紙卡的另一個(gè)圓圈中。3.用專(zhuān)用針頭，滴管吸取RPR試劑，分別垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動(dòng)卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。,26,高級(jí)課件,結(jié)果判斷,1.陰性反應(yīng)（）：可見(jiàn)均勻的抗原顆粒而無(wú)凝集物。2.弱陽(yáng)性反應(yīng)（+）：可見(jiàn)較小的黑色凝集物。3.陽(yáng)性反應(yīng)（+）：可見(jiàn)中等或較大的黑色凝塊，溶液清亮。,27,高級(jí)課件,實(shí)驗(yàn)討論,1.實(shí)驗(yàn)條件：在23c29c度的環(huán)境下進(jìn)行。2.RPR試劑在使用前應(yīng)充分搖勻。3.血清中加入試劑后充分振蕩使其混勻。4.定性實(shí)驗(yàn)呈弱陽(yáng)性或陽(yáng)性者必須做定量實(shí)驗(yàn)才能了解患者血清中的抗體滴度，具體方法如下：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋?zhuān)ㄔ澹?：2，1：4，1：8，1：16，1：32）然后對(duì)每個(gè)稀釋按定性實(shí)驗(yàn)方法再進(jìn)行測(cè)定并判斷結(jié)果。,28,高級(jí)課件,實(shí)驗(yàn)討論,5.本實(shí)驗(yàn)只為過(guò)篩試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)呈弱陽(yáng)性或陽(yáng)性反應(yīng)者，需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析判斷，同時(shí)再做特異性密螺旋體實(shí)驗(yàn)加以確診。,29,高級(jí)課件,二、間接凝集抑制反應(yīng)又稱(chēng)為膠乳凝集抑制試驗(yàn),妊娠試驗(yàn)HCG測(cè)定,30,高級(jí)課件,HCG：,人絨毛膜促性腺激素，胎盤(pán)合體滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素妊娠4-10周分泌量最大HCG是一種不隨胎盤(pán)重量增加而分泌增長(zhǎng)的胎盤(pán)激素,31,高級(jí)課件,HCG的結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)中包括與兩個(gè)非共價(jià)鍵結(jié)合的亞基。亞基與LH，F(xiàn)SH，及TSH的亞基相似，能與這些激素產(chǎn)生交叉免疫反應(yīng)而亞基與這些激素有較大的差異，不存在于其他激素中，決定了生物活性和免疫活性的高特異性。臨床上采用高效的抗HCG亞基現(xiàn)試劑盒為HCG-試劑,32,高級(jí)課件,HCG檢測(cè)方法,1，ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2，單克隆抗體膠體金試驗(yàn)3，化學(xué)發(fā)光免疫法4，放射免疫技術(shù)5，膠乳凝集抑制實(shí)驗(yàn)6，血凝抑制試驗(yàn)：載體不同，吸附于RBC上,33,高級(jí)課件,膠乳凝集抑制試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)原理將含有可溶性抗原的待測(cè)標(biāo)本先與已知抗體混合，充分作用后再加入抗原致敏的膠乳顆粒，因抗體已與標(biāo)本中的可溶性抗原結(jié)合，膠乳顆粒不再出現(xiàn)可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。,34,高級(jí)課件,結(jié)果判斷,若試驗(yàn)出現(xiàn)明顯的凝集為陰性反應(yīng)，即H