抗體偶聯(lián)藥物

1、抗體偶聯(lián)藥物,目錄,定義 原理 對Ag、Ab、連接子和藥物分子的要求 抗體的突變 幾種ADC定點偶聯(lián)方法的比較 連接方式 ADC偶聯(lián)比的測定方法 上市的藥品 前景 挑戰(zhàn),一、什么是ADC,二、原理,藥物分子,藥物 分子,高毒性,靶點,分子量,溶解度,穩(wěn)定性,三、對抗體、藥物、連接子、靶標(biāo)和抗原的要求,藥物分子,藥物 分子,高毒性,靶點,分子量,溶解度,穩(wěn)定性,因為IgG有限的腫瘤穿透能力、低抗原表達性、內(nèi)化效率不足和連接子代謝，均可能使細胞內(nèi)的毒素濃度降低。通常為IC50：0.01-0.1nmol/L,藥物分子,藥物 分子,高毒性,靶點,分子量,溶解度,穩(wěn)定性,必須位于細胞內(nèi),若ADC無法轉(zhuǎn)運

2、至細胞內(nèi)將嚴(yán)重影響藥物的有效性和毒性。在細胞外還可能影響，藥物解離后可能對旁邊的正常細胞有害。,藥物分子,藥物 分子,高毒性,靶點,分子量,溶解度,穩(wěn)定性,藥物的分子量較小，從而減少發(fā)生免疫原性的風(fēng)險；抗體的分子量也要很小，IgG抗體的分子量約為150kD，毛細管內(nèi)皮層和細胞外間隙難以透過如此巨大的抗體或偶聯(lián)分子，抗體的分子量太小，會影響其在體內(nèi)的半衰期。,藥物分子,藥物 分子,高毒性,靶點,分子量,溶解度,穩(wěn)定性,應(yīng)在水性緩沖溶液中具有適當(dāng)?shù)娜芙舛龋员阌谂悸?lián)抗體,藥物分子,藥物 分子,高毒性,靶點,分子量,溶解度,穩(wěn)定性,負載應(yīng)在血漿中具有充分的穩(wěn)定性。,美登素類化合物,1 作用機制：通過

3、抑制微管組裝來抑制細胞的分裂 2 DM1臨床研究發(fā)現(xiàn)：穩(wěn)定、非裂解的硫醚鍵連接子（MCC)具有高效的療效,毒素主要在細胞增殖過程中發(fā)揮作用，對其非分裂和靜息的細胞沒有作用,01,與分子的疏水性有關(guān)（連接子也是疏水性的：在血液或代謝器官（肝臟、腎臟）中意外釋放游離型毒素可穿透細胞膜，并可能引起嚴(yán)重的副作用,02,耐藥腫瘤細胞可能會限制ADC的活性（由藥物轉(zhuǎn)運蛋白表達或活性增加，加快疏水性化合物外排造成,03,作用微管的ADC藥物的缺陷,目前開發(fā)帶有負電荷-磺酸基或極性短PEG的高度水溶性親水性連接子，以增加溶解性,1,4,- Description of the sub contents 1.在

4、血漿中穩(wěn)定，避免細胞毒素提前釋放損傷正常的組織或細胞 ption of the sub contents,2.當(dāng)ADCs被內(nèi)吞到靶細胞后，能夠快速釋放藥物（非必須） - Description of the sub contents - Description of the sub contents,3.抗體的連接位點和連接位點的數(shù)量要明確且合適 - Description of the sub contents - Description of the sub contents,2,3,4.連接子的分子量和極性escription of the sub contents - Descript

5、ion of the sub contents,連接子,5、親和素和生物素能否作為連接臂？,一定的內(nèi)吞速率,抗原大量特異性的表達在靶細胞表面在正常組織或細胞表面不表達或少表達,抗原應(yīng)盡量不分泌，因為分泌型抗原可與血液循環(huán)中抗體結(jié)合，從而導(dǎo)致與腫瘤細胞結(jié)合的抗體減少,有合適的內(nèi)吞轉(zhuǎn)運途徑,要求,理想化的抗原,（四）理想化的抗體,靶向功能，能夠有效地將細胞毒分子輸送到靶細胞； 具有較低的免疫原性。 具有合適的連接位點，偶聯(lián)毒素后，不影響ADC的穩(wěn)定性、親和力、內(nèi)吞及藥效,與靶細胞表面的抗原結(jié)合后，能夠誘導(dǎo)細胞進行內(nèi)吞作用，進入胞內(nèi)，最終進入溶酶體并導(dǎo)致細胞毒分子在胞內(nèi)的有效釋放；（內(nèi)化-流式細胞術(shù)

6、檢測；細胞內(nèi)化后定位檢測-共聚焦顯微鏡）保持裸抗體全部或部分功能，如細胞介導(dǎo)的抗體依賴性細胞毒作用（ADCC)、補體依賴性細胞毒作用(CDC)，即裸抗體也是有效的藥物。,四、抗體的突變,缺點：偶聯(lián)的藥物分子數(shù)目不定、位置不定和各種產(chǎn)物在體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)、藥效、安全性等問題。,方法：抗體進行誘導(dǎo)突變，現(xiàn)有報道在抗體的特定部位設(shè)計丙氨酸定點突變成半胱氨酸、引入非天然氨基酸、酶法和二硫鍵改造法等，可以獲得固定偶聯(lián)比的ADC。,五、幾種ADC定點偶聯(lián)的方法比較,連接方式,機制,缺點,改進,應(yīng)用,SGN-75(抗CD70，Val-Cit-MMAF）,肽鏈接,血液的pH高于溶酶體內(nèi)的pH，溶酶體內(nèi)的蛋

7、白水解酶在血液中的活性很低，ADC在胞內(nèi)被蛋白水解酶水解，釋放藥物,藥物直接連接到肽連接子上，會導(dǎo)致蛋白水解釋放出細胞毒素藥物的氨基酸加合物，會降低細胞毒活性,加入間隔基，常用是雙功能性對氨基芐醇基團，他通過氨基與肽連接，形成酰胺鍵而含胺細胞毒性藥物側(cè)通過氨基甲酸酯官能團與連接子（PABC)的芐基羥基相連。,七、ADC藥物偶聯(lián)比的測定方法,1、紫外可見分光光度法 抗體為蛋白質(zhì), 其含有苯環(huán)的氨基酸在 280 nm有其特征性的吸收峰；若藥物有紫外吸收其在特定的波長產(chǎn)生消光系數(shù)，產(chǎn)生特征性的吸收峰?？梢杂秒p波長發(fā)測定藥物的偶聯(lián)比。,2.液質(zhì)聯(lián)用測定ADC藥物的偶聯(lián)比,利用Ab、連接臂和藥物極性的不同，選用合適的流動相，使其彼此分開，然后分別流入質(zhì)譜儀，各樣品被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖，讀出其相對分子質(zhì)量，進而測定其偶聯(lián)比。,八、上市ADC藥品,九、前景與挑戰(zhàn),用于精確治療疾病，減少藥物在體內(nèi)的毒副作用 用于腫瘤的治療，特別是后期，減少對人體的傷害,挑戰(zhàn),ADCs產(chǎn)業(yè)化制備工藝復(fù)雜，包括重組抗體制備、化學(xué)藥物與抗體的偶聯(lián)